【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物，具體地，本專利技術涉及含有socs3敲除和/或嵌合抗原受體的多能干細胞、免疫細胞、組合物、制藥用途。
技術介紹
1、細胞過繼性療法使用來自患者和供體的免疫細胞曾獲得極大成功，然而，通用型、批次均一、功能增強的免疫細胞制備仍較為困難，尤其是需要進一步提升這些免疫細胞的體外和體內持久性。t細胞和自然殺傷(nk)細胞等淋巴細胞可有效殺傷腫瘤細胞，在先天性和適應性免疫中發揮重要作用，是目前過繼性細胞治療的主要效應物。然而，目前這些細胞在體外及體內擴增能力，持久能力及抗腫瘤能力仍需要進一步改進。
2、自然殺傷(nk)細胞是一種能夠快速殺死病毒感染細胞和腫瘤細胞的自然存在的淋巴非t細胞。它可以通過一組激活和抑制受體來識別腫瘤細胞從而啟動對腫瘤系統的殺傷。作為先天免疫系統的關鍵組分，nk細胞是淋巴細胞群在抗腫瘤和抗感染免疫方面的重要效應子。然而，病人腫瘤進展和慢性感染過程中往往伴隨nk細胞耗竭，導致其免疫監視和抗腫瘤功能受限，限制了nk細胞在免疫監視，抗腫瘤和抗感染方面的潛力。細胞過繼性療法(如自體嵌合抗原受體(car)t細胞)在血液瘤患者中的巨大成功及相關細胞治療產品上市引起了人們利用基因編輯的免疫細胞治療癌癥的極大興趣。car-t細胞的成功也激發了人們探索其他免疫細胞類型(如nk細胞)的臨床應用的努力。和t細胞相比，nk細胞無tcr，異體移植不會產生移植物抗宿主病(gvhd)、細胞因子風暴、神經毒性等，更適于制備為通用型免疫細胞治療藥物。nk細胞有多個來源，包括外周血、臍帶血、nk92細胞系、以及多能干細胞
3、細胞因子對nk細胞的預激活至關重要，白介素2(il-2)和白介素15(il-15)可以提升nk細胞激活受體的信號傳導，維持nk細胞的活性或功能。il-15與il-2結構十分相似，il-15的異三聚體受體與il-2受體共用il-2r/il-15rβ(cd122)和共同γ鏈(cd?132)。這些共同的受體成分共用jak?1/jak?3/stat?5信號通路，il-15和il-2功能相似，包括刺激t細胞增殖、產生細胞毒性t淋巴細胞、刺激b細胞合成免疫球蛋白以及nk細胞的產生和持續存活。然而，il-2容易造成全身性的毒性；在體外培養過程中，持續性高劑量(10ng/ml)il-15刺激培養也會導致nk細胞低存活率及細胞周期停滯，并伴隨信號傳導減弱、在體內及體外功能降低，以及抗腫瘤活性降低。這表明持續性高劑量的il-15培養會導致nk細胞耗竭(doi.org/10.1172/jci.insight.96219)。在體內，高劑量il-15容易造成一些副作用，包括低血壓、血小板減少、轉氨酶水平升高、胰腺炎，心臟胸痛伴伴低血壓和肌鈣蛋白水平升高等(https://doi.org/10.1038/s41573-019-0052-1)。因此，如何提升nk細胞對il-15的敏感性，以達到ink在生理狀態下或低劑量il-15維持其在體內的活性以及持久性對于基于nk細胞的免疫療法非常關鍵。socs家族蛋白，包括cish和socs1-7，可由細胞因子誘導，并進而抑制細胞因子信號傳導，形成經典的負反饋回路。cish曾被鑒定為nk細胞的一個免疫檢查點(https://doi:10.1038/ni.3470)，在ipsc中敲除cish可以提升其分化而來nk細胞對il15的敏感性，并增強其擴增能力和抗腫瘤活性。然而，cish敲除ipsc在分化為ink過程中會延遲出現cd56+ink(https://doi.org/10.1016/j.stem.2020.05.008)，目前尚不清楚具體原因，提示cish-/-對人nk細胞發育的影響尚待進一步研究。此外，對于多能干細胞來源的免疫細胞，如何提升其分化而來的免疫細胞及nk細胞的產率對于工業化制備臨床可用的免疫細胞尤為重要。
4、因此，亟需開發可提升免疫細胞及nk細胞的持久性、抗腫瘤活性以及擴增性能的方案，以及提升多能干細胞分化免疫細胞及nk細胞的方法。
技術實現思路
1、本專利技術旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此，本專利技術的一個目的在于提供一種免疫細胞，通過基因修飾，獲得的工程化免疫細胞(尤其是nk細胞)具有增強的擴增能力、抗腫瘤活性、以及持久性(在體外或體內可長期存活)。同時，相關基因修飾可提升ipsc分化為免疫細胞及nk細胞產率和激活受體及共刺激因子表達。
2、為此，在本專利技術的第一方面，本專利技術提供一種細胞或由其組成的群體。根據本專利技術的實施方案，所述細胞具有以下特征：
3、(i)所述細胞為：(a)誘導多能干細胞或商用胚胎干細胞；或(b)由(a)所述細胞分化獲得的衍生細胞；
4、(ii)所述細胞中socs3基因被敲除；和/或
5、(iii)所述細胞包含嵌合抗原受體和/或編碼嵌合抗原受體的多核苷酸。
6、根據本專利技術的實施方案，所述細胞為誘導多能干細胞且通過基因編輯或者同源重組方式敲除了細胞中的socs3基因。
7、根據本專利技術的實施方案，所述細胞為由誘導多能干細胞或商用胚胎干細胞誘導分化獲得的免疫細胞。
8、根據本專利技術的實施方案，所述免疫細胞包括nk細胞、t細胞、巨噬細胞。
9、根據本專利技術的實施方案，所述嵌合抗原受體包括胞外域、跨膜域和胞內域，所述跨膜域與所述胞外域相連，所述胞內域與所述跨膜域相連。
10、根據本專利技術的實施方案，所述胞外域包括能夠特異性識別腫瘤抗原、炎癥相關因子、病毒表面糖蛋白的抗體或其抗原結合片段。
11、根據本專利技術的實施方案，所述腫瘤抗原為gprc5d。
12、根據本專利技術的實施方案，所述細胞包含高親和力、不可裂解的cd16(hncd16)或其變體的表達。
13、根據本專利技術的實施方案，所述細胞包含一種或多種內源基因失活或其表達受抑制，所述內源基因包括選自tgfbr2、pvr、nkg2a、tap1、tap2、tapasin、nlrc5、pd1、lag3、tim3、tigit、cd38、tcr基因中的至少之一。
14、根據本專利技術的實施方案，所述內源基因為cd38基因。
15、根據本專利技術的實施方案，所述細胞包含膜結合細胞因子的表達。
16、根據本專利技術的實施方案，所述膜結合細胞因子包括選自il15、il21、il7、il3中的至少之一。
17、根據本專利技術的實施方案，所述膜結合細胞因子為il15。
18、根據本專利技術的實施方案，所述細胞中：(a)b2m和ciita基因被敲除或降低表達；和(b)引入hla-e、hla-g、cd47中至少之一，其中hla-e或hla-g包括其不可裂解形式。
19、本專利技術第二方面提出了一種免疫細胞。根據本專利技術的實施方案，所述免疫細本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞具有以下特征：
2.根據權利要求1所述的細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞為誘導多能干細胞且通過基因編輯或者同源重組方式敲除了細胞中的SOCS3基因。
3.根據權利要求1所述的細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞為由誘導多能干細胞或商用胚胎干細胞誘導分化獲得的免疫細胞，
4.根據權利要求1所述的細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞包含高親和力、不可裂解的CD16(hnCD16)或其變體的表達。
5.根據權利要求1所述的細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞包含一種或多種內源基因失活或其表達受抑制，所述內源基因包括選自TGFBR2、PVR、NKG2A、TAP1、TAP2、Tapasin、NLRC5、PD1、LAG3、TIM3、TIGIT、CD38、TCR基因中的至少之一；
6.根據權利要求1所述的細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞包含膜結合細胞因子的表達；
7.根據權利要求1所述的細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞中：(A
8.一種免疫細胞，其特征在于，所述免疫細胞中SOCS3基因被敲除，且所述免疫細胞的表面含有嵌合抗原受體，
9.根據權利要求8所述的免疫細胞，其特征在于，所述免疫細胞中SOCS3基因通過基因編輯或者同源重組方式敲除；
10.根據權利要求8所述的免疫細胞，其特征在于，所述抗體含有選自下列至少之一的CDR序列或與其具有至少90％同一性的氨基酸序列：
11.根據權利要求8所述的免疫細胞，其特征在于，所述抗體包括：
12.根據權利要求9所述的免疫細胞，其特征在于，所述雙特異性結合分子進一步包括第二結合區，所述第二結合區具有結合淋巴細胞上特異性表達的抗原的活性；
13.根據權利要求8所述的免疫細胞，其特征在于，所述嵌合抗原受體的胞外域通過鉸鏈域與所述跨膜域相連；
14.根據權利要求8-13中任一項所述的免疫細胞，其特征在于，
15.根據權利要求8所述的免疫細胞，其特征在于，所述免疫細胞通過外周血、臍帶血或組織、器官分離獲得，或者所述免疫細胞由干細胞、免疫細胞祖細胞分化獲得；
16.一種組合物，其特征在于，含有權利要求1-7中任一項所述的細胞或由其組成的群體和/或權利要求8-15中任一項所述的免疫細胞。
17.權利要求1-7中任一項所述的細胞或由其組成的群體、權利要求8-15中任一項所述的免疫細胞、權利要求16所述的組合物在制備治療疾病的藥物中的用途，其特征在于，所述疾病為血液瘤或實體瘤、病毒感染、自身免疫異常相關的疾病。
18.根據權利要求17所述的用途，其特征在于，所述血液瘤或實體瘤為GPRC5D相關的疾病；
...【技術特征摘要】
1.一種細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞具有以下特征：
2.根據權利要求1所述的細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞為誘導多能干細胞且通過基因編輯或者同源重組方式敲除了細胞中的socs3基因。
3.根據權利要求1所述的細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞為由誘導多能干細胞或商用胚胎干細胞誘導分化獲得的免疫細胞，
4.根據權利要求1所述的細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞包含高親和力、不可裂解的cd16(hncd16)或其變體的表達。
5.根據權利要求1所述的細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞包含一種或多種內源基因失活或其表達受抑制，所述內源基因包括選自tgfbr2、pvr、nkg2a、tap1、tap2、tapasin、nlrc5、pd1、lag3、tim3、tigit、cd38、tcr基因中的至少之一；
6.根據權利要求1所述的細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞包含膜結合細胞因子的表達；
7.根據權利要求1所述的細胞或由其組成的群體，其特征在于，所述細胞中：(a)b2m和ciita基因被敲除或降低表達；和(b)引入hla-e、hla-g、cd47中至少之一的表達，其中hla-e或hla-g包括其不可裂解形式。
8.一種免疫細胞，其特征在于，所述免疫細胞中socs3基因被敲除，且所述免疫細胞的表面含有嵌合抗原受體，
9.根據權利要求8所述的...
【專利技術屬性】
技術研發人員：楊佳銀，付建，閆玉波，朱智彬，江利香，魏明軍，楊波，
申請(專利權)人：深圳市三啟生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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