【技術實現步驟摘要】
本公開涉及生物醫藥領域，特別地，本公開涉及一種通用型嵌合抗原受體t細胞。
技術介紹
1、嵌合抗原受體t細胞技術是基于從血液循環中分離出來的t淋巴細胞，然后將其工程化以表達嵌合抗原受體(cars)，使修飾的t淋巴細胞能夠獨立于主要組織相容性復合體(mhc)的參與來識別和響應癌細胞。體外增殖后，這些細胞被重新輸注到患者體內，以驅動抗腫瘤免疫反應。第一代car使用細胞外抗原結合域(通常是抗體的單鏈可變片段)、跨膜域和胞內信號域cd3z鏈。第二代car增加了cd28/4-1bb/ox40等共刺激分子，car-t細胞的抗腫瘤能力和在體內存活能力得以提高。第三代car結構通過配對共刺激分子形成。第四代car被進一步修飾，通過分泌細胞因子增強細胞活力，并且激活替他免疫細胞。car-t細胞通常使用病毒載體進行轉導，其中以慢病毒載體居多，具有良好的轉染效率和穩定的表達。
2、自體car-t細胞治療往往由于功能障礙和腫瘤污染而存在缺陷，使得治療的安全性有效性受到影響。同種異體t細胞存在tcr-mhc屏障，可能導致嚴重的移植物抗宿主病(gvhd)，副作用大且持續時間短。目前利用crispr/cas9或者talen技術可對t細胞進行多基因同時敲除，失活t細胞抗原受體(tcr)和主要組織相容性復合體(mhcⅰ、mhcⅱ)來降低免疫排斥反應的安全有效的通用型car-t細胞。但盡管如此，敲除hlaⅰ、hlaⅱ的通用型car-t細胞會引起同種異體nk細胞的“識別”和“攻擊”，導致nk細胞會識別通用型car-t細胞并對其清除，這樣會使car-t細胞抗
技術實現思路
1、解決的技術問題：
2、本專利技術的一個方面，是針對現有技術中通用型car-t細胞治療存在的治療效果差的問題，提供了一種新的通用型嵌合抗原受體t細胞。
3、具體地，現有技術中，來源于自體的嵌合抗原受體t(car-t)細胞存在腫瘤細胞污染白細胞、化療導致t細胞低活力和低質量、可能的制備失敗以及延遲血液病治療等局限性。同種異體療法指細胞來源于相同物種但基因不同的個體。由于健康供者體內t淋巴細胞數目多、功能良好，因此可以保障car-t具有較高的感染效率、增殖能力以及體內抗腫瘤能力。但由于供受體之間存在免疫遺傳學差異，異體car-t細胞輸入病人體內會引起宿主抗移植物反應(host?versus?graft?reaction，hvgr)與移植物抗宿主反應(graft?versus?hostreaction，gvhr)，hvgr與gvhr相關基因包含tcr、主要組織相容性復合體(mhcⅰ、mhcⅱ)相關基因，單個trac基因是編碼tcrɑ鏈的基因與編碼tcrβ的兩個trbc基因形成完整的有功能的tcr復合物，敲除trac是可以達到致使tcr失活的最優方案，b2m和ciita分別為mhcⅰ、mhcⅱ相關基因，以上三個基因同時敲除的t淋巴細胞在回輸入同種異體病人時不會引起移植物抗宿主病(gvhd)。
4、敲除hlaⅰ、hlaⅱ的通用型car-t細胞會引起同種異體nk細胞的“識別”和“攻擊”，導致nk細胞會識別通用型car-t細胞并對其清除，這樣會使car-t細胞抗腫瘤效果打折扣。本公開技術方案中過表達了類凝集素轉錄體1(llt1)基因。并通過實驗驗證了通用型car-t細胞在過表達llt1分子后，car-t細胞依然保持了良好的增殖、擴增、殺傷能力，同時擁有較低的免疫原性，良好的抗nk細胞裂解能力，從而解決了上述問題。
5、技術方案：
6、一種通用型嵌合抗原受體t細胞，所述通用型嵌合抗原受體包含胞外區、跨膜區和胞內區，所述胞內區包含胞內信號轉導區，所述胞內區還包含直接或間接連接在所述胞內信號轉導區末端的類凝集素轉錄體1(llt1)分子。
7、在本公開的某些實施方式中，所述胞內區還可以包含通過連接體連接在所述胞內信號轉導區末端的類凝集素轉錄體1(llt1)分子，所述連接體選自p2a肽。
8、在本公開的某些實施方式中，所述t細胞的基因組中可以不包含編碼所述胞外區中的結合結構域所結合的蛋白質的基因。
9、優選地，在本公開的某些實施方式中，上述蛋白質可以選自cd38、cd5、cd7、cd19、cd20、cd22、cd32b、cd33、cd64、cd123、mesothelin、her2、ca125、gd2、claudin18.2或egfr。
10、在本公開的某些實施方式中，所述t細胞的基因組中可以不包含編碼b2m、ciita和trac的基因。
11、優選地，在本公開的一個實施方式中，所述通用型嵌合抗原受體t細胞中的通用型嵌合抗原受體可以表達類凝集素轉錄體1(llt1)分子；
12、所述通用型嵌合抗原受體t細胞中的t細胞的基因組中可以不包含：
13、1)編碼所述胞外區中的結合結構域所結合的蛋白質的基因，和
14、2)編碼b2m、ciita和tcr的基因。
15、在本公開的某些實施方式中，所述t細胞可以來自血液中分離的t細胞或誘導多能干細胞(ipscs)。
16、在本公開的某些實施方式中，所述通用型嵌合抗原受體可以為第一代car、第二代car、第三代car或第四代car。
17、本公開的另一個方面，是提供了上述通用型嵌合抗原受體t細胞的制備方法，包括：
18、步驟1)根據所述通用型嵌合抗原受體的序列構建病毒表達載體并進行包裝；
19、步驟2)構建基因編輯系統；
20、步驟3)利用電轉系統將步驟2)中獲得的rnp轉入分離的t淋巴細胞；
21、步驟4)將步驟3)獲得的細胞常規條件培養24小時后收集細胞，用步驟1)獲得的病毒感染收集的細胞，所述細胞經培養、分選后得到所述通用型嵌合抗原受體t細胞。
22、本公開的另一個方面，是提供了上述通用型嵌合抗原受體t細胞在制備治療腫瘤的藥物中的用途。
23、優選地，在本公開的某些實施方式中，所述腫瘤為血液腫瘤。
24、進一步優選地，在本公開的某些實施方式中，所述腫瘤為多發性骨髓瘤、急性淋巴細胞白血病、急性髓系細胞白血病、非霍奇金淋巴瘤或慢性淋巴細胞白血病。
25、有益效果：
26、本公開提供的通用型car-t細胞應用于臨床治療時，可以投入標準化大量生產，在治療時不需采集病人的t淋巴細胞，因此不受病人的病情和治療方法限制。選擇通用型car-t的病人可以得到及時治療不會拖延病情。健康人淋巴細胞具有更高的活性和功能，以此制備的通用型car-t可具有更高的car陽性率以及細胞增殖水平，因而可對患者的病情發揮更顯著的治療效本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種通用型嵌合抗原受體T細胞，所述通用型嵌合抗原受體包含胞外區、跨膜區和胞內區，所述胞內區包含胞內信號轉導區，其特征在于，所述胞內區還包含直接或間接連接在所述胞內信號轉導區末端的類凝集素轉錄體1(LLT1)分子。
2.根據權利要求1所述的通用型嵌合抗原受體T細胞，其特征在于，所述胞內區還包含通過連接體連接在所述胞內信號轉導區末端的類凝集素轉錄體1(LLT1)分子，所述連接體選自P2A肽。
3.根據權利要求1所述的通用型嵌合抗原受體T細胞，其特征在于，所述通用型嵌合抗原受體T細胞，其特征在于，所述T細胞的基因組中不包含編碼所述胞外區中的結合結構域所結合的蛋白質的基因。
4.根據權利要求3所述的通用型嵌合抗原受體T細胞，其特征在于，所述蛋白質選自CD38、CD5、CD7、CD19、CD20、CD22、CD32b、CD33、CD64、CD123、mesothelin、Her2、CA125、GD2、Claudin18.2或EGFR。
5.根據權利要求1所述的通用型嵌合抗原受體T細胞，其特征在于，所述T細胞的基因組中不包含編碼B2M、CI
6.根據權利要求1所述的通用型嵌合抗原受體T細胞，其特征在于，所述通用型嵌合抗原受體T細胞中的通用型嵌合抗原受體表達類凝集素轉錄體1(LLT1)分子；
7.根據權利要求1或6所述的通用型嵌合抗原受體T細胞，其特征在于，所述T細胞來自血液中分離的T細胞或誘導多能干細胞(iPSCs)。
8.根據權利要求1或6所述的通用型嵌合抗原受體T細胞，其特征在于，所述通用型嵌合抗原受體為第一代CAR、第二代CAR、第三代CAR或第四代CAR。
9.如權利要求1～8任意一項中所述的通用型嵌合抗原受體T細胞的制備方法，其特征在于，包括：
10.如權利要求1～8任意一項中所述的通用型嵌合抗原受體T細胞在制備治療腫瘤的藥物中的用途；
...【技術特征摘要】
1.一種通用型嵌合抗原受體t細胞，所述通用型嵌合抗原受體包含胞外區、跨膜區和胞內區，所述胞內區包含胞內信號轉導區，其特征在于，所述胞內區還包含直接或間接連接在所述胞內信號轉導區末端的類凝集素轉錄體1(llt1)分子。
2.根據權利要求1所述的通用型嵌合抗原受體t細胞，其特征在于，所述胞內區還包含通過連接體連接在所述胞內信號轉導區末端的類凝集素轉錄體1(llt1)分子，所述連接體選自p2a肽。
3.根據權利要求1所述的通用型嵌合抗原受體t細胞，其特征在于，所述通用型嵌合抗原受體t細胞，其特征在于，所述t細胞的基因組中不包含編碼所述胞外區中的結合結構域所結合的蛋白質的基因。
4.根據權利要求3所述的通用型嵌合抗原受體t細胞，其特征在于，所述蛋白質選自cd38、cd5、cd7、cd19、cd20、cd22、cd32b、cd33、cd64、cd123、mesothelin、her2、ca125、gd2、cla...
【專利技術屬性】
技術研發人員：馮曉明，羅悅晨，朱姝嫻，
申請(專利權)人：中國醫學科學院血液病醫院中國醫學科學院血液學研究所，
類型：發明
國別省市：
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