【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本申請(qǐng)涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及glp-1類似物融合蛋白及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、胰高血糖素樣肽(glp)是一種由胰高血糖素原基因翻譯表達(dá)的一種多肽，它通過與相應(yīng)的g蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合發(fā)揮生物效應(yīng)。glp可以顯著的提高一、二相胰島素分泌，降低胰高血糖素水平，并延緩胃排空，由于其降低血糖的效應(yīng)具有血糖依賴性并且具有降低體重的作用，因此glp及其類似物被廣泛應(yīng)用于2型糖尿病的治療研究并緩解肥胖所造成的胰島素耐受。
2、海外獲批的減肥藥物眾多，出現(xiàn)過各種類別的減肥藥物，例如線粒體解偶聯(lián)劑、擬交感神經(jīng)藥、大麻素1受體(cb1)拮抗劑、脂酶抑制劑、血清素(5-ht)受體激動(dòng)劑和glp-1受體激動(dòng)劑等。但是大部分的藥物由于極為嚴(yán)重的不良反應(yīng)，例如嚴(yán)重的心血管副作用(西布曲明、氟苯丙胺、鹽酸右芬氟拉明和彩虹丸)、自殺傾向(利莫那班)、存在藥物依賴和濫用風(fēng)險(xiǎn)(甲基苯丙胺)，在獲批后紛紛被撤回使用。
3、國內(nèi)外獲批的減肥藥物中，glp-1受體激動(dòng)劑類藥物的副作用相對(duì)較小。因此有必要開發(fā)一款glp-1受體激動(dòng)劑類藥物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、基于現(xiàn)有技術(shù)的需求，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环Nglp-1類似物融合蛋白及其應(yīng)用。
2、首先本申請(qǐng)的一種glp-1類似物融合蛋白，其是在igg4重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的n端分別融合胰高血糖素樣肽glp-1得到。
3、優(yōu)選地，所述胰高血糖素樣肽glp-1的氨基酸序列如seq?id?no.1所示；igg4重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列如seq?id?
4、具體的，igg4重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的n端分別通過連接肽融合胰高血糖素樣肽glp-1，優(yōu)選地，所述連接肽的氨基酸序列如seq?id?no.3所示。
5、igg4重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的n端融合胰高血糖素樣肽glp-1得到的氨基酸序列分別如seq?id?no.5、seq?id?no.9所示；
6、進(jìn)一步地，glp-1的n端融合有信號(hào)肽；優(yōu)選地，所述信號(hào)肽的氨基酸序列如seq?idno.2所示。本專利技術(shù)通過研究確定采用的信號(hào)肽使得glp-1的表達(dá)量具有更高的水平。
7、本專利技術(shù)還提供所述的glp-1類似物融合蛋白的編碼核酸。
8、優(yōu)選地，編碼igg4重鏈恒定區(qū)n端融合胰高血糖素樣肽glp-1的核苷酸序列如seqid?no.6所示，編碼igg4輕鏈恒定區(qū)n端融合胰高血糖素樣肽glp-1的核苷酸序列如seq?idno.10所示。
9、本專利技術(shù)提供所述的編碼核酸的重組表達(dá)載體。
10、本專利技術(shù)提供一種制備產(chǎn)glp-1類似物融合蛋白的細(xì)胞株的方法，其通過將所述的編碼核酸轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞得到，優(yōu)選地，所述哺乳動(dòng)物是cho細(xì)胞；優(yōu)選地通過構(gòu)建含有所述的編碼核酸的重組表達(dá)載體，線性化后轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞得到。
11、本專利技術(shù)提供所述的方法獲得的產(chǎn)glp-1類似物融合蛋白的細(xì)胞株。
12、本專利技術(shù)尤其提供所述的glp-1類似物融合蛋白、所述的細(xì)胞株在制備減肥產(chǎn)品、或用于治療脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。
13、本專利技術(shù)的研究結(jié)果顯示，與對(duì)照相比，本申請(qǐng)glp-1類似物融合蛋白具有明顯的降低小鼠體重的作用，小鼠肝臟的體積和重量均出現(xiàn)下降，nas評(píng)分以及肝脂肪變性可見顯著改善。本申請(qǐng)glp-1類似物融合蛋白可應(yīng)用于瘦身減肥、治療脂肪肝的藥物或產(chǎn)品中。
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1.一種GLP-1類似物融合蛋白，其特征在于，是在IgG4重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的N端分別融合胰高血糖素樣肽GLP-1得到。
2.如權(quán)利要求1所述的GLP-1類似物融合蛋白，其特征在于，所述胰高血糖素樣肽GLP-1的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；
3.如權(quán)利要求1所述的GLP-1類似物融合蛋白，其特征在于，所述IgG4重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的N端分別通過連接肽融合胰高血糖素樣肽GLP-1，優(yōu)選地，所述連接肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；
4.如權(quán)利要求1所述的GLP-1類似物融合蛋白，其特征在于，所述胰高血糖素樣肽GLP-1的N端融合有信號(hào)肽；優(yōu)選地，所述信號(hào)肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。
5.如權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的GLP-1類似物融合蛋白的編碼核酸。
6.如權(quán)利要求5所述的編碼核酸，其特征在于，編碼IgG4重鏈恒定區(qū)N端融合胰高血糖素樣肽GLP-1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示，編碼IgG4輕鏈恒定區(qū)N端融合胰高血糖素樣肽GLP-1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1
7.如權(quán)利要求5或6所述的編碼核酸的重組表達(dá)載體。
8.一種制備產(chǎn)GLP-1類似物融合蛋白的細(xì)胞株的方法，其特征在于，通過將如權(quán)利要求5或6所述的編碼核酸轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞得到，優(yōu)選地，所述哺乳動(dòng)物是CHO細(xì)胞；優(yōu)選地，通過構(gòu)建含有如權(quán)利要求5或6所述的編碼核酸的重組表達(dá)載體，線性化后轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞得到。
9.如權(quán)利要求8所述的方法獲得的產(chǎn)GLP-1類似物融合蛋白的細(xì)胞株。
10.如權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的GLP-1類似物融合蛋白、如權(quán)利要求9所述的細(xì)胞株在制備減肥產(chǎn)品、或用于治療脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種glp-1類似物融合蛋白，其特征在于，是在igg4重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的n端分別融合胰高血糖素樣肽glp-1得到。
2.如權(quán)利要求1所述的glp-1類似物融合蛋白，其特征在于，所述胰高血糖素樣肽glp-1的氨基酸序列如seq?id?no.1所示；
3.如權(quán)利要求1所述的glp-1類似物融合蛋白，其特征在于，所述igg4重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的n端分別通過連接肽融合胰高血糖素樣肽glp-1，優(yōu)選地，所述連接肽的氨基酸序列如seq?id?no.3所示；
4.如權(quán)利要求1所述的glp-1類似物融合蛋白，其特征在于，所述胰高血糖素樣肽glp-1的n端融合有信號(hào)肽；優(yōu)選地，所述信號(hào)肽的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。
5.如權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的glp-1類似物融合蛋白的編碼核酸。
6.如權(quán)利要求5所...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張海江，張愛晶，李杰，伍樹明，宋嘉，楊秀芬，郭建立，劉鵬，劉永江，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：北京康樂衛(wèi)士生物技術(shù)股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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