【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于干細胞，具體涉及一種間充質干細胞成骨分化潛力的檢測方法及檢測試劑盒。
技術介紹
1、間充質干細胞(mesenchymal?stem?cells，mscs)，是一種具有高度自我更新能力和多向分化潛能的成體干細胞，在特定的條件下可以誘導分化為脂肪、骨和軟骨等多種組織。間充質干細胞在成骨分化的誘導培養中，培養周期通常為14～28天，由于干細胞成骨誘導分化培養通常是體外進行培養研究，鑒于干細胞誘導分化的復雜性，體外定向誘導分化培養所需的培養基相對于傳統普通細胞培養基要昂貴得多。因此，提早評估間充質干細胞的成骨分化潛力是降低工業生產成本的一項重要舉措。
2、目前間充質干細胞的成骨分化潛能的評估方法為通過染色鑒定進行定性分析，該方法易受不同操作人員和不同批次染料的影響，從而導致結論差異巨大。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術的目的在于提供一種間充質干細胞成骨分化潛力的檢測方法及檢測試劑盒，能夠實現快速、定量檢測間充質干細胞的成骨分化潛能，從而大大降低干細胞工業培養成本。
2、本專利技術提供了一種間充質干細胞成骨分化潛力檢測試劑盒，包括runx2基因的qpcr檢測引物；
3、所述runx2基因的qpcr檢測引物包括核苷酸序列如seq?id?no:1所示的正向引物和核苷酸序列如seq?id?no:2所示的反向引物。
4、優選的，還包括內參基因擴增引物和qpcr檢測預混液。
5、優選的，所述內參基因擴增引物包括gapdh
6、所述gapdh基因擴增引物包括核苷酸序列如seq?id?no:3所示的正向引物和核苷酸序列如seq?id?no:4所示的反向引物。
7、本專利技術提供了一種間充質干細胞成骨分化潛力的檢測方法，包括以下步驟：
8、將間充質干細胞進行成骨誘導分化培養，在培養7～14d時，提取分化細胞的總rna，經逆轉錄得到分化組cdna；
9、將與分化組同批次的間充質干細胞直接提取總rna，經逆轉錄得到對照組cdna；
10、將兩組cdna為模板，采用權利要求1～4中任意一項所述試劑盒分別進行qpcr反應，根據公式i計算runx2基因的相對表達量，并判斷間充質干細胞成骨分化潛力：
11、當runx2基因的相對表達量≥2時，說明間充質干細胞的成骨分化潛力較強，且runx2基因的相對表達量與成骨分化潛力呈正比；
12、當runx2基因的相對表達量小于2時，間充質干細胞的成骨分化潛力較弱；公式i。
13、優選的，所述成骨誘導分化培養用培養基包括含質量百分含量8％～12％的成骨分化因子添加物的成骨分化基礎培養基。
14、優選的，所述qpcr反應的反應體系為10μl，包括2×tsingke*master?qpcr?mix-sybr(+udg)5μl、10μm正向引物0.5μl、10μm反向引物0.5μl、模板4.0μl。
15、優選的，所述qpcr反應的反應程序為50℃2min；95℃2min；95℃15sec，55℃30sec，72℃30sec，循環35次；單點熒光檢測溫度72℃。
16、優選的，所述間充質干細胞包括以下至少一種羊膜間充質干細胞、臍帶間充質干細胞和絨毛膜間充質干細胞。
17、優選的，所述間充質干細胞包括臍帶間充質干細胞。
18、本專利技術提供了一種間充質干細胞成骨分化潛力檢測試劑盒，包括runx2基因的qpcr檢測引物；所述runx2基因的qpcr檢測引物包括核苷酸序列如seq?id?no:1所示的正向引物和核苷酸序列如seq?id?no:2所示的反向引物。本專利技術通過檢測分化培養后的間充質干細胞的runx2基因的相對表達量，能夠準確反映細胞的成骨分化潛力。本專利技術提供的檢測試劑盒具有檢測方便，快速、準確的特點，且能夠定量判斷間充質干細胞成骨分化潛力。
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1.一種間充質干細胞成骨分化潛力檢測試劑盒，其特征在于，包括Runx2基因的qPCR檢測引物；
2.根據權利要求1所述間充質干細胞成骨分化潛力檢測試劑盒，其特征在于，還包括內參基因擴增引物和qPCR檢測預混液。
3.根據權利要求1所述間充質干細胞成骨分化潛力檢測試劑盒，其特征在于，所述內參基因擴增引物包括GAPDH基因擴增引物。
4.根據權利要求3所述間充質干細胞成骨分化潛力檢測試劑盒，其特征在于，所述GAPDH基因擴增引物包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQID?NO:4所示的反向引物。
5.一種間充質干細胞成骨分化潛力的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
6.根據權利要求5所述檢測方法，其特征在于，所述成骨誘導分化培養用培養基包括含質量百分含量8％～12％的成骨分化因子添加物的成骨分化基礎培養基。
7.根據權利要求5所述檢測方法，其特征在于，所述qPCR反應的反應體系為10μl，包括2×TsingKe*Master?qPCR?Mix-SYBR(+UDG)5μl、10μ
8.根據權利要求5所述檢測方法，其特征在于，所述qPCR反應的反應程序為50℃2min；95℃2min；95℃15sec，55℃30sec，72℃30sec，循環35次；單點熒光檢測溫度72℃。
9.根據權利要求5～8中任意一項所述檢測方法，其特征在于，所述間充質干細胞包括以下至少一種羊膜間充質干細胞、臍帶間充質干細胞和絨毛膜間充質干細胞。
10.根據權利要求9所述檢測方法，其特征在于，所述間充質干細胞包括臍帶間充質干細胞。
...【技術特征摘要】
1.一種間充質干細胞成骨分化潛力檢測試劑盒，其特征在于，包括runx2基因的qpcr檢測引物；
2.根據權利要求1所述間充質干細胞成骨分化潛力檢測試劑盒，其特征在于，還包括內參基因擴增引物和qpcr檢測預混液。
3.根據權利要求1所述間充質干細胞成骨分化潛力檢測試劑盒，其特征在于，所述內參基因擴增引物包括gapdh基因擴增引物。
4.根據權利要求3所述間充質干細胞成骨分化潛力檢測試劑盒，其特征在于，所述gapdh基因擴增引物包括核苷酸序列如seq?id?no:3所示的正向引物和核苷酸序列如seqid?no:4所示的反向引物。
5.一種間充質干細胞成骨分化潛力的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
6.根據權利要求5所述檢測方法，其特征在于，所述成骨誘導分化培養用培養基包括含質量百分含量8％～12...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李青青，楊文琦，華江舟，
申請(專利權)人：長沙干細胞與再生醫學工業技術研究院有限公司，
類型：發明
國別省市：
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