【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于動物物種來源鑒定領域，具體涉及一種同時檢測鴨和驢肉源性成分的引物、試劑盒、檢測方法及應用。
技術介紹
1、高質量的動物dna檢測在動物司法鑒定中發揮著越來越重要的作用。
2、肉源鑒別技術已經從形態學和基于蛋白質的檢測方法發展到了核酸檢測。我國相繼出臺了一系列動物源性成分核酸檢測的國家標準，包括pcr法、實時熒光pcr法、sanger測序法等等，為動物源性成分的鑒定提供了依據。但是，這些方法專業要求高、儀器設備要求高、價格昂貴、耗時長，需要專業的技術人員，這不適合現場即刻分析。
3、因此以rpa結合crispr-cas12a技術逐步顯現其高效快速特異性的優勢，為現場肉源性成分鑒定提供了新的方法。目前等溫擴增技術應用比較多的包括環介導等溫擴增檢測技術(lamp)，利用lamp技術用于動物肉源檢測方面，已有部分報道，如利用一種能同時檢測豬肉和鴨肉源性成分的恒溫擴增引物組及其試劑盒(專利申請號：201610880177.4)、一種食品中驢源成分快速檢測試方法及試劑盒(專利申請號：201910290775.x)，但是lamp引物對設計復雜，包含六條目的基因引物，這樣并不適合高效多物種鑒定。
4、因此，目前市場上急需一種成本低且能高效檢測多物種的肉源性鑒定方法。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種檢測鴨或驢肉源性成分的引物、試劑盒、檢測方法及引用，本專利技術提供的方法不僅能高效快速特異性檢測鴨或驢的肉源性成分，且檢測成本低，靈敏度高
2、為了實現上述目的，本專利技術提供如下技術方案：
3、本專利技術提供了一種檢測鴨或驢肉源性成分的cas12a-crrna引物，所述檢測鴨肉源性成分的cas12a-crrna引物如序列表seq?id?no.1所示；檢測驢肉源性成分的cas12a-crrna引物如序列表seq?id?no.2所示。
4、優選地，所述cas12a-crrna引物可特異性識別鴨和驢的dna序列；所述鴨的dna如序列表seq?id?no.5所示；所述驢的dna如序列表seq?id?no.6所示。
5、本專利技術還提供了一種擴增常見家禽家畜的rpa核酸等溫擴增引物組，包括核苷酸序列如seq?id?no.3所示的正向引物和核苷酸序列如seq?id?no.4所示的反向引物。
6、本專利技術還提供了一種檢測鴨或驢肉源性成分的rpa-crispr/cas12a試劑盒，所述試劑盒包括權利要求1所述cas12a-crrna引物和權利要求3所述引物組。
7、本專利技術還提供了上述cas12a-crrna引物或上述引物或上述試劑盒在檢測鴨或驢肉源性成分中的應用。
8、本專利技術還提供了一種檢測鴨或驢肉源性成分的方法，具體包括以下步驟：
9、s1、提取待測樣品dna；
10、s2、以步驟s1所得dna為模板，用權利要求3所述rpa引物進行rpa核酸恒溫擴增反應；
11、s3、將擴增產物加入到crispr-cas12a反應體系；所述crispr-cas12a檢測體系包括權利要求1所述cas12a-crrna引物和reporter；
12、s4、通過檢測reporter來判斷樣品中是否含有鴨或驢肉源性成分。
13、優選地，所述步驟s3中crispr-cas12a檢測體系還包括步驟s1的rpa反應產物和crispr/cas12a蛋白，所述reporter的序列是ttattt，該序列的5’端標記修飾熒光素fam，3’端標記生物素biotin。
14、優選地，所述步驟s2中rpa核酸恒溫擴增反應條件為恒溫39℃，20分鐘，然后終止反應；所述步驟s3中crispr-cas12a反應條件為恒溫45℃，10分鐘，然后終止反應。
15、優選地，所述步驟s4中所述檢測reporter的方式可以是熒光檢測或試紙條檢測等檢測方式。
16、本專利技術所選用膠體金核酸試紙條檢測方式中的膠體金核酸試紙條包括：樣本墊、含有膠體金納米顆粒au-np-熒光素fam標記抗體結合的復合物的結合墊、涂有鏈霉親和素用于捕獲生物素的t線、涂有山羊抗小鼠igg用于捕獲膠體金納米顆粒的c線、用于通過試紙條吸引液體的吸收墊。
17、更優選地，所述膠體金核酸試紙條檢測結果判定為：質控c線有條帶，而檢測t線無條帶，則含有目的基因；檢測t線和質控c線均有紅色條帶，則不含目的基因。
18、本專利技術的有益效果：
19、1.利于常見家禽家畜的線粒體兩端保守中間特異性的序列構建通用引物，方便多物種快速等溫擴增。
20、2.選擇的序列片段短，230bp左右，適合新鮮、處理過的、微量降解鴨、驢源性成分，更加適用于現實情況。
21、3.使用rpa等溫擴增反應速度快，引物設計簡單，反應溫度低，更適合現場使用。
22、4.根據線粒體中間特異性的序列構建crispr-cas12a體系引物crrna，特異性的識別鴨、驢肉源性成分。
23、5.本專利技術結合rpa等溫擴增和crispr-cas12a體系各自的優點，構建現場快檢動物源性成分的方法，為其他動物源性成分的檢測探索了新的途徑。
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1.一種檢測鴨或驢肉源性成分的Cas12a-crRNA引物，其特征在于，所述檢測鴨肉源性成分的Cas12a-crRNA引物如序列表SEQ?ID?NO.1所示；檢測驢肉源性成分的Cas12a-crRNA引物如序列表SEQ?ID?NO.2所示。
2.根據權利要求1所述Cas12a-crRNA引物，其特征在于，所述Cas12a-crRNA引物可特異性識別鴨和驢的DNA序列；所述鴨的DNA如序列表SEQ?ID?NO.5所示；所述驢的DNA如序列表SEQ?ID?NO.6所示。
3.一種擴增常見家禽家畜的RPA核酸等溫擴增引物組，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示的反向引物。
4.一種檢測鴨或驢肉源性成分的RPA-CRISPR/Cas12a試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述Cas12a-crRNA引物和權利要求3所述引物組。
5.權利要求1-2任一項所述Cas12a-crRNA引物或權利要求3所述引物或權利要求4所述試劑盒在檢測鴨或驢肉源性成分中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種檢測鴨或驢肉源性成分的cas12a-crrna引物，其特征在于，所述檢測鴨肉源性成分的cas12a-crrna引物如序列表seq?id?no.1所示；檢測驢肉源性成分的cas12a-crrna引物如序列表seq?id?no.2所示。
2.根據權利要求1所述cas12a-crrna引物，其特征在于，所述cas12a-crrna引物可特異性識別鴨和驢的dna序列；所述鴨的dna如序列表seq?id?no.5所示；所述驢的dna如序列表seq?id?no.6所示。
3.一種擴增常見家禽家畜的rpa核酸等溫擴增引物組，其特征在于，包括核苷酸序列如seq?id?no.3所示的正向引物和核苷酸序列如seq?id?no.4所示的反向引物。
4.一種檢測鴨或驢肉源性成分的rpa-crispr/cas12a試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述cas12a-crrna引物和權利要求3所述引物組。
5.權利要求1-2任一項所述cas12a-crrna引物或權利要求3所述引物或權利要求4所述試劑盒在檢測鴨或驢肉源性成分中的應用。
6.一種檢測鴨或驢肉源性成分的方法，其特征在于，...
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