【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物體液污染物檢測，具體涉及一種磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法。
技術介紹
1、隨著人類體液和器官中微米塑料(mps)和納米塑料(nps)的不斷檢出，它們潛在健康風險引起了全世界的廣泛關注。大量毒性研究顯示，由于nps具有更大的比表面積，表現出比微塑料更高的生物毒性。進入到動物體內的nps，可以穿透生物屏障，在多個組織器官(特別是大腦和生殖器官)中蓄積，表現出更高的生物毒性。研究發現，500nm的nps對斑馬魚的致炎作用明顯高于50μm的nps。盡管越來越多的證據表明了nps存在的普遍性和相關的毒性風險，但由于其尺寸小、濃度低，且生物基質復雜，實現人體內nps的準確定量仍然存在眾多的瓶頸問題。
2、目前，針對nps的富集和雜質去除的方法包括了膜過濾、超濾、超速離心、濁點萃取和溶劑蒸發等。然而，這些方法在抗干擾能力和環境污染等方面仍存面臨挑戰。相比之下，磁性納米顆粒因其操作簡便、高富集效率、低能耗等優勢而受到廣泛關注。磁性納米顆粒易于功能化的顯著優勢可選擇性吸附特定的污染物?？紤]到塑料的疏水特性，近年來常通過疏水性配體修飾磁性納米顆粒以增強對nps的吸附能力。然而，這些疏水性配體可能導致其在水中的分散性差、生產成本高和再生困難，從而導致二次污染。
3、表面增強拉曼光譜(sers)是一種用于復雜基質中快速檢測痕量樣品的強大技術，其獨特的拉曼“指紋”信號可用于識別特定分析物分子。sers的增強依賴于貴金屬納米粒子的局部表面等離子體共振效應。然而，現有技術在檢測np
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法以解決由于納米塑料尺寸小，在人體內濃度低，且生物基質復雜導致納米塑料在人體內的檢測難以實現的技術問題。
2、為了實現以上目的，本專利技術采取的技術方案為：
3、一種磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，包括以下步驟：使用氨基化磁珠對含有納米塑料的生物體液樣品進行富集得到團聚體，將所述團聚體解吸得到解吸液，將所述解吸液與sers增強基底溶液混合后干燥、檢測。
4、進一步的，所述生物體液為尿液或血清，所述生物體液樣品中納米塑料的濃度為6×10-7-6×10-3g/l。
5、進一步的，所述納米塑料的直徑為20-200nm。
6、進一步的，所述氨基化磁珠在所述生物體液樣品中的濃度為1.5-2g/l。
7、進一步的，所述團聚體解吸為在所述團聚體中加入洗脫液，在超聲下進行解吸；所述洗脫液為甲醇-醋酸混合溶液或甲醇-氨水混合溶液；所述甲醇-醋酸混合溶液中甲醇、醋酸的體積比9:1-1:1；所述甲醇-氨水混合溶液中甲醇、氨水的體積比為9:1-1:1。
8、進一步的，所述sers增強基底溶液與解吸液的體積比為1:4-2:1。
9、進一步的，所述氨基化磁珠的制備方法為：在fe3o4@sio2粉末中加入聚乙烯亞胺溶液一振蕩即得；每50mg所述fe3o4@sio2粉末對應300-400mg的聚乙烯亞胺。
10、進一步的，所述sers增強基底溶液的制備方法包括以下步驟：
11、s1：制備金納米星溶液：制備金種子溶液；將100-200μl金種子溶液添加到含有10-20ml、1-2mm的四氯金酸和40-80μl、1-2m鹽酸的混合溶液中，加入400-800μl、3-6mm硝酸銀溶液一，200-400μl、100-200mm的抗壞血酸溶液一得到金納米星溶液；
12、s2：在所述金納米星溶液中加入8.6-9.8ml、0.3-2.5mm硝酸銀溶液二和0.2-1.4ml、80-120mm的抗壞血酸溶液二得到含鍍銀金納米星的溶液；
13、s2：將12-15ml的所述含鍍銀金納米星的溶液與12-15ml、2.5-5mg/ml的聚乙烯亞胺溶液二混合后超聲、離心、重懸即得。
14、進一步的，所述生物體液為血清時，需將所述血清與氫氧化鉀混合、水浴加熱并稀釋后，再加入所述納米塑料。
15、本專利技術的有益效果：
16、本專利技術將氨基化磁珠(fe3o4@sio2@pei)的強富集能力與sers增強基底優異的性能相結合，實現了對生物體液中痕量的多尺寸nps的定性和定量分析，具有操作簡單、重現性高等優勢。本專利技術對尿液和血清中的聚苯乙烯納米塑料(ps?nps)的檢出限低至6×10-7g/l，定量分析能力強(r2>0.982)，在尿液和血清中加標回收率優異。該方法為追蹤nps的內暴露情況和評估人體內潛在的健康危害提供了強有力的技術支持。
17、本專利技術的fe3o4@sio2@pei通過靜電作用、疏水作用、氫鍵和π-π相互作用等對生物體液中nps的進行富集和分離，抗干擾能力更強。同時，fe3o4@sio2@pei的可重復使用性強，多次使用后仍保持優異的富集性能，綠色環保。
18、本專利技術開發了一種無需表面活性劑、具有大量粒子內熱點的sers增強基底，促進了nps在熱點內與sers增強基底的共吸附。相對于現有技術中引入外部試劑來促進納米粒子聚集的方法，簡化了樣品制備的過程。無表面活性劑的合成方法也降低了sers增強基底的生物毒性，同時還提高了sers增強基底的穩定性與方法的重現性和靈敏度。
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1.一種磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，包括以下步驟：使用氨基化磁珠對含有納米塑料的生物體液樣品進行富集得到團聚體，將所述團聚體解吸得到解吸液，將所述解吸液與SERS增強基底溶液混合后干燥、檢測。
2.根據權利要求1所述的磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，所述生物體液為尿液或血清，所述生物體液樣品中納米塑料的濃度為6×10-7-6×10-3g/L。
3.根據權利要求2所述的磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，所述納米塑料的直徑為20-200nm。
4.根據權利要求1所述的磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，所述氨基化磁珠在所述生物體液樣品中的濃度為1.5-2g/L。
5.根據權利要求1所述的磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，所述團聚體解吸為在所述團聚體中加入洗脫液，在超聲下進行解吸；所述洗脫液為甲醇-醋酸混合溶液或甲醇
6.根據權利要求1所述的磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，所述SERS增強基底溶液與解吸液的體積比為1:4-2:1。
7.根據權利要求1所述的磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，所述氨基化磁珠的制備方法為：在Fe3O4@SiO2粉末中加入聚乙烯亞胺溶液一振蕩即得；每50mg所述Fe3O4@SiO2粉末對應300-400mg的聚乙烯亞胺。
8.根據權利要求1所述的磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，所述SERS增強基底溶液的制備方法包括以下步驟：
9.根據權利要求2所述的磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，所述生物體液為血清時，需將所述血清與氫氧化鉀混合、水浴加熱并稀釋后，再加入所述納米塑料。
...【技術特征摘要】
1.一種磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，包括以下步驟：使用氨基化磁珠對含有納米塑料的生物體液樣品進行富集得到團聚體，將所述團聚體解吸得到解吸液，將所述解吸液與sers增強基底溶液混合后干燥、檢測。
2.根據權利要求1所述的磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，所述生物體液為尿液或血清，所述生物體液樣品中納米塑料的濃度為6×10-7-6×10-3g/l。
3.根據權利要求2所述的磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，所述納米塑料的直徑為20-200nm。
4.根據權利要求1所述的磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，所述氨基化磁珠在所述生物體液樣品中的濃度為1.5-2g/l。
5.根據權利要求1所述的磁固相萃取-表面增強拉曼光譜聯用檢測生物體液中痕量納米塑料的方法，其特征在于，所述團聚體解吸為在所述團聚體中加入洗脫液，在超聲下進行解吸；所述洗脫液為甲醇...
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