【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及分離純化，尤其涉及一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法。
技術介紹
1、維生素c是一種水溶性維生素，廣泛存在于植物、動物以及一些單細胞生物體內，是人體所需要的一種微量元素，具有多種生理作用，如抗氧化作用、促進膠原蛋白合成等，大多數動植物能夠自身合成維生素c以滿足需求，但是，由于人體中缺乏l-古洛酮-1，4-內酯氧化酶(l-gulono-1,4-lactone?oxidase)基因這一維生素c生物合成途徑中的關鍵酶，導致人體不能自主合成維生素c，必須通過外源攝取維生素c才能維持正常的人體所需，當人體長期缺乏維生素c時，會引起嚴重的壞血病。因此維生素c的市場需求量仍在不斷上升，具有廣闊的市場前景。
2、維生素c的工業化生產主要有濃縮提取、化學合成、生物發酵三種方式，其中二步發酵法使用最為廣泛，供應了全球80％以上的商用維生素c。該方法以d-山梨醇為原料，經過兩步發酵生成2-酮基-古龍酸(2-klg，簡稱古龍酸)，2-klg需要從發酵液中分離出來才能進一步通過烯醇化和內酯化轉化成維生素c。
3、含有2-klg的發酵液中，含有較多的菌絲體、雜蛋白和其他懸浮性微粒等雜質，因此，兩步發酵法制備2-klg的分離、純化難度較大，并由于發酵液中所含色素較多、顏色偏深，分離工藝的難度被大大提升。目前2-klg收率較低，下游分離古龍酸的成本占到總成本的70％以上。
4、現有技術中，分離純化發酵液中2-klg的方法主要包括加熱沉淀法、化學絮凝法、超濾法這三種，但現有方法存在著2-klg收率較
技術實現思路
1、為了解決上述技術問題，本專利技術提供了一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法。
2、本專利技術的具體技術方案為：
3、一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法，包括以下步驟：
4、將有機溶劑和無機鹽加入古龍酸菌株發酵液中，攪拌均勻，靜置，分層，得到富集古龍酸的下相，分離下相；其中：
5、所述有機溶劑為乙醇、異丙醇、叔丁醇、正丁醇和丙酮中的一種或幾種；
6、所述無機鹽為硫酸銨、氯化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉中的一種或幾種。
7、本專利技術通過以有機溶劑乙醇、異丙醇、叔丁醇、正丁醇、丙酮，與無機鹽硫酸銨、氯化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉組成的鹽析體系對發酵液進行鹽析萃取處理，可以有效將古龍酸富集在下相，使得古龍酸易于分離純化。本專利技術通過鹽析萃取耦合結晶技術分離純化發酵液中古龍酸，不需要對古龍酸發酵液進行離心、膜過濾等處理，降低了分離成本，同時，分離過程溫和，操作簡單，有利于工業化生產。
8、作為上述方法的優選，所述有機溶劑為異丙醇或/和叔丁醇，所述無機鹽為硫酸銨。
9、作為上述方法的優選，在異丙醇、無機鹽與古龍酸菌株發酵液的混合體系中，所述異丙醇的質量占比為15％～40％；在叔丁醇、無機鹽與古龍酸菌株發酵液的混合體系中，所述叔丁醇的質量占比為15％～40％。
10、作為上述方法的優選，在有機溶劑、無機鹽與古龍酸菌株發酵液的混合體系中，所述硫酸銨的質量占比為5％～30％。
11、作為上述方法的優選，將所述發酵液的ph調節至1～9。
12、作為上述方法的優選，所述方法還包括以下步驟：往分離出來的下相中加入活性炭，進行攪拌或震蕩處理。
13、進一步優選，所述活性炭的加入量占體系總質量的0.5％～3％。
14、作為上述方法的優選，所述方法還包括以下步驟：
15、往分離出來的下相中加入結晶析出劑，20～40℃攪拌或震蕩處理0.5～4小時，降溫至0～4℃放置；所述結晶析出劑為異丙醇、叔丁醇和甲醇中的一種或幾種。
16、進一步優選，所述方法所述結晶析出劑與下相的體積比為1～3:1。
17、與現有技術相比，本專利技術具有以下技術效果：
18、(1)本專利技術通過鹽析萃取耦合結晶技術對發酵液中古龍酸實現分離純化，具有較好的效果，經過鹽析萃取后，蛋白去除率可達76.31％，菌量去除率可達99.87％，古龍酸回收率可達98.06％，進一步對鹽析萃取下相進行結晶，回收古龍酸回收率可達68.92％，硫酸鈉去除率89.37％。
19、(2)本專利技術通過鹽析萃取耦合結晶技術分離純化發酵液中古龍酸，不需要對古龍酸發酵液進行離心、膜過濾等處理，降低了分離成本，同時，分離過程溫和，操作簡單，有利于工業化生產。
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1.一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法，其特征在于：包括以下步驟：將有機溶劑和無機鹽加入古龍酸菌株發酵液中，攪拌均勻，靜置，分層，得到富集古龍酸的下相，分離下相；其中：
2.如權利要求1所述的一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法，其特征在于：所述有機溶劑為異丙醇或/和叔丁醇，所述無機鹽為硫酸銨。
3.如權利要求2所述的一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法，其特征在于：在異丙醇、無機鹽與古龍酸菌株發酵液的混合體系中，所述異丙醇的質量占比為15％～40％；在叔丁醇、無機鹽與古龍酸菌株發酵液的混合體系中，所述叔丁醇的質量占比為15％～40％。
4.如權利要求2所述的一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法，其特征在于：在有機溶劑、無機鹽與古龍酸菌株發酵液的混合體系中，所述硫酸銨的質量占比為5％～30％。
5.如權利要求1所述的一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法，其特征在于：將所述發酵液的pH調節至1～9。
6.如權利要求1所述的一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍
7.如權利要求1所述的一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法，其特征在于：所述活性炭的加入量占體系總質量的0.5％～3％。
8.如權利要求1所述的一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法，其特征在于：還包括以下步驟：
9.如權利要求1所述的一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法，其特征在于：所述結晶析出劑與下相的體積比為1～3:1。
...【技術特征摘要】
1.一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法，其特征在于：包括以下步驟：將有機溶劑和無機鹽加入古龍酸菌株發酵液中，攪拌均勻，靜置，分層，得到富集古龍酸的下相，分離下相；其中：
2.如權利要求1所述的一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法，其特征在于：所述有機溶劑為異丙醇或/和叔丁醇，所述無機鹽為硫酸銨。
3.如權利要求2所述的一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法，其特征在于：在異丙醇、無機鹽與古龍酸菌株發酵液的混合體系中，所述異丙醇的質量占比為15％～40％；在叔丁醇、無機鹽與古龍酸菌株發酵液的混合體系中，所述叔丁醇的質量占比為15％～40％。
4.如權利要求2所述的一種鹽析萃取耦合結晶分離純化發酵液中古龍酸的方法，其特征在于：在有機溶劑、無...
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