【技術實現步驟摘要】
本申請涉及組織工程，尤其是涉及一種結直腸癌類器官模型及其構建方法與應用。
技術介紹
1、結直腸癌（colorectal?cancer,crc）死亡率位居世界第三位，已成為危害國民健康的重大公共衛生問題之一。晚期crc常規治療方案以藥物為主，由于不同患病個體對藥物的敏感性不同，致使crc晚期治療容易出現耐藥性和治療后復發轉移的情況。因此，通過將患者腫瘤組織在體外三維培養形成微型腫瘤組織得到患者特異性腫瘤類器官（patient-derived?tumor?organoids,pdos），高度還原人體腫瘤的組織結構和基因譜系，并保持腫瘤異質性，從而便于進行藥物敏感性測試。
2、目前，構建結直腸癌類器官的培養方式主要依賴經典膠滴法構建，然而經典膠滴法培養法難以在單個類器官水平上調控腫瘤微環境，導致構建的腫瘤類器官批次間差異大、重復性低批次內均一性差，并且經典膠滴法培養法無法實現一次性高通量構建類器官，進而導致藥敏測試時判讀結果的精準程度降低。
技術實現思路
1、鑒于上述相關技術的不足，本申請提供一種結直腸癌類器官模型及其構建方法及其應用，通過構建含有多個體積大小一致的類器官培養腔室的類器官培養結構，并將類器官培養結構陣列排布作為微孔陣列培養基體，在每個類器官培養腔室中培養接種細胞，一方面提高了同一批次內腫瘤類器官的均一性，另一方面，提高了構建類器官的通量，另外還縮短了培養周期，降低了基質膠單位用量。
2、第一方面，本申請提供的一種結直腸癌類器官模型的構建方法采用如下
3、包括如下步驟：設計制作微孔陣列培養基體，所述微孔陣列培養基體包括陣列分布的多個類器官培養結構，所述類器官培養結構上設置有間隔分布的多個類器官培養腔室，所述類器官培養腔室一端呈開放漏斗狀、另一端為封閉腔體；
4、將含有接種細胞和基質膠的接種細胞懸液和培養基加入所述類器官培養腔室中，進行全培養流程的原位培養，得到所述結直腸癌類器官模型。
5、優選地，所述類器官培養腔室的開放漏斗端開口直徑為900-1100μm，另一端呈半球狀，其直徑為500-700μm。
6、優選地，所述類器官培養腔室的開放漏斗端開口直徑為1000μm，另一端呈半球狀，其直徑為600μm。
7、優選地，所述類器官培養腔室的深度為400-600μm。
8、優選地，所述類器官培養腔室的深度為500μm。
9、通過采用上述方案，本申請類器官培養腔室一端呈開放漏斗狀的設計有利于提高細胞收集效率，另一端半球形設計有助于接種細胞聚集成球，提高了類器官單元制備的成功率。
10、優選地，所述類器官培養腔室的接種細胞數量為80-300個。
11、優選地，所述類器官培養腔室的接種細胞數量為100個。
12、通過采用上述方案，本申請中每個類器官培養腔室在低接種量的情況下成功形成單個均一的類器官，有利于適配采用內鏡樣本與穿刺樣本等低樣本量取樣方式。
13、優選地，所述接種細胞懸液中所述基質膠的體積濃度為3-8%。
14、優選地，所述接種細胞懸液中所述基質膠的體積濃度為5%。
15、通過采用上述方案，本申請構建結直腸癌類器官模型使用的基質膠濃度僅為5%，減少了基質膠使用量，降低了構建成本。
16、優選地，相鄰兩所述類器官培養腔室的間距為160-200μm。
17、優選地，相鄰兩所述類器官培養腔室的間距為166.67μm。
18、優選地，所述類器官培養結構上所述類器官培養腔室的個數為19個。
19、通過采用上述方案，通過對類器官培養結構上類器官培養腔室個數的控制、對類器官培養腔室的尺寸的控制以及對相鄰類器官培養腔室間距的控制，一方面有利于接種細胞核營養物質分布的均勻程度，另外一方面有利于接種細胞在類器官培養腔室中聚集并有利于接種生長過程中的營養物質交換和廢物吸出從而順利形成類器官。
20、優選地，所述接種細胞包括人來源的腫瘤干細胞和動物來源的腫瘤干細胞中的一種或多種。
21、優選地，所述接種細胞包括原代來源的結直腸癌干細胞和腸癌上皮細胞。
22、優選地，所述微孔陣列培養基體由多個所述類器官培養結構固定在細胞培養板上得到。
23、優選地，所述細胞培養板為96孔板。
24、通過采用上述方案，本申請兼容細胞培養板，可對類器官進行全培養流程的原位培養、原位觀察和原位藥物測試，提高了結直腸癌類器官模型的普適性，并且，與市售常用的細胞培養板進行配套，提高了使用的便捷程度。
25、優選地，所述進行全培養流程的原位培養包括將添加有接種細胞懸液的微孔陣列培養基體在80-200g離心條件下離心2-4min。
26、優選地，所述進行全培養流程的原位培養包括將添加有接種細胞懸液的微孔陣列培養基體在100g離心條件下離心3min。
27、優選地，所述類器官培養結構的制備步驟如下：
28、以光敏樹脂為原料，用面投影微立體光固化3d打印技術進行打印，得到帶有微柱體陣列的模具，在模具上澆筑聚合物單體并固化，脫模，得到所述類器官培養結構。
29、優選地，打印參數如下：
30、模型切片厚度為5-20μm，成型溫度為室溫，分離速度為0.5mm/s，分離距離為2-3mm/s，接觸速度為1mm/s，起始層厚度范圍為20μm，起始層光強為120mw/cm2，起始層曝光時間為3-4s，剩余層厚度范圍為5-10μm，剩余層光強為120-150mw/cm2，剩余層單層曝光時間為2-3s。
31、優選地，所述微柱體陣列由多個頂部為半球形、底部為類圓臺形的柱體陣列排布構成。
32、優選地，所述在模具上澆筑聚合物單體之前在模具表面成型有低黏附層。
33、優選地，所述脫模層由以下步驟成型：
34、所述模具先用氧氣等離子體清洗，表面作用10s，再放在含有三氯(1h,1h,2h,2h-全氟辛基)硅烷液滴的真空條件下，保壓30min，最后在90℃烘箱里干燥一小時。
35、第二方面，本申請提供的一種結直腸癌類器官模型采用如下的技術方案：
36、一種結直腸癌類器官模型，采用結直腸癌類器官模型的構建方法制備得到。
37、第三方面，本申請提供一種結直腸癌類器官模型在藥敏測試中的應用。
38、綜上所述，本申請包括以下至少一種有益技術效果：
39、1.本申請通過構建含有多個體積大小一致的類器官培養腔室的類器官培養結構，并將類器官培養結構陣列排布作為微孔陣列培養基體，在每個類器官培養腔室中培養接種細胞，一方面提高了同一批次內腫瘤類器官的均一性，另一方面，提高了構建類器官的通量；
40、2.本申請的結直腸癌類器官模型中類器官培養腔室獨立分布，有利于提高對每個類器官培養腔室的培養環境進行控制的精確程度，同時盡可能本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種結直腸癌類器官模型的構建方法，其特征在于：包括如下步驟：設計制作微孔陣列培養基體，所述微孔陣列培養基體包括陣列分布的多個類器官培養結構，所述類器官培養結構上設置有間隔分布的多個類器官培養腔室，所述類器官培養腔室一端呈開放漏斗狀、另一端為封閉腔體；
2.根據權利要求1所述的一種結直腸癌類器官模型的構建方法，其特征在于：所述類器官培養腔室的開放漏斗端開口直徑為900-1100μm，另一端呈半球狀，其直徑為500-700μm。
3.根據權利要求1所述的一種結直腸癌類器官模型的構建方法，其特征在于：所述類器官培養腔室的深度為400-600μm。
4.根據權利要求1所述的一種結直腸癌類器官模型的構建方法，其特征在于：所述類器官培養腔室的接種細胞數量為80-300個。
5.根據權利要求1所述的一種結直腸癌類器官模型的構建方法，其特征在于：所述接種細胞懸液中所述基質膠的體積濃度為3-8%。
6.根據權利要求1所述的一種結直腸癌類器官模型的構建方法，其特征在于：相鄰兩所述類器官培養腔室的間距為160-200μm。
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8.根據權利要求1所述的一種結直腸癌類器官模型的構建方法，其特征在于：所述進行全培養流程的原位培養包括將添加有接種細胞懸液的微孔陣列培養基體在80-200g離心條件下離心2-4min。
9.一種結直腸癌類器官模型，其特征在于：采用如權利要求1-8任一項所述的構建方法制備得到。
10.如權利要求9所述的一種結直腸癌類器官模型在藥敏測試中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種結直腸癌類器官模型的構建方法，其特征在于：包括如下步驟：設計制作微孔陣列培養基體，所述微孔陣列培養基體包括陣列分布的多個類器官培養結構，所述類器官培養結構上設置有間隔分布的多個類器官培養腔室，所述類器官培養腔室一端呈開放漏斗狀、另一端為封閉腔體；
2.根據權利要求1所述的一種結直腸癌類器官模型的構建方法，其特征在于：所述類器官培養腔室的開放漏斗端開口直徑為900-1100μm，另一端呈半球狀，其直徑為500-700μm。
3.根據權利要求1所述的一種結直腸癌類器官模型的構建方法，其特征在于：所述類器官培養腔室的深度為400-600μm。
4.根據權利要求1所述的一種結直腸癌類器官模型的構建方法，其特征在于：所述類器官培養腔室的接種細胞數量為80-300個。
5.根據權利要求1所述的一種結直腸癌...
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