【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于分析化學(xué)，具體涉及一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法。
技術(shù)介紹
1、bsa是生物學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域中的一個常見縮寫，它代表“牛血清白蛋白”(bovineserum?albumin)。牛血清白蛋白是一種存在于牛血液中的蛋白質(zhì)，屬于血清白蛋白家族，具有良好的水溶性和穩(wěn)定性，能夠在廣泛的ph值和溫度范圍內(nèi)保持其結(jié)構(gòu)和功能。bsa的分子量約為66.5kda，由583個氨基酸殘基組成，其中包含17個二硫鍵，這些結(jié)構(gòu)特征使得bsa在溶液中具有高度的穩(wěn)定性和溶解性，也使其在生物學(xué)研究和醫(yī)療領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用。bsa作為一種重要的生物試劑，在生物學(xué)和生物化學(xué)研究中發(fā)揮著不可替代的作用，被廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)、臨床診斷、生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)等多個領(lǐng)域。bsa的應(yīng)用主要包括：(1)載體蛋白：bsa能夠結(jié)合多種水溶性較差的物質(zhì)，如脂肪酸、激素、藥物等，幫助它們在血液中運輸和分布，這種特性使得bsa在藥物傳遞系統(tǒng)中具有潛在的應(yīng)用價值。(2)穩(wěn)定劑：在生物化學(xué)實驗中，bsa常用作穩(wěn)定劑，用于保護生物分子(如酶、抗體和其他蛋白質(zhì))免受實驗條件(如ph值變化、離子強度變化、溫度變化等)的負面影響，進而能夠減少蛋白質(zhì)的聚集和變性，提高實驗的準確性和可重復(fù)性。(3)封閉劑：在細胞培養(yǎng)、組織切片和分子生物學(xué)實驗中，bsa可用于封閉容器或載體表面的非特異性結(jié)合位點，有助于減少實驗中的背景噪音和假陽性信號，提高實驗結(jié)果的準確性。(4)標準品：在定量分析中，bsa常用作蛋白質(zhì)濃度的標準品，通過測量未知樣品與bsa標準品的吸光度、熒
2、金銀納米分子印跡聚合物是通過將金銀納米粒子引入到分子印跡聚合物基質(zhì)中而制成的一種復(fù)合材料。利用分子印跡技術(shù)通過將模板分子(即目標分析物)與功能單體和交聯(lián)劑在特定條件下共聚形成具有特定識別位點的聚合物，在去除模板分子后，能在聚合物中留下與模板分子形狀、大小和化學(xué)功能基團相匹配的空腔，這些空腔能夠特異性地重新結(jié)合模板分子。而金銀納米粒子則因其獨特的表面等離子體共振效應(yīng)(spr)，能夠顯著提高檢測靈敏度。目前，已發(fā)展出了多種制備金銀納米分子印跡聚合物的方法，主要包括以下幾種：(1)原位還原法：在分子印跡聚合物基質(zhì)中原位還原金銀鹽，生成金銀納米粒子，并嵌入聚合物基質(zhì)中。(2)共聚法：將金銀納米粒子與功能單體和交聯(lián)劑共同聚合，形成含有金銀納米粒子的分子印跡聚合物。(3)后修飾法：先制備分子印跡聚合物，再通過物理或化學(xué)方法將金銀納米粒子修飾到聚合物表面或內(nèi)部。同時，金銀納米分子印跡聚合物具有多種優(yōu)異的特性：(1)高選擇性：分子印跡聚合物能夠特異性地識別目標分析物，減少非特異性吸附。(2)高靈敏度：金銀納米粒子的spr效應(yīng)能夠顯著增強檢測信號，提高檢測靈敏度。(3)穩(wěn)定性好：金銀納米粒子具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性和生物相容性，使得復(fù)合材料在復(fù)雜環(huán)境中能夠保持穩(wěn)定的性能。此外，金銀納米分子印跡聚合物應(yīng)用廣泛，主要應(yīng)用領(lǐng)域包括：(1)環(huán)境監(jiān)測：用于檢測水體、土壤和空氣中的污染物，如重金屬離子、有機污染物等。(2)生物檢測：用于檢測生物樣品中的生物標志物、藥物殘留等，如血液、尿液和唾液中的特定成分。(3)食品安全：用于檢測食品中的添加劑、農(nóng)藥殘留和有害微生物等。(4)藥物分析：用于藥物篩選、藥物代謝研究和藥物質(zhì)量控制等方面。
3、共振瑞利散射光譜法(resonance?rayleigh?scattering,rrs)是一種基于光散射與分子光吸收發(fā)生共振的分析方法。當光散射位于或接近于分子吸收帶時，可能因產(chǎn)生散射–吸收–再散射過程而使散射強度大大增加，這種現(xiàn)象稱為共振光散射，是一種選擇性好、靈敏度高的光譜分析技術(shù)，在食品、衛(wèi)生、安全、臨床等方面均具有重要的應(yīng)用價值。共振瑞利散射光譜法作為一種具有發(fā)展前景的分析方法，將在生物分析、材料科學(xué)、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域發(fā)揮更重要的作用。隨著研究的深入和技術(shù)的不斷進步，該方法的靈敏度和選擇性將得到進一步提高，應(yīng)用范圍也將不斷擴大。盡管目前已有較多有關(guān)共振瑞利散射光譜法檢測技術(shù)的報道，但尚未有關(guān)于利用共振瑞利散射光譜法測定牛血清白蛋白的研究。
4、綜上，如果能利用金銀納米分子印跡聚合物和共振瑞利散射光譜開發(fā)一種測定bsa的新方法，將有望提高bsa檢測的靈敏度和準確度。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)提出了一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，該測定方法采用au-agnp@mip特異性結(jié)合bsa的rrs光譜法，操作簡便、快速、靈敏度高、準確度高。
2、為了實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)所采用的技術(shù)方案是：
3、本專利技術(shù)提供了一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，該方法包括以下步驟：
4、s1、將已知濃度的bsa標準溶液、金銀納米分子印跡聚合物(au-agnp@mip)和hno3溶液混勻，靜置反應(yīng)10-30分鐘，制成已知濃度的bsa標準溶液體；
5、s2、將au-agnp@mip和hno3溶液混勻，靜置反應(yīng)10-30分鐘，制成空白對照溶液體系；
6、s3、測定bsa標準溶液體系在340nm處的共振散射峰強度值i，同時測定空白對照溶液體系的共振散射峰強度值i0，計算δi，δi＝i-i0；
7、s4、以δi對bsa的濃度關(guān)系做工作曲線；
8、s5、將樣品溶液、au-agnp@mip和hno3溶液混勻，靜置反應(yīng)10-30分鐘，然后測定樣品溶液的共振散射峰強度值i樣品，計算δi樣品，δi樣品＝i樣品-i0；
9、s6、依據(jù)步驟s4的工作曲線，計算出樣品溶液bsa的含量；
10、所述au-agnp@mip的制備方法包括以下步驟：
11、s11、在溴化十六烷基三甲銨溶液中加入haucl4水溶液制備成種子溶液，然后在攪拌下加入冰冷的nabh4溶液，經(jīng)老化后得到au種子溶液；
12、s12、將十六烷基三甲基氯化銨溶液、抗壞血酸溶液、agno3溶液和naoh溶液加入水中，再在攪拌下加入步驟s1的au種子溶液，經(jīng)水浴后得到au-agnp；
13、s13、往磷酸鹽緩沖液中加入au-agnp和β-環(huán)糊精，攪拌后再加入三乙二醇二本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，S1為將80μL-800μL?10μmol/L的BSA標準溶液、10μL-50μL1g/L的Au-AgNP@MIP、50μL-500μL?1mol/L的HNO3溶液混勻，用于制備已知濃度的BSA標準溶液體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，S11所述溴化十六烷基三甲銨溶液的濃度為100mM，HAuCl4水溶液的濃度為25mM，所述溴化十六烷基三甲銨溶液與HAuCl4水溶液的體積比為1-5：0.1-0.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，S11所述NaBH4溶液的濃度為10mM,所述溴化十六烷基三甲銨溶液與NaBH4溶液的體積比為1-5：0.1-0.6。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，S12所述十六烷基三甲基氯化銨溶液的濃度為100mM，抗壞血溶液的濃度為100mM，AgNO3溶液的濃度為10mM，NaOH溶液的濃度為1μM，所述十六烷基三甲基氯化銨溶液、抗壞血溶液、AgNO3溶液、NaOH溶液與水的體積比為1-4：0.1-1：0.01-0.05：0.1-0.5：2-4。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，S12所述十六烷基三甲基氯化銨溶液與Au種子溶液的體積比為1-4：0.1-2。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，S12所述水浴25-40℃水浴7-15h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，S13所述Au-AgNP、β-環(huán)糊精、三乙二醇二甲基丙烯酸酯和過硫酸銨的用量比為1-10mL：10-500mg、1-5mmol：5-50mg。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，S13所述反應(yīng)為在37-80℃下攪拌反應(yīng)10-15小時。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，s1為將80μl-800μl?10μmol/l的bsa標準溶液、10μl-50μl1g/l的au-agnp@mip、50μl-500μl?1mol/l的hno3溶液混勻，用于制備已知濃度的bsa標準溶液體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，s11所述溴化十六烷基三甲銨溶液的濃度為100mm，haucl4水溶液的濃度為25mm，所述溴化十六烷基三甲銨溶液與haucl4水溶液的體積比為1-5：0.1-0.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，s11所述nabh4溶液的濃度為10mm,所述溴化十六烷基三甲銨溶液與nabh4溶液的體積比為1-5：0.1-0.6。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金銀納米分子印跡聚合物共振瑞利散射光譜測定牛血清白蛋白的方法，其特征在于，s11所述老化為25-35℃水浴老化2-4h。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用金...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉佳，曲壽康，劉玥，吳圣慶，張雪燕，彭宇濤，
申請(專利權(quán))人：深圳市中佳生物醫(yī)療科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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