【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及蛋白質純化，特別涉及一種維拉苷酶β的純化方法和藥液。
技術介紹
1、維拉苷酶β是一種重組人葡萄糖腦苷脂酶，其末端含有高甘露糖暴露，通過甘露糖受體介導的內吞作用進入細胞，催化葡萄糖腦苷脂的水解，從而達到治療戈謝病的目的。
2、目前用于純化葡萄糖腦苷脂酶的方法包括常規的陽離子交換層析捕獲、低ph病毒滅活等步驟。然而，通過現有純化工藝獲得的葡萄糖腦苷脂酶純度、比活性以及酶活回收率較差。
技術實現思路
1、本專利技術的主要目的是提出一種維拉苷酶β的純化方法和藥液，旨在解決現有技術中純化得到的維拉苷酶β的回收率較低、酶活性穩定性較差的問題。
2、為實現上述目的，本專利技術提出一種維拉苷酶β的純化方法，包括以下步驟：
3、s10、對含有維拉苷酶β的細胞培養收集液進行疏水電荷誘導層析處理，得含有維拉苷酶β的第一洗脫液；
4、s20、對所述第一洗脫液進行陰離子交換層析處理，得含有維拉苷酶β的第二洗脫液；
5、s30、對所述第二洗脫液進行病毒滅活處理，對病毒滅活處理后的第二洗脫液進行陽離子交換層析處理，得含有維拉苷酶β的第三洗脫液；
6、s40、對所述第三洗脫液進行疏水層析處理，得含有維拉苷酶β的第四洗脫液；
7、s50、對所述第四洗脫液進行第一次超濾處理，將所述第四洗脫液中的維拉苷酶β置換至除病毒過濾緩沖液中，并對所述除病毒過濾緩沖液依次進行除病毒過濾處理、第二次超濾處理，得純化后的維拉苷酶β。>
8、在一實施方式中，所述細胞培養收集液的獲取方法包括以下步驟：
9、獲取含有維拉苷酶β的細胞，對所述細胞進行細胞復蘇、細胞擴增以及細胞灌流培養，得含有維拉苷酶β的細胞培養收集液。
10、在一實施方式中，步驟s10中，所述疏水電荷誘導層析處理的填料包括mephypercel填料。
11、在一實施方式中，步驟s10包括：
12、對含有維拉苷酶β的細胞培養收集液進行疏水電荷誘導層析處理，依次用ph值為7.2的20mm磷酸鹽緩沖液、ph值為6.0的含0.5m精氨酸鹽酸的50mm醋酸鈉-醋酸、ph值為5.8的50mm醋酸鈉-醋酸以及ph值為4.8的50mm醋酸鈉-醋酸進行洗脫，得含有維拉苷酶β的第一洗脫液。
13、在一實施方式中，對所述第二洗脫液進行病毒滅活處理包括：
14、將所述第二洗脫液的ph調節至5.3～5.7，加入去垢劑至體系中所述去垢劑的質量百分數為0.5～1.5％，反應，得病毒滅活處理后的第二洗脫液；
15、其中，所述去垢劑包括tritonx-100。
16、在一實施方式中，所述反應的溫度為18～26℃；和/或，
17、所述反應的時間≥60min。
18、在一實施方式中，步驟s50中，所述超濾處理包括滲濾；和/或，
19、所述超濾處理的溫度為18～26℃。
20、本專利技術還提供一種藥液，包括通過前述的維拉苷酶β的純化方法純化得到的維拉苷酶β。
21、在一實施方式中，還包括添加劑，所述添加劑在所述藥液中的質量濃度為0.01～0.05％，所述添加劑包括聚山梨酯80。
22、在一實施方式中，所述維拉苷酶β在所述藥液中的質量濃度為3.4～4.6g/l。
23、在本專利技術的技術方案中，通過疏水電荷誘導層析處理捕獲含有維拉苷酶β的細胞培養收集液中的維拉苷酶β，提高了維拉苷酶β的純度、比活性和酶活回收率；疏水電荷誘導層析處理、陰離子交換層析處理、陽離子交換層析處理以及疏水層析處理的四步層析過程使得最終獲得的維拉苷酶β的雜質含量較少，純度較高，回收率較高且酶活性更穩定。
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1.一種維拉苷酶β的純化方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的維拉苷酶β的純化方法，其特征在于，步驟S10中，所述細胞培養收集液的獲取方法包括以下步驟：
3.如權利要求1所述的維拉苷酶β的純化方法，其特征在于，步驟S10中，所述疏水電荷誘導層析處理的填料包括MEP?HyperCel填料。
4.如權利要求3所述的維拉苷酶β的純化方法，其特征在于，步驟S10包括：
5.如權利要求1所述的維拉苷酶β的純化方法，其特征在于，步驟S30中，對所述第二洗脫液進行病毒滅活處理包括：
6.如權利要求5所述的維拉苷酶β的純化方法，其特征在于，所述反應的溫度為18～26℃；和/或，
7.如權利要求1所述的維拉苷酶β的純化方法，其特征在于，步驟S50中，所述超濾處理包括滲濾；和/或，
8.一種藥液，其特征在于，包括通過如權利要求1至7任一項所述的維拉苷酶β的純化方法純化得到的維拉苷酶β。
9.如權利要求8所述的藥液，其特征在于，還包括添加劑，所述添加劑在所述藥液中的質量濃度為0.01～0.
10.如權利要求8所述的藥液，其特征在于，所述維拉苷酶β在所述藥液中的質量濃度為3.4～4.6g/L。
...【技術特征摘要】
1.一種維拉苷酶β的純化方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的維拉苷酶β的純化方法，其特征在于，步驟s10中，所述細胞培養收集液的獲取方法包括以下步驟：
3.如權利要求1所述的維拉苷酶β的純化方法，其特征在于，步驟s10中，所述疏水電荷誘導層析處理的填料包括mep?hypercel填料。
4.如權利要求3所述的維拉苷酶β的純化方法，其特征在于，步驟s10包括：
5.如權利要求1所述的維拉苷酶β的純化方法，其特征在于，步驟s30中，對所述第二洗脫液進行病毒滅活處理包括：
6.如權利要求5所述的...
【專利技術屬性】
技術研發人員：薛群，張春英，趙元曦，寇天賜，沈菊平，
申請(專利權)人：北海康成蘇州生物制藥有限公司，
類型：發明
國別省市：
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