本發明專利技術涉及生物檢測領域，特別涉及抗CD99的抗體或其功能性片段及其應用，具體公開了該抗體的CDR序列和重鏈輕鏈可變區。該抗體對CD99具有較好的結合特異性以及親和力，能夠用于檢測樣本，為CD99的檢測和以CD99為標志物的兒童急性淋巴細胞白血病的診斷或輔助診斷提供了更多樣的抗體選擇。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物檢測領域，特別涉及抗cd99的抗體或其功能性片段及其應用。
技術介紹
1、白血病是造血系統的惡性增殖性疾病，是嚴重威脅小兒生命和健康的疾病之一。兒童白血病是兒童惡性腫瘤中最常見的類型，約占兒童腫瘤患者的20-30％，其中急性淋巴細胞白血病(acute?lymphoblastic?leukemia，all)在兒童白血病中最為常見，表現為起病急，發病初期伴隨不同程度的不規則發熱，發熱持續時間較長，且一般難以發現明顯的感染灶。
2、兒童急性淋巴細胞白血病對化學藥物治療很敏感，癌細胞容易殺滅，再加上骨髓移植治療等，在過去幾十年中其臨床治療效果取得了顯著改善，但仍有部分患者會發生復發并導致不良結局，甚至死亡。
3、因此，尋找能夠準確預測兒童白血病預后情況的相關因素，并提前對患者采取針對性的治療具有重要意義。
4、cd99是一種i型跨膜糖蛋白，分子量為32kda，是細胞粘附分子的一種。cd99參與細胞粘附和細胞凋亡的過程，由胸腺細胞和t細胞產生，對細胞和細胞外基質以及細胞與細胞之間的相互作用起著重要作用，并影響腫瘤細胞發生發展和轉移。cd99分子在不同類型腫瘤的診斷、發生發展、轉移及預后中扮演著不同的角色。近年來，更是發現cd99也是兒童白血病預后風險的重要標志物，通過檢測cd99的含量能夠評估兒童白血病的預后情況，因此，開發高特異性的抗體對于cd99的檢測至關重要，目前國內用于檢測cd99的單克隆抗體靈敏度、特異性上都不夠理想。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種抗cd99的抗體或其功能性片段及其應用。該抗體對cd99具有較好的結合特異性以及親和力，能夠用于檢測樣本，為cd99的檢測和以cd99為標志物的兒童急性淋巴細胞白血病的診斷或輔助診斷提供了更多樣的抗體選擇。
2、為了實現上述目的，根據本專利技術的一個方面，提供了一種抗cd99的抗體或其功能性片段，所述抗體或其功能性片段具有如下互補決定區：
3、重鏈互補決定區：
4、hcdr1，其包含seq?id?no:1所示的氨基酸序列，或由其組成；
5、hcdr2，其包含seq?id?no:2所示的氨基酸序列，或由其組成；
6、和hcdr3，其包含seq?id?no:3所示的氨基酸序列，或由其組成；
7、和輕鏈互補決定區：
8、lcdr1，其包含seq?id?no:4所示的氨基酸序列，或由其組成；
9、lcdr2，其包含seq?id?no:5所示的氨基酸序列，或由其組成；和
10、lcdr3，其包含seq?id?no:6所示的氨基酸序列，或由其組成。
11、所述互補決定區采用kabat的方式決定。
12、本專利技術中“抗體”：包括多克隆抗體及單克隆抗體以及這些抗體的抗原化合物結合片段，包括fab、f(ab’)2、fd、fv、scfv、雙特異抗體和抗體最小識別單位，以及這些抗體和片段的單鏈衍生物。抗體的類型可以選擇igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igm、ige、igd。此外，“抗體”此用語包括天然發生的抗體以及非天然發生的抗體，包括例如嵌合型(chimeric)、雙功能型(bifunctional)和人源化(humanized)抗體，以及相關的合成異構形式(isoforms)。“抗體”此用語可和“免疫球蛋白”互換使用。
13、在本專利技術中，重鏈互補決定區用hcdr表示，其包括hcdr1、hcdr2和hcdr3；輕鏈互補決定區用lcdr表示，其包括lcdr1、lcdr2和lcdr3。本領域常用的cdr標示方法包括：kabat編號方案、imgt編號方案、chothia和lesk編號方案以及1997年lefranc等人為免疫球蛋白超家族的所有蛋白質序列引入的新的標準化編號系統。kabat等人是第一個為免疫球蛋白可變區提出標準化編號方案的人。在過去的幾十年中，序列的積累導致了kabatman數據庫的創建，kabat編號方案通常被認為是編號抗體殘基廣泛采用的標準。本專利技術采用kabat注釋標準標示cdr區，但其他方法標示的cdr區也屬于本專利技術的保護范圍。
14、在本專利技術中，抗體重鏈可變區和輕鏈可變區中除cdr之外的區域為框架區；其中，重鏈框架區可以被進一步細分成被cdr分隔開的毗鄰區域，包含hfr1、hfr2、hfr3和hfr4框架區；輕鏈框架區可以被進一步細分成被cdr分隔開的毗鄰區域，包含lfr1、lfr2、lfr3和lfr4框架區。
15、通常情況下，重鏈和輕鏈的可變區可由以下編號的cdr與fr按如下組合排列連接獲得：fr1-cdr1-fr2-cdr2-fr3-cdr3-fr4。
16、優選的，所述抗cd99的抗體為單克隆抗體。
17、更優選的，所述單克隆抗體重鏈可變區和輕鏈可變區的氨基酸序列分別是seq?idno.7和seq?id?no.8所示的氨基酸序列。
18、本專利技術中抗體的“可變區”是指抗體的重鏈或輕鏈的氨基端結構域。這些結構域通常是抗體的最可變的部分，并含有抗原結合位點。輕鏈或重鏈可變區由被三個稱為“互補決定區”或“cdr”的高變區打斷的構架區構成。構架區和cdr的范圍已被精確定義，例如在kabat(參見《免疫重要的蛋白質的序列》(sequences?of?proteins?ofimmunologicalinterest)，e.kabat等，美國衛生與人類服務部(u.s.department?ofhealth?and?humanservices)，(1983))和chothia中。抗體的構架區，即構成要件輕鏈和重鏈的組合的構架區，起到定位和對齊cdr的作用，所述cdr主要負責與抗原的結合。在本專利技術中，術語“互補性決定區”、“cdr”是指免疫球蛋白的重鏈和輕鏈的高度可變區，指包含一種或多種或者甚至全部的對抗體或抗原結合片段與其識別的抗原或表位的結合親和力起作用的主要氨基酸殘基的區域。在本專利技術具體實施方式中，cdr是指所述抗體的重鏈和輕鏈的高度可變區。
19、在可選的實施方式中，所述抗體還包含恒定區。
20、在可選的實施方式中，所述恒定區包括重鏈恒定區和/或輕鏈恒定區。
21、在可選的實施方式中，所述重鏈恒定區選自igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igm、ige或igd的重鏈恒定區，所述輕鏈恒定區選自κ型或λ型輕鏈恒定區。
22、在可選的實施方式中，所述恒定區的種屬來源為牛、駱駝、馬、乳牛、豬、綿羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、貓、兔、驢、鹿、貂、雞、鴨、鵝、火雞、斗雞或人。
23、在可選的實施方式中，所述恒定區的種屬來源為小鼠。
24、另一方面，本專利技術提供一種分離的核酸分子，所述核酸分子為dna或rna，其編碼所述抗體或其功能性片段。
25、另一方面，本專利技術提供一種載體，其包含所述的分離的核酸分子。
26、另本文檔來自技高網
...
【技術保護點】
1.一種抗CD99的抗體或其功能性片段，其特征在于，所述抗體或其功能性片段具有如下互補決定區，重鏈互補決定區：
2.根據權利要求1所述的抗CD99的抗體或其功能性片段，其特征在于，所述抗CD99的抗體為單克隆抗體。
3.根據權利要求2所述的抗CD99的抗體或其功能性片段，其特征在于，所述單克隆抗體重鏈可變區和輕鏈可變區的氨基酸序列分別是SEQ?ID?NO.7和SEQ?ID?NO.8所示的氨基酸序列。
4.一種分離的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子為DNA或RNA，其編碼權利要求1-3任意一項所述的抗CD99的抗體或其功能性片段。
5.一種載體，其特征在于，所述載體包含權利要求4所述的分離的核酸分子。
6.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞被權利要求5所述的載體轉化。
7.權利要求1-3中任意一項所述的抗CD99的抗體或其功能性片段的制備方法。
8.一種檢測試劑，其特征在于，所述檢測試劑包含權利要求1-3中任意一項所述抗CD99的抗體或其功能性片段。
9.權利要求1-3中任意一項所述抗CD99的抗體或其功能性片段在檢測兒童白血病中的用途。
10.根據權利要求9所述的用途，其特征在于，所述兒童白血病為兒童急性淋巴細胞白血病。
...
【技術特征摘要】
1.一種抗cd99的抗體或其功能性片段，其特征在于，所述抗體或其功能性片段具有如下互補決定區，重鏈互補決定區：
2.根據權利要求1所述的抗cd99的抗體或其功能性片段，其特征在于，所述抗cd99的抗體為單克隆抗體。
3.根據權利要求2所述的抗cd99的抗體或其功能性片段，其特征在于，所述單克隆抗體重鏈可變區和輕鏈可變區的氨基酸序列分別是seq?id?no.7和seq?id?no.8所示的氨基酸序列。
4.一種分離的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子為dna或rna，其編碼權利要求1-3任意一項所述的抗cd99的抗體或其功能性片段。
【專利技術屬性】
技術研發人員：蔣鳴燕，李晉蓉，
申請(專利權)人：四川大學華西第二醫院，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。