【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于檢測，尤其涉及識別肌紅蛋白的核酸適體及其應用和含有其的產品。
技術介紹
1、急性心肌梗死是由于長時間缺血導致的心肌細胞死亡。急性心肌梗死在心血管疾病中極為常見，死亡率和致殘率在全球范圍內居高不下。急性心肌梗死往往可以通過心電圖（ecg）結果、心肌損傷標志物濃度升高和影像學來識別，然而僅依靠傳統的心電圖不能滿足急性心肌梗死檢測所需的靈敏度與特異性。目前心肌損傷標志物和ecg聯合診斷急性心肌梗死的方法，已逐步得到醫學界的認可。每年有大量胸痛患者可能具有潛在心肌損傷，而對疑似急性心肌梗死患者進行診斷，是一項耗時、耗資的工作。如果能及時恰當地應用心肌損傷標志物，則有助于對患者做出及時的診斷和治療，避免漏診誤診的發生，有效利用和節約醫療資源，并減少患者的醫療費用及住院時間。
2、肌紅蛋白（myo）是心肌受損后血液中最早出現的心肌損傷標志物，可以作為急性心肌梗死的早期診斷指標。肌紅蛋白是一種具有153個氨基酸的單鏈血紅素蛋白，屬于珠蛋白家族。肌紅蛋白的分子量為16.8?kda，存在于心肌和骨骼肌中。由于肌紅蛋白分子量小且位于細胞質內，心臟組織死亡后肌紅蛋白迅速釋放入血。血液中肌紅蛋白的正常水平為6-85?ng/ml，急性心肌梗死發作2?h后，肌紅蛋白開始升高，6-9?h達到峰值，1天后恢復至基線水平。目前已提出多種肌紅蛋白的檢測技術，包括膠體金法、免疫熒光法、乳膠增強免疫比濁法和elisa等。膠體金檢測法是一種定性檢測方法，不需要借助復雜的分析儀器，通過肉眼就可以判斷檢測結果，但無法準確定量，因此臨床使用比較受限。
3、磁微粒化學發光技術是將磁分離技術、化學發光技術、免疫分析技術結合起來的最新一代成熟的免疫檢測技術，具有易分離、自動化程度高、靈敏度高、特異性強等特點，也是目前醫療機構最主流的免疫診斷技術之一。抗原與抗體的免疫結合具有高度的特異性，是化學發光常用的識別工具。然而，抗體的生產成本高且批次間差異大，化學穩定性差，盡管可通過部分反應對抗體進行改造，但它們的制備過程復雜，結合數和修飾位點無法精準控制。核酸適體（aptamer）被譽為“化學家的抗體”，作為一類特殊的功能核酸，核酸適體是長度約為20-100個堿基的單鏈寡核苷酸（dna或rna），可通過折疊成獨特的三級結構實現對靶標高特異性和高親和力的識別與結合。與抗體相比，核酸適體具有體積小、成本低、易化學合成、可精準修飾、可編程性好、生物相容性高等獨特的優勢，同時免去了動物免疫、飼養、蛋白提取和純化等一系列流程。利用指數富集配體系統進化技術（selex）即可在含有不同核酸序列的文庫中篩選出與靶標特異性結合的核酸適體。針對金屬離子、氨基酸、蛋白質、病毒、細菌和動物等眾多生物靶標的核酸適體也已經被開發了出來。基于這些優勢，將核酸適體應用到化學發光中檢測心肌損傷標志物肌紅蛋白，有望開發出高靈敏度、高特異性的檢測方法。
4、本專利技術利用selex技術篩選出多條特異性識別肌紅蛋白不同位點的核酸適體，以該核酸適體組合為識別探針與肌紅蛋白進行多價結合，提高核酸適體與肌紅蛋白之間的相互作用力，對肌紅蛋白進行多靶點的高效識別，有效提高核酸適體的結合性能。在具有相同數量的核酸適體或相同數量的表面結合位點的情況下，核酸適體組合顯示出更強的結合特性，從而開發出肌紅蛋白高靈敏度、高特異性的檢測分析新方法，為進一步指導急性心肌梗死診斷、臨床用藥、預后監測等提供技術支持，為急性心肌梗死診療提供理論依據和新思路。
技術實現思路
1、本專利技術技術方案針對傳統方案靈敏度較弱、特異性不佳、線性范圍較窄等技術難題，提供了用于識別肌紅蛋白的核酸適體及其應用和含有其的產品。
2、本專利技術的主要目的在于：
3、一、提高核酸適體的識別親和力與特異性。
4、二、基于核酸適體開發高靈敏、高特異性及寬線性范圍的肌紅蛋白檢測方法。
5、為實現上述目的，本專利技術采用以下技術方案。
6、識別肌紅蛋白的核酸適體，
7、所述核酸適體是通過指數富集配體系統進化技術篩選所得；
8、所述核酸適體的序列包括以下至少其一：
9、seq?id?no.1：5’-cacgcatagcgccatggtctggtcacgattggtggggcgggttgttcctatgcgtg-3’；
10、seq?id?no.2：5’-cacgcatagccggcgggggactgctcgggattgcggatcgggtgcctatgcgtg-3’；
11、seq?id?no.3：5’-cacgcatagccggtcggattgcatagaaggggtctgcccgtcgggtcctatgcgtg-3’。
12、識別肌紅蛋白的核酸適體的應用，
13、所述核酸適體用于肌紅蛋白識別和/或檢測。
14、作為優選，
15、所述核酸適體用于制備磁微粒化學發光檢測試劑。
16、作為優選，
17、所述核酸適體使用前，以生物素對其進行修飾，隨后將其與鏈霉親和素修飾的磁微粒偶聯固定在磁微粒表面。
18、含有所述核酸適體的產品。
19、作為優選，
20、所述產品包括試劑和/或試劑盒和/或試劑條；
21、所述試劑以任一現有檢測試劑為基礎，適應性加入所述核酸適體中的任意一種或多種組合。
22、所述試劑盒以任一現有檢測試劑盒為基礎，適應性加入所述核酸適體中的任意一種或多種組合；
23、所述試劑條以任一現有檢測試劑條為基礎，適應性加入所述核酸適體中的任意一種或多種組合。
24、本專利技術有益之處在于：本專利技術旨在篩選出識別肌紅蛋白的多個核酸適體，通過使用一個或多個核酸適體構成核酸適體組合作為探針與目標分子進行多價結合，增強核酸適體與目標分子之間的相互作用力，實現對目標分子的多位點高效識別，進而開發出一種針對肌紅蛋白的高靈敏度和高特異性的檢測分析新方法，為急性心肌梗死的診斷、臨床用藥選擇本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.識別肌紅蛋白的核酸適體，其特征在于，
2.如權利要求1所述識別肌紅蛋白的核酸適體的應用，其特征在于，
3.根據權利要求2所述的識別肌紅蛋白的核酸適體的應用，其特征在于，
4.根據權利要求2所述的識別肌紅蛋白的核酸適體的應用，其特征在于，
5.含有如權利要求1所述核酸適體的產品。
6.根據權利要求5所述的含有核酸適體的產品，其特征在于，
【技術特征摘要】
1.識別肌紅蛋白的核酸適體，其特征在于，
2.如權利要求1所述識別肌紅蛋白的核酸適體的應用，其特征在于，
3.根據權利要求2所述的識別肌紅蛋白的核酸適體的應用，其特征在于，
【專利技術屬性】
技術研發人員：戴佳成，王鵬，周芳，付曉藝，徐寧，李小東，何康迪，洪國類，
申請(專利權)人：浙江工業大學，
類型：發明
國別省市：
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