【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物技術(shù)，具體涉及一種用于巢式pcr檢測泌尿道奇異變形桿菌和耐藥基因的引物和探針組合及其試劑盒。
技術(shù)介紹
1、尿路感染是由病原微生物侵襲人體引起機體發(fā)病的疾病。目前，醫(yī)院對尿路感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)是尿培養(yǎng)，具體而言，是以1-3天的微生物培養(yǎng)后菌落計數(shù)大于105個/ml為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)。然而尿培養(yǎng)，尿路感染治療方式主要依賴于抗生素，近年來，由于抗生素和免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用，革蘭陽性菌和真菌尿路感染增多，耐藥甚至耐多藥現(xiàn)象呈增加趨勢。因此，科學(xué)的選藥不僅要對細菌種類進行鑒定，還有測試抗生素敏感性。然而尿培養(yǎng)存在很多局限性，例如尿液樣本容易污染，培養(yǎng)過程耗時長，陽性率過低等。此外，其他的診斷技術(shù)，例如尿常規(guī)或者尿沉渣鏡檢等初步的診斷方法能夠獲取的細菌信息非常有限。因此，臨床上醫(yī)生不得補首先經(jīng)驗性使用廣譜性抗生素。一旦選錯藥，不僅延誤治療，破壞機體菌群平衡，還會增加耐藥菌株的感染比例，增加治療的難度。
2、pcr技術(shù)能夠?qū)⒃\斷時間從若干天縮短到數(shù)個小時，然后仍然存在假陰/陽性情況，靈敏度有待提高?；诤侠淼念A(yù)擴增和完全嵌套的分子設(shè)計，巢式pcr技術(shù)在保證良好的特異性檢測的同時，還能有效降低檢測限至十幾個菌；在分析低豐度樣品時，能夠明顯改善的信噪比，從而保證更好的精準(zhǔn)度和可靠性，極大減少漏檢。在先申請專利《一種巢式pcr檢測尿路感染致病菌的引物和探針組合、試劑盒及應(yīng)用》中公開了六種尿路感染致病菌的引物和探針序列，檢測范圍包括大腸桿菌、肺炎克雷伯氏菌、糞腸球菌、屎腸球菌，產(chǎn)氣腸桿菌和奇異變形桿菌。然而，在先專利奇異變形桿
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷與不足，本專利技術(shù)提供了一種用于巢式pcr檢測泌尿道奇異變形桿菌和耐藥基因的引物和探針組合及其試劑盒。
2、本專利技術(shù)采用的技術(shù)解決方案是：一種用于巢式pcr檢測泌尿道奇異變形桿菌的引物和探針組合，所述的泌尿道病原菌包括奇異變形桿菌，所述的引物和探針組合包括檢測檢測奇異變形桿菌的第一外引物of、第一外引物or、第一內(nèi)引物if、第一內(nèi)引物ir以及第一taqman探針。
3、所述的第一外引物of的核苷酸序列如seq?id?no.1所示；所述的第一外引物or的核苷酸序列如seq?id?no.2所示；所述的第一內(nèi)引物if的核苷酸序列如seq?id?no.3所示；所述的第一內(nèi)引物ir的核苷酸序列如seq?id?no.4所示；所述的第一taqman探針的核苷酸序列如seq?id?no.5所示。
4、一種用于巢式pcr檢測泌尿道病原菌耐藥基因的引物和探針組合，所述的耐藥基因包括碳青霉烯類耐藥基因kpc和甲氧西林耐藥基因meca，所述的引物和探針組合包括檢測的第二外引物of、第二外引物or、第二內(nèi)引物if、第二內(nèi)引物ir以及第二taqman探針；檢測甲氧西林耐藥基因meca的第三外引物of、第三外引物or、第三內(nèi)引物if、第三內(nèi)引物ir以及第三taqman探針。
5、所述的第二外引物of的核苷酸序列如seq?id?no.6所示；所述的第二外引物or的核苷酸序列如seq?id?no.7所示；所述的第二內(nèi)引物if的核苷酸序列如seq?id?no.8所示；所述的第二內(nèi)引物ir的核苷酸序列如seq?id?no.9所示；所述的第二taqman探針的核苷酸序列如seq?id?no.10所示。
6、所述的第三外引物of的核苷酸序列如seq?id?no.11所示；所述的第三外引物or的核苷酸序列如seq?id?no.12所示；所述的第三內(nèi)引物if的核苷酸序列如seq?id?no.13所示；所述的第三內(nèi)引物ir的核苷酸序列如seq?id?no.14所示；所述的第三taqman探針的核苷酸序列如seq?id?no.15所示。
7、一種巢式pcr檢測泌尿道奇異變形桿菌的試劑盒，所述的試劑盒包括所述的引物和探針組合以及巢式pcr擴增用試劑。
8、一種同時檢測泌尿道奇異變形桿菌和耐藥基因的試劑盒，所述的試劑盒包括同時檢測奇異變形桿菌和甲氧西林耐藥基因meca的引物和探針組合或同時檢測奇異變形桿菌和碳青霉烯類耐藥基因kpc的引物和探針組合。
9、所述的引物和探針組合為所述的檢測泌尿道奇異變形桿菌的引物和探針組合與所述的檢測耐藥基因的引物和探針組合兩兩混合得到。
10、本專利技術(shù)的有益效果是：本專利技術(shù)提供了一種用于巢式pcr檢測泌尿道奇異變形桿菌和耐藥基因的引物和探針組合及其試劑盒，本專利技術(shù)設(shè)計的引物不引起其他泌尿道病原菌的交叉擴增，能滿足特異性要求；外源性干擾物慶大霉素、妥布霉素、頭孢他啶、左氧氟沙星、哌拉西林、呋喃妥因?qū)嶒灲Y(jié)果均無影響，制備的試劑盒可同時檢測泌尿道病原菌和耐藥基因，檢測方便、簡單、可靠，相對于普通得菌種鑒定，耐藥基因檢測可以更準(zhǔn)確指導(dǎo)臨床用藥，避免無效治療。
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1.一種用于巢式PCR檢測泌尿道奇異變形桿菌的引物和探針組合，其特征在于，所述的泌尿道病原菌包括奇異變形桿菌，所述的引物和探針組合包括檢測檢測奇異變形桿菌的第一外引物OF、第一外引物OR、第一內(nèi)引物IF、第一內(nèi)引物IR以及第一TaqMan探針。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于巢式PCR檢測泌尿道奇異變形桿菌的引物和探針組合，其特征在于，所述的第一外引物OF的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；所述的第一外引物OR的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；所述的第一內(nèi)引物IF的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；所述的第一內(nèi)引物IR的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示；所述的第一TaqMan探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示。
3.一種用于巢式PCR檢測泌尿道病原菌耐藥基因的引物和探針組合，其特征在于，所述的耐藥基因包括碳青霉烯類耐藥基因KPC和甲氧西林耐藥基因meCA，所述的引物和探針組合包括檢測的第二外引物OF、第二外引物OR、第二內(nèi)引物IF、第二內(nèi)引物IR以及第二TaqMan探針；檢測甲氧西林耐藥基因meCA的第三外引物OF、第三外
4.?根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于巢式PCR檢測泌尿道病原菌耐藥基因的引物和探針組合，其特征在于，所述的第二外引物OF的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示；所述的第二外引物OR的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7所示；所述的第二內(nèi)引物IF的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8所示；所述的第二內(nèi)引物IR的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示；所述的第二TaqMan探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.10所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于巢式PCR檢測泌尿道病原菌耐藥基因的引物和探針組合，其特征在于，所述的第三外引物OF的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.11所示；所述的第三外引物OR的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.12所示；所述的第三內(nèi)引物IF的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.13所示；所述的第三內(nèi)引物IR的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.14所示；所述的第三TaqMan探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.15所示。
6.一種巢式PCR檢測泌尿道奇異變形桿菌的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括權(quán)利要求1-2任意一項所述的引物和探針組合以及巢式PCR擴增用試劑。
7.一種同時檢測泌尿道奇異變形桿菌和耐藥基因的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括同時檢測奇異變形桿菌和甲氧西林耐藥基因meCA的引物和探針組合或同時檢測奇異變形桿菌和碳青霉烯類耐藥基因KPC的引物和探針組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的同時檢測泌尿道奇異變形桿菌和耐藥基因的試劑盒，其特征在于，所述的引物和探針組合為權(quán)利要求1中所述的引物和探針組合與權(quán)利要求3中所述的引物和探針組合兩兩混合得到。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于巢式pcr檢測泌尿道奇異變形桿菌的引物和探針組合，其特征在于，所述的泌尿道病原菌包括奇異變形桿菌，所述的引物和探針組合包括檢測檢測奇異變形桿菌的第一外引物of、第一外引物or、第一內(nèi)引物if、第一內(nèi)引物ir以及第一taqman探針。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于巢式pcr檢測泌尿道奇異變形桿菌的引物和探針組合，其特征在于，所述的第一外引物of的核苷酸序列如seq?id?no.1所示；所述的第一外引物or的核苷酸序列如seq?id?no.2所示；所述的第一內(nèi)引物if的核苷酸序列如seq?id?no.3所示；所述的第一內(nèi)引物ir的核苷酸序列如seq?id?no.4所示；所述的第一taqman探針的核苷酸序列如seq?id?no.5所示。
3.一種用于巢式pcr檢測泌尿道病原菌耐藥基因的引物和探針組合，其特征在于，所述的耐藥基因包括碳青霉烯類耐藥基因kpc和甲氧西林耐藥基因meca，所述的引物和探針組合包括檢測的第二外引物of、第二外引物or、第二內(nèi)引物if、第二內(nèi)引物ir以及第二taqman探針；檢測甲氧西林耐藥基因meca的第三外引物of、第三外引物or、第三內(nèi)引物if、第三內(nèi)引物ir以及第三taqman探針。
4.?根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于巢式pcr檢測泌尿道病原菌耐藥基因的引物和探針組合，其特征在于，所述的第二外引物of的核苷酸序列如seq?id?no.6所示；所述的第二外引物or...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張樂翔，趙遠錦，葉小敏，
申請(專利權(quán))人：溫州青峰生物醫(yī)療科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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