【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及食品中抗衰老類新食品原料透明質(zhì)酸鈉的高壓酸水解-柱前衍生-高效液相色譜檢測方法。
技術(shù)介紹
1、透明質(zhì)酸（hyaluronic?acid，ha），又名玻尿酸，是由n-乙酰氨基葡萄糖通過β-1,3糖苷鍵與葡萄糖醛酸結(jié)合成雙糖，并以此雙糖為單位通過聚合反應(yīng)產(chǎn)生的一種高分子質(zhì)量的直鏈黏性多糖。目前，工業(yè)生產(chǎn)得到的透明質(zhì)酸常以其鈉鹽的形式存在，即透明質(zhì)酸鈉。在國內(nèi)，公眾對透明質(zhì)酸鈉的認(rèn)知主要停留在醫(yī)美與化妝品上，但在國外透明質(zhì)酸鈉食品屢見不鮮。目前全球范圍內(nèi)在售的含有透明質(zhì)酸鈉的食品達(dá)?2000?多種，含有透明質(zhì)酸鈉成分的膳食補(bǔ)充類保健食品早已在國際市場廣泛流行。口服透明質(zhì)酸鈉可以美容護(hù)膚、促進(jìn)傷口愈合修復(fù)、抗氧化、緩解骨關(guān)節(jié)炎等。
2、2008年，我國批準(zhǔn)透明質(zhì)酸鈉為新資源食品，作為保健食品原料，證明了食用透明質(zhì)酸鈉的安全性。2021年1月，國家衛(wèi)健委批準(zhǔn)透明質(zhì)酸鈉可以作為新食品原料應(yīng)用于普通食品中，規(guī)定了其使用范圍：乳及乳制品、飲料類、酒類、可可制品等，并規(guī)定了推薦最大使用量。隨著透明質(zhì)酸鈉應(yīng)用范圍的擴(kuò)大，在食品領(lǐng)域中透明質(zhì)酸鈉的身影出現(xiàn)得越來越多，不少品牌將其作為了產(chǎn)品的重要“賣點(diǎn)”之一。在透明質(zhì)酸鈉食品的宣傳中，多出現(xiàn)“q彈”“水光”“補(bǔ)水”，主要以給皮膚補(bǔ)水為主，但這些宣稱添加透明質(zhì)酸鈉的口服液、氣泡水等食品中透明質(zhì)酸鈉實(shí)際含量多少卻完全未知。現(xiàn)在市場上概念性宣傳太多，口服透明質(zhì)酸鈉還是新興事物，市場的快速擴(kuò)張，可能隨之出現(xiàn)“代加工”、“貼牌”等現(xiàn)象，甚至標(biāo)識不準(zhǔn)確等違規(guī)行為。
3、目前，
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)目的在于提供一種食品中抗衰老類新食品原料透明質(zhì)酸鈉的高效液相色譜檢測方法，實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)的技術(shù)方案如下：
2、該方法所述食品中抗衰老類新食品原料透明質(zhì)酸鈉的分離檢測方法，具體步驟如下：
3、a.制備標(biāo)準(zhǔn)儲備液和標(biāo)準(zhǔn)工作液，所述標(biāo)準(zhǔn)儲備液為10.0?mg/ml，分別移取適量濃度為1000?μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲備溶液配制成濃度為10?μg/ml、25?μg/ml、50?μg/ml、100μg/ml、250?μg/ml、500?μg/ml、1?000?μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，取上述樣液各2.0?ml于10?ml具塞比色管中，加入4.0?mol/l鹽酸溶液2?ml，渦旋混勻，封口，置于?121?℃高壓滅菌鍋中水解60?min。取出冷卻至室溫后，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)酸度至中性，將溶液轉(zhuǎn)移至10?ml容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，制得濃度分別為2.0?μg/ml、5.0?μg/ml、10.0?μg/ml、20.0?μg/ml、50.0?μg/ml、100.0?μg/ml的透明質(zhì)酸鈉同步水解系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。移取上述標(biāo)準(zhǔn)工作液0.50?ml置于5?ml具塞比色管中，加入200?μl?4-氨基苯甲酸乙酯溶液及50?μl氰基硼氫化鈉溶液，渦旋混勻，封管。置于70℃水浴鍋中加熱衍生50?min。衍生化完成冷卻至室溫，補(bǔ)水至2.00ml，過0.45?μm水相微孔濾膜待測。
4、b.制備待測樣品溶液：稱取樣品1.0?g（精確至0.001?g）于10?ml具塞比色管中加入2?ml水充分溶解混勻（酒類樣品需先加熱蒸發(fā)掉乙醇），加入4.0?mol/l鹽酸溶液2?ml，渦旋混勻，封口，置于?121?℃高壓滅菌鍋中水解60?min。取出冷卻至室溫后，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)酸度至中性，將溶液轉(zhuǎn)移至10?ml容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。將樣液轉(zhuǎn)移至具塞塑料離心管中，?10?000?r/min離心5?min，取上清液備用。移取上清液0.50?ml置于5ml具塞比色管中，加入200?μl?4-氨基苯甲酸乙酯溶液及50?μl氰基硼氫化鈉溶液，渦旋混本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種食品中抗衰老類新食品原料的檢測方法，其特征在于，所述的食品為乳及乳制品、飲料類、酒類、可可制品、巧克力和巧克力制品(包括代可可脂巧克力及制品）以及糖果、冷凍飲品等，所述的抗衰老類新食品原料為透明質(zhì)酸鈉，所述的檢測方法包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述食品中抗衰老類新食品原料的檢測方法，其特征在于，a中所述標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制具體步驟為：準(zhǔn)確稱取透明質(zhì)酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品10?mg(精確至0.1?mg)，置于10mL?容量瓶中，用水加熱溶解并定容至刻度線，?配制成質(zhì)量濃度為?1000?μg/mL?標(biāo)準(zhǔn)儲備液；a中所述標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備具體步驟為：分別移取適量濃度為1000?μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲備溶液配制成濃度為10?μg/mL、25?μg/mL、50?μg/mL、100?μg/mL、250?μg/mL、500?μg/mL、1?000?μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，取上述樣液各2.0?mL于10?mL具塞比色管中，加入4.0?mol/L鹽酸溶液2?mL，渦旋混勻，封口，置于?121℃高壓滅菌鍋中水解60?min。取出冷卻至室溫后，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)酸度至中性，將溶液轉(zhuǎn)移至10?
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述食品中抗衰老類新食品原料的檢測方法，其特征在于，b中所述待測樣品溶液的制備具體步驟為：稱取樣品1.0?g（精確至0.001?g）于10?mL具塞比色管中加入2?mL水充分溶解混勻（酒類樣品需先加熱蒸發(fā)掉乙醇），加入4.0?mol/L鹽酸溶液2?mL，渦旋混勻，封口，置于?121?℃高壓滅菌鍋中水解60?min；取出冷卻至室溫后，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)酸度至中性，將溶液轉(zhuǎn)移至10?mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻；將樣液轉(zhuǎn)移至具塞塑料離心管中，?10?000?r/min離心5?min，取上清液備用。移取上清液0.50?mL置于5mL具塞比色管中，加入200?μL?4-氨基苯甲酸乙酯溶液及50?μL氰基硼氫化鈉溶液，渦旋混勻，封管。置于70℃水浴鍋中加熱衍生50?min。衍生化完成冷卻至室溫，補(bǔ)水至2.00mL，過0.45?μm水相微孔濾膜待測。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述食品中抗衰老類新食品原料的檢測方法，其特征在于，c中所述C18色譜柱規(guī)格為4.6?mm×250?mm內(nèi)徑，顆粒粒徑5?μm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述食品中抗衰老類新食品原料的檢測方法，其特征在于，d中所述標(biāo)準(zhǔn)曲線系數(shù)不小于0.999。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述食品中抗衰老類新食品原料的檢測方法，其特征在于，所述的食品為乳及乳制品、飲料類、酒類、可可制品、巧克力和巧克力制品(包括代可可脂巧克力及制品）以及糖果、冷凍飲品，所述的抗衰老類新食品原料為透明質(zhì)酸鈉。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種食品中抗衰老類新食品原料的檢測方法，其特征在于，所述的食品為乳及乳制品、飲料類、酒類、可可制品、巧克力和巧克力制品(包括代可可脂巧克力及制品）以及糖果、冷凍飲品等，所述的抗衰老類新食品原料為透明質(zhì)酸鈉，所述的檢測方法包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述食品中抗衰老類新食品原料的檢測方法，其特征在于，a中所述標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制具體步驟為：準(zhǔn)確稱取透明質(zhì)酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品10?mg(精確至0.1?mg)，置于10ml?容量瓶中，用水加熱溶解并定容至刻度線，?配制成質(zhì)量濃度為?1000?μg/ml?標(biāo)準(zhǔn)儲備液；a中所述標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備具體步驟為：分別移取適量濃度為1000?μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲備溶液配制成濃度為10?μg/ml、25?μg/ml、50?μg/ml、100?μg/ml、250?μg/ml、500?μg/ml、1?000?μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，取上述樣液各2.0?ml于10?ml具塞比色管中，加入4.0?mol/l鹽酸溶液2?ml，渦旋混勻，封口，置于?121℃高壓滅菌鍋中水解60?min。取出冷卻至室溫后，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)酸度至中性，將溶液轉(zhuǎn)移至10?ml容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，制得濃度分別為2.0?μg/ml、5.0?μg/ml、10.0?μg/ml、20.0?μg/ml、50.0?μg/ml、100.0?μg/ml的透明質(zhì)酸鈉同步水解系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。移取上述標(biāo)準(zhǔn)工作液0.50?ml置于5?ml具塞比色管中，加入200?μl?4-氨基苯甲酸乙酯溶液及50?μl氰基硼氫化鈉溶液，渦旋混勻，封管，置于70℃水浴鍋中加熱衍生50?mi...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：潘城，孟鵬，徐敦明，李燕妹，黃姝玲，吳媛，黃永輝，唐雯，
申請(專利權(quán))人：福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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