【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于刺激響應性藥物制劑，具體涉及一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒及制備方法。
技術介紹
1、腦部急性損傷類疾病，通常起源于腦血管病變、中樞損傷或感染等因素，造成腦卒中、創傷性腦損傷、癲癇急性發作等疾病。此類疾病發展過程中，損傷導致局部神經元缺血缺氧，一方面引起神經元線粒體電子傳遞鏈過度活躍，產生活性氧物種，并從胞內擴散到胞外，進一步損害病灶其他神經元，產生更多活性氧；另一方面，活性氧同時刺激小膠質細胞和星形膠質細胞，引起反應性膠質增生，分泌促炎因子，清除受損神經元。死亡神經元自身也會釋放促炎因子，加劇病灶炎癥反應。此外，激活的星形膠質細胞失去谷氨酸“貯庫”作用，導致病灶谷氨酸濃度異常升高，直接刺激神經元異常放電，對神經元造成興奮毒性損傷。因此，神經元的氧化應激與神經膠質細胞的炎癥反應形成惡性循環，使腦部病灶微環境持續惡化。同時，缺血缺氧等因素，誘導腦血管代償增生，但新生血管并不具備完整的血腦屏障功能，引起外源性免疫細胞和白蛋白向腦實質滲漏，進一步刺激病灶免疫炎癥反應。
2、因此，針對急性腦部損傷類疾病的藥物療法，應當從“神經血管單元”整體出發，一方面要拯救受損神經元，減少神經元死亡；另一方面要抑制反應性膠質增生，恢復神經膠質穩態；同時還要修復受損腦血管，阻擋外源性物質的滲漏。同時，向腦部病灶遞送藥物，還要考慮克服血腦屏障的阻礙，提高藥物的入腦效率；并使藥物充分富集到病灶，實現靶向蓄積、按需釋藥及長效釋放效果。
技術實現思路
1、本專利技術提供一種基于聚
2、為實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，包括以下步驟：
4、（1）將助懸劑溶于鹽酸水溶液中，并加入吡咯與氧化劑，室溫攪拌反應24?h，將產物置于截留分子量為3500的透析袋內，浸入水中，透析除去雜質，凍干，得到聚吡咯骨架；
5、反應過程如式ⅰ所示：
6、
7、式ⅰ
8、（2）s1.將聚吡咯骨架分散于有機溶劑中，加入4-鹵代甲基苯硼酸與縛酸劑，在惰性氣體保護下，在25?~?50℃攪拌反應至沉淀不再增加，過濾并收集濾液；s2.將含有鄰二醇或丙二醇結構的藥物加入所述濾液，并加入脫水劑，在惰性氣體保護下，室溫攪拌反應6?h~?24?h，過濾并收集濾液，在水中透析除去雜質，凍干，得到單載藥的聚吡咯；
9、反應過程如式ⅱ所示：
10、
11、式ⅱ
12、其中，x表示鹵原子，表示含有鄰二醇結構的藥物，表示含有丙二醇結構的藥物；
13、（3）將所述單載藥聚吡咯分散于水中，加入帶電藥物，在惰性氣體保護下，室溫攪拌反應6?h?~?24?h，在水中透析除去雜質，得到雙載藥的聚吡咯；
14、反應過程如式ⅲ所示：
15、
16、式ⅲ
17、或，
18、
19、其中，表示帶電藥物；
20、（4）將雙載藥聚吡咯的水溶液與細胞膜溶液混合，低溫超聲，先后過0.45?μm和0.22?μm濾膜，即得仿生載藥納米粒。
21、優選的，所述步驟（1）中助懸劑、吡咯與氧化劑的摩爾比為0.5?:?1~1.5?:?2?~2.5。
22、優選的，所述步驟（1）中助懸劑為十二烷基硫酸鈉，氧化劑選自過氧化氫或三氯化鐵。
23、優選的，所述步驟（1）中鹽酸水溶液濃度為20?mmol/l?~?100?mmol/l。
24、優選的，所述步驟（2）中4-鹵代甲基苯硼酸、縛酸劑、含有鄰二醇或丙二醇結構的藥物與脫水劑的摩爾比為1?:?1.2~1.5?:?1.2~1.5?:?2。
25、優選的，所述步驟（2）中，有機溶劑為無水二甲基亞砜；縛酸劑為無水碳酸鉀，脫水劑為無水硫酸鈉。
26、優選的，所述步驟（3）中，單載藥聚吡咯所含苯硼酸基團與帶電藥物的摩爾比為1:0.5?~?10。
27、優選的，所述步驟（3）中，帶電藥物為季銨鹽類藥物。
28、優選的，所述步驟（4）中，細胞膜提取自raw?264.7細胞或sh-sy5y細胞。
29、進一步優選的，所述步驟（4）中，細胞膜溶液的制備方法：在10?cm圓皿中培養細胞至融合度超過100%，刮刀收集細胞懸液，250?g離心4?min，pbs?7.4洗3遍；加入低滲液重新懸浮細胞，低滲液為含1?mmol/l?pmsf的0.1×tm?緩沖液；低溫超聲1?h，3200?g離心5?min除去細胞核，提取上清；再以20000?g離心25?min除去細胞器，提取上清；再以100000?g超離60?min提取沉淀，得到油狀物，即為細胞膜；加水，低溫超聲重懸沉淀，即得細胞膜溶液，并以bca法測定細胞膜濃度。
30、更進一步優選的，所述步驟（4）中，低溫超聲溫度均為2?~?8°c。
31、優選的，所述步驟（4）中，雙載藥聚吡咯與細胞膜質量比為2?:?0.5?~?1.5；低溫超聲時間為0.2?~?1?h。
32、本專利技術所述室溫指25℃。
33、本專利技術還提供上述方法制得的基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒，所述納米粒的直徑為40?~?150?nm。
34、本專利技術還提供上述基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒在制備治療腦部急性損傷類疾病的藥物中的應用。
35、與現有技術相比，本專利技術的有益效果包括：
36、（1）本專利技術制備的仿生載藥納米粒粒徑較小，形貌均勻，載藥效率高，易于儲存，生物相容性良好。
37、（2）本專利技術制備的仿生載藥納米?？勺鳛橹委熌X部急性損傷類疾病的納米藥物，并適于血管內注射給藥；仿生納米粒可識別血腦屏障表達的相關受體，靶向到達血腦屏障并內化入腦，富集到腦部病灶，在病灶高濃度活性氧、異常生物電和神經元細胞內溶酶體酸性ph刺激下選擇性釋放相關藥物，發揮保護神經元、抑制反應性膠質增生和修復受損血腦屏障的療效；同時苯硼酸基團能夠清除病灶活性氧，協同減輕氧化應激，緩解炎癥反應。
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1.一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中助懸劑、吡咯與氧化劑的摩爾比為0.5?:?1~1.5?:?2?~?2.5；
3.根據權利要求1所述的一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中4-鹵代甲基苯硼酸、縛酸劑、含有鄰二醇或丙二醇結構的藥物與脫水劑的摩爾比為1?:?1.2~1.5?:?1.2~1.5?:?2。
4.根據權利要求1所述的一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中，有機溶劑為無水二甲基亞砜；縛酸劑為無水碳酸鉀，脫水劑為無水硫酸鈉。
5.根據權利要求1所述的一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中，單載藥聚吡咯所含苯硼酸基團與帶電藥物的摩爾比為1?:0.5?~?10。
6.根據權利要求1所述的一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，其特征在于
7.根據權利要求1所述的一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，其特征在于，所述步驟（4）中，細胞膜提取自RAW?264.7細胞或SH-SY5Y細胞；
8.根據權利要求1所述的一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，其特征在于，所述步驟（4）中，雙載藥聚吡咯與細胞膜質量比為2?:?0.5?~?1.5；低溫超聲時間為0.2?~?1?h。
9.根據權利要求1-8任一項所述的制備方法制得的基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒。
10.根據權利要求9所述的基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒在制備治療腦部急性損傷類疾病的藥物中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中助懸劑、吡咯與氧化劑的摩爾比為0.5?:?1~1.5?:?2?~?2.5；
3.根據權利要求1所述的一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中4-鹵代甲基苯硼酸、縛酸劑、含有鄰二醇或丙二醇結構的藥物與脫水劑的摩爾比為1?:?1.2~1.5?:?1.2~1.5?:?2。
4.根據權利要求1所述的一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中，有機溶劑為無水二甲基亞砜；縛酸劑為無水碳酸鉀，脫水劑為無水硫酸鈉。
5.根據權利要求1所述的一種基于聚吡咯的刺激響應型仿生載藥納米粒的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中...
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