【技術實現步驟摘要】
本申請屬于臨床體外診斷及醫學免疫學領域，涉及一種免疫檢測試劑，具體涉及一種采用磁珠化學發光技術檢測人體殼多糖酶3樣蛋白1（chi3l1）含量的磁珠化學發光檢測試劑盒。
技術介紹
1、殼多糖酶3樣蛋白1(chitinase-3-like?protein?1,chi3l1)，又稱人軟骨糖蛋白39(yk-40)，早在1992年被發現于人骨肉瘤細胞株mg63中，是一種分泌型糖蛋白，位于1號染色體，分子量約40kda。
2、chi3l1可以來源于多種細胞，如巨噬細胞、中性粒細胞、血管平滑肌細胞、癌細胞等，具有影響細胞增殖、遷移、侵襲、細胞凋亡和上皮間充質轉化；促進細胞外基質降解和組織重塑；促進血管生成，并在一定程度上參與胚胎發育等作用。研究證實chi3l1在各類炎癥性疾病、纖維化疾病中表達增加，慢性肝臟疾病中酒精性肝病、非酒精性肝病、慢性肝纖維化、肝硬化均發現chi3l1水平高于正常人。2019年版《慢性乙型肝炎防治指南》指出，chi3l1可預測alt正常或輕度升高患者的中、重度肝臟纖維化，提示外周血chi3l1水平與肝纖維化密切相關。近年來，有研究證實chi3l1可能影響細胞存活、增殖、組織重塑和血管生成，這表明它能夠促進腫瘤細胞的侵襲和轉移，近一步研究顯示在丙肝相關的肝癌患者中chi3l1水平顯著高于肝硬化和肝炎患者。綜上，血漿中chi3l1的水平對檢測肝硬化、肝纖維化、肝癌等具有重要意義。
3、現有檢測chi3l1的方法主要有酶聯免疫法、免疫層析、化學發光法等，但這些方法因其工藝復雜、線性范圍窄、檢測時間60
4、因此，目前尚需一種污染小、線性范圍寬、靈敏度高、操作簡單、自動化程度高、特異性好、成本低、檢測速度快的殼多糖酶3樣蛋白1(chi3l1)檢測試劑盒和使用方法。
技術實現思路
1、本專利技術旨在開發一種操作簡單、線性范圍寬、檢測速度快、靈敏度高、無污染、特異性好并成本低廉的一種測定人體殼多糖酶3樣蛋白1(chi3l1)含量的磁珠化學發光檢測試劑盒。
2、基于上述目的，本專利技術提供一種檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒，其特征在于，包括如下組分：
3、標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的生物素化結合物；
4、標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的酶標結合物；
5、含有鏈霉親和素磁珠的磁珠緩沖液；
6、發光底物液。
7、如上所述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的生物素化結合物和標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的酶標結合物使用nt緩沖液配制成抗體溶液，所述nt緩沖液包括0.005?%的消泡劑204，0.236?%的三水磷酸氫二鉀，0.54?%的無水磷酸二氫鉀，0.1?%的防腐劑proclin300，0.1?%的1?%鐵氰化鉀，3%的牛血清白蛋白，0.04?%的ans，ph值為6.5±0.1。
8、如上所述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒，其特征在于，其中所標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的生物素化結合物的濃度為2?ng/ml，其中所標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的酶標結合物的濃度為1.5?ng/ml。
9、如上述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒，其特征在于，還包括標準品稀釋液。
10、本專利技術的另一目的是提供如上所述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
11、（1）將chi3l1抗體與生物素偶聯；
12、（2）chi3l1抗體與酶標結合物偶聯；
13、（3）制備chi3l1生物素化結合物抗體溶液和chi3l1酶標結合物抗體溶液：使用nt緩沖液進行稀釋，使得chi3l1生物素化結合物抗體溶液和chi3l1酶標結合物抗體溶液的終濃度分別為2?ng/ml和1.5?ng/ml；
14、（4）制備包含鏈霉親和素磁珠的磁珠緩沖液和標準品稀釋液。
15、如上述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述磁珠緩沖液的濃度為2?mg/ml，所述磁珠緩沖液包括如下成分：磷酸二氫鈉2.56?g，磷酸氫二鈉0.43?g，氯化鈉9?g，牛血清白蛋白10?g，甘露醇20?g，4-氨基安替吡啉0.02?g，triton?x-100?0.1?ml，proclin?300?1?ml，加水定容至1l。
16、如上述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述標準品稀釋液包括0?ng/ml、3?ng/ml、6?ng/ml、18?ng/ml、54?ng/ml、120ng/ml濃度的ch3l1溶液。
17、本專利技術的另一目的是提供如上所述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒在檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量中的應用。
18、本專利技術采用磁珠化學發光法開發殼多糖酶3樣蛋白1(chi3l1)檢測試劑盒，與全自動化學發光分析儀搭配使用，基本無需人為干預。與現有的杭州普望生物技術有限公司chi3l1檢測試劑盒相比，本專利技術不再需要加入稀釋液將樣本稀釋20倍后再上機檢測，按照簡化了稀釋樣本的步驟，避免了因稀釋樣本而造成的檢測誤差。本專利技術縮短檢測時間短提高了檢測效率，最低檢測限為0.028?ng/ml，線性r2=0.9999，抗干擾性良好，穩定性提升至27個月，與已經上市的試劑盒相關性為r2=0.9986，優于市面上的檢測試劑盒。
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1.一種檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒，其特征在于，包括如下組分：
2.如權利要求1所述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的生物素化結合物和標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的酶標結合物使用NT緩沖液配制成抗體溶液，所述NT緩沖液包括0.005%的消泡劑204，0.236?%的三水磷酸氫二鉀，0.54?%的無水磷酸二氫鉀，0.1?%的防腐劑ProClin300，0.1?%的1?%鐵氰化鉀，3%的牛血清白蛋白，0.04?%的ANS，pH值為6.5±0.1。
3.如權利要求1或2所述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒，其特征在于，其中所標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的生物素化結合物的濃度為2?ng/mL，其中所標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的酶標結合物的濃度為1.5?ng/mL。
4.如權利要求1或2所述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒，其特征在于，還包括標準品稀釋液。
5.如權利要求1-4任一項所述的
6.如權利要求5所述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述磁珠緩沖液的濃度為2?mg/mL，所述磁珠緩沖液包括如下成分：磷酸二氫鈉2.56?g，磷酸氫二鈉0.43?g，氯化鈉9?g，牛血清白蛋白10?g，甘露醇20?g，4-氨基安替吡啉0.02?g，Triton?X-100?0.1?mL，Proclin?300?1?mL，加水定容至1L。
7.如權利要求5所述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述標準品稀釋液包括0?ng/mL、3?ng/mL、6?ng/mL、18?ng/mL、54?ng/mL、120?ng/mL濃度的CH3L1溶液。
8.如權利要求1-4任一項所述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒在檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒，其特征在于，包括如下組分：
2.如權利要求1所述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的生物素化結合物和標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的酶標結合物使用nt緩沖液配制成抗體溶液，所述nt緩沖液包括0.005%的消泡劑204，0.236?%的三水磷酸氫二鉀，0.54?%的無水磷酸二氫鉀，0.1?%的防腐劑proclin300，0.1?%的1?%鐵氰化鉀，3%的牛血清白蛋白，0.04?%的ans，ph值為6.5±0.1。
3.如權利要求1或2所述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒，其特征在于，其中所標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的生物素化結合物的濃度為2?ng/ml，其中所標記有殼多糖酶3樣蛋白1單克隆抗體的酶標結合物的濃度為1.5?ng/ml。
4.如權利要求1或2所述的檢測殼多糖酶3樣蛋白1含量的磁珠化學發光檢測試劑盒，其特征在于，還包括...
【專利技術屬性】
技術研發人員：韓霜，邱艷茹，劉敏，錢璞，黃璇，
申請(專利權)人：江南大學附屬醫院，
類型：發明
國別省市：
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