【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物，具體涉及一種nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、放射性肺損傷(radiation-induced?lung?injury,rili)是核與輻射突發(fā)事故中造成人員死亡的重要原因，也是臨床上胸部腫瘤患者放療常見(jiàn)的副反應(yīng)。據(jù)報(bào)道胸部腫瘤放療時(shí)有14.6％-37.2％病人伴有放射性肺損傷發(fā)生，這嚴(yán)重限制了腫瘤的治療效果，也影響了患者的生活質(zhì)量。rili起病急、病程長(zhǎng)，尤其是后期的纖維化，對(duì)患者的健康造成了嚴(yán)重的損害，同時(shí)也為家庭帶來(lái)了沉重的生活、經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，放射性肺損傷的防治研究不論對(duì)醫(yī)學(xué)健康還是社會(huì)發(fā)展都具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
2、由于rili發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，且病程緩慢、遷延，臨床上一直未有有效的防治方法。而現(xiàn)有的措施，也主要針對(duì)于rili的預(yù)防，包括活性氧清除劑、蛋白酶抑制劑、細(xì)胞因子拮抗劑等。這些藥物針對(duì)rili的某一環(huán)節(jié)起作用，能在一定程度上緩解rili，但對(duì)整個(gè)肺炎—肺纖維化的進(jìn)程卻未能起到良好的阻滯作用。相比于預(yù)防，臨床上對(duì)rili的治療措施更為有限，目前仍以糖皮質(zhì)激素為主。雖然，激素可有效減輕rili的早期炎癥情況，但帶來(lái)副作用則嚴(yán)重限制了其廣泛和長(zhǎng)期的應(yīng)用。
3、近年來(lái)，間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal?stem?cells,msc)的研究為rili的防治提供了新的思路和策略。msc是來(lái)源于發(fā)育早期中胚層的一類具有高度自我更新、多向分化潛能的多能干細(xì)胞。其廣泛存在于骨髓、外周血、臍帶血、胚胎肝臟等多種組織中，其中以骨髓來(lái)源多見(jiàn)。msc免疫原
4、2020年《nature》報(bào)道了抑制線粒體na+/ca2+交換蛋白(nclx)的激活能減輕線粒體的損傷。專利技術(shù)人驚奇的發(fā)現(xiàn)，nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)放射性肺損傷的效果顯著的好于未修飾的間充質(zhì)干細(xì)胞。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本專利技術(shù)的目的在于提供一種nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其制備方法和在放射性肺損傷中的防治應(yīng)用，解決了現(xiàn)有的間充質(zhì)干細(xì)胞移植體內(nèi)后在受照射肺組織存活時(shí)間有限，治療放射性肺損傷效果差的技術(shù)問(wèn)題。
2、為了解決上述問(wèn)題，本專利技術(shù)提供的技術(shù)方案如下：一種nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，所述nclx基因?yàn)榕cseq?id?no.1所示的nclx基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列。
3、本專利技術(shù)提供了一種nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，所述nclx基因序列如seqid?no.1所示。
4、本專利技術(shù)提供了一種nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法，所述方法為將nclx基因或與nclx基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列轉(zhuǎn)染至骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞獲得。
5、將基因片段轉(zhuǎn)染至細(xì)胞，可以采用現(xiàn)有技術(shù)中的任意一種方法。具體地，可以構(gòu)建含有nclx基因或與nclx基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列的重組載體，然后將重組載體轉(zhuǎn)染至干細(xì)胞中。可以采用現(xiàn)有技術(shù)已知的各種載體，例如慢病毒。所述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為可穩(wěn)定傳代的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
6、進(jìn)一步地，所述方法包括，對(duì)轉(zhuǎn)染后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，選取轉(zhuǎn)染成功的目的細(xì)胞。
7、本專利技術(shù)的另一方面提供了上述nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在制備放射性肺損傷藥物中的應(yīng)用。
8、所述放射性肺損傷可以為來(lái)自意外事故中的損傷，或者放療病人所遭受的損傷。一般而言，本文所指的損傷一般是指胸部局部照射劑量低于25gy。
9、本專利技術(shù)的另一方面提供了一種治療放射性肺損傷藥物，所述藥物含有治療有效量的如上所述的nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
10、進(jìn)一步地，所述藥物中還含有人體可接受的輔料。
11、所述藥物的使用方法可以在醫(yī)生的指導(dǎo)下使用，例如可以將上述nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞注入患者體內(nèi)，其注射劑量根據(jù)損傷情況而定。
12、本專利技術(shù)的另一方面提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物的有效成分之一為nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。其他藥物成分可以為治療其他癥狀的藥物，例如癌癥治療藥物。
13、本專利技術(shù)的有益效果在于：本專利技術(shù)的nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，對(duì)缺氧的耐受性強(qiáng)，對(duì)活性氧有較強(qiáng)的抵抗性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了，實(shí)驗(yàn)組小鼠顯著改善了肺組織肺泡塌陷、炎細(xì)胞浸潤(rùn)情況，降低肺組織的纖維化，nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具備開(kāi)發(fā)成治療放射性肺損傷藥物的潛力。為放射性肺損傷中的防治應(yīng)用提供了新的治療方案。
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1.一種NCLX基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，其特征在于，所述NCLX基因?yàn)榕cSEQ?IDNO.1所示的NCLX基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的NCLX基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，其特征在于，所述NCLX基因序列如SEQ?ID?NO.1所示。
3.如權(quán)利要求1所述的NCLX基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法，其特征在于，所述方法為將NCLX基因或與NCLX基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列轉(zhuǎn)染至骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞獲得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括構(gòu)建含有NCLX基因或與NCLX基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列的重組載體，然后將重組載體轉(zhuǎn)染至干細(xì)胞中。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述載體為慢病毒，所述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為可穩(wěn)定傳代的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
6.如權(quán)利要求1或2所述的NCLX基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在制備放射性肺損傷藥物中的應(yīng)用。
7.一種治療放射性肺損傷藥
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物，其特征在于，所述藥物中還含有人體可接受的輔料。
9.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物的有效成分之一為權(quán)利要求7或8所述的NCLX基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞藥物，還包括治療其他癥狀的藥物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，所述治療其他癥狀的藥物為癌癥治療藥物。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，其特征在于，所述nclx基因?yàn)榕cseq?idno.1所示的nclx基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，其特征在于，所述nclx基因序列如seq?id?no.1所示。
3.如權(quán)利要求1所述的nclx基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法，其特征在于，所述方法為將nclx基因或與nclx基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列轉(zhuǎn)染至骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞獲得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括構(gòu)建含有nclx基因或與nclx基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列的重組載體，然后將重組載體轉(zhuǎn)染至干細(xì)胞中。
5.根...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉虎，姜可兒，劉入菱，嚴(yán)子航，張澄，尉榮兵，張儒儀，范博帥，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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