【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于醫藥，具體涉及一種卵巢癌相關間充質干細胞的分離方法及其在抗腫瘤中的應用。
技術介紹
1、間充質干細胞(msc,mesenchymal?stem?cells)是一類來源于中胚層的多能干細胞，具有自我更新能力和多向分化潛能，其來源多樣，主要存在于骨髓、臍帶、胎盤、脂肪等組織。腫瘤微環境被廣泛認為是腫瘤生長和擴散的關鍵因素，它不僅為癌細胞提供必需的營養物質和生長信號，還通過復雜的細胞通信機制促進腫瘤的免疫逃逸和抗藥性。癌細胞通過招募和重編程非癌宿主細胞，如免疫細胞、周細胞等，以及重塑血管系統和細胞外基質，構建了一個支持其自身生存和增殖的生態位。在腫瘤微環境中，間充質干細胞通過分泌多種細胞因子影響腫瘤細胞的行為，并在多種生長因子和趨化因子的作用下遷移至腫瘤部位，參與并協調腫瘤基質的形成。由于間充質干細胞具有異質性，不同組織來源的間充質干細胞可能在功能上表現出不同的特征。卵巢癌ca-msc目前沒有特定的分離和鑒定方法，使研究缺乏一致性的標準。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是解決上述現有技術的不足，提供一種巢癌癌相關間充質干細胞的分離方法及其在抗腫瘤中的應用。
2、本專利技術是通過以下技術方案實現的：
3、本專利技術保護一種卵巢癌相關間充質干細胞的分離方法，包括以下步驟：
4、(s1)對卵巢癌患者的腫瘤新鮮樣本采用直接組織塊分離法，提取并分離出間充質干細胞；
5、(s2)依次通過細胞形態鑒定、表面標記物分析、迭代干性檢測、腫瘤
6、所述細胞形態鑒定是篩選：三極形、梭形伸展，直徑為280～350μm的細胞，且其有2-3個細胞突起，細胞核直徑為25～30μm，細胞質豐富；
7、所述表面標記物分析是通過細胞流式術篩選：cd105、cd73、cd90、cd44陽性，且cd45、cd34、cd11b、cd19、hla-dr陰性的細胞；
8、所述迭代干性檢測是篩選：從原代至第n代的連續傳代培養過程中，ca-msc細胞形態良好，干細胞表面標記物表達水平維持穩定的細胞；所述n為≥10的自然數；
9、所述腫瘤細胞標記物排除是：排除上皮細胞及卵巢原發上皮性惡性腫瘤細胞標志物陽性群體；
10、所述成纖維細胞標記物排除是：排除卵巢腫瘤相關成纖維細胞及成纖維細胞標志物陽性群體。
11、進一步地，所述采用組織塊分離法，提取并分離出間充質干細胞具體包括以下步驟：
12、將臨床診斷為卵巢癌的患者的腫瘤新鮮樣本在無菌條件下用含有雙抗的平衡鹽溶液進行洗滌，切成小塊，于間充質干細胞專用培養基中培養24小時，隨后移除組織塊，利用貼壁差異法，即利用不同細胞貼壁快慢差別來純化細胞，去除成上皮細胞，提取并分離出間充質干細胞。
13、優選地，所述雙抗為300u/ml青霉素和300μg/ml鏈霉素。
14、優選地，所述卵巢原發上皮性惡性腫瘤細胞標志物為epcam。
15、優選地，所述成纖維細胞標志物為α平滑肌動蛋白(α-sma)。
16、本專利技術還保護卵巢癌相關間充質干細胞在評價藥物對腫瘤微環境基質支持的抑制腫瘤細胞增殖的藥效中的用途。
17、本專利技術還保護卵巢癌相關間充質干細胞在評價藥物對腫瘤微環境基質支持的抗侵襲能力中的用途。
18、本專利技術還保護卵巢癌相關間充質干細胞在評價藥物對腫瘤微環境基質支持的抗成球能力中的用途。
19、本專利技術還保護卵巢癌相關間充質干細胞在評價藥物抗腫瘤藥效中的用途。
20、優選地，所述藥物為活性物質、中藥單體、和/或中藥復方。
21、本專利技術的有益效果在于：
22、本專利技術提供了一種卵巢癌相關間充質干細胞的分離方法及其在抗腫瘤中的應用。通過組織塊分離法分離細胞，利用免疫磁珠法分離純化細胞，并依次通過細胞形態鑒定、表面標記物分析、迭代干性檢測、腫瘤和/或成纖維細胞標記物排除實驗，篩選并確認其為腫瘤來源的間充質干細胞。實驗證實，卵巢癌相關間充質干細胞可用于評價抗腫瘤藥物的初步篩選、藥效評估、耐藥和毒理評估及藥理作用研究，主要體現為以下有益效果：(1)共培養模型在體外模擬體內腫瘤微環境的結構特性，為腫瘤細胞提供類似體內的附著和生長環境，這有助于藥物篩選時更真實地反映藥物在體內對腫瘤的作用效果；(2)對腫瘤基質支持的抗侵襲能力和/或對腫瘤基質支持的抗成球能力，此模型更好地模擬了腫瘤微環境對腫瘤支持、刺激腫瘤的生長作用；(3)體外及體內共培養模型中，細胞相互支持并通過旁分泌作用相互影響，體現了分泌模擬細胞間通訊網絡的影響，例如，某些藥物可能通過阻斷間充質干細胞向腫瘤細胞傳遞的促生長信號來發揮抗腫瘤作用；(4)提高藥物篩選準確性，在藥物篩選過程中可以同時評估藥物對腫瘤細胞和間充質干細胞相關靶點的影響。例如，一種藥物可能不僅能夠抑制腫瘤細胞的增殖，還能夠阻斷間充質干細胞對腫瘤細胞耐藥性的誘導；(5)減少動物實驗需求，通過利用腫瘤細胞與癌相關間充質干細胞共同作用的體外模型真實反映了體內微環境基質和腫瘤的關系狀態，可以在一定程度上替代部分動物實驗，有助于預測藥物的潛在臨床價值，為新藥研發和臨床試驗提供有力的數據支持。這不僅加速了新藥的上市進程，還為腫瘤患者帶來了更多、更好的治療選擇。對于推動腫瘤治療領域的進步、提升患者生存率和生活質量具有深遠的意義。
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1.一種卵巢癌相關間充質干細胞的分離方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述采用直接組織塊分離法，提取并分離出間充質干細胞具體包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述雙抗為300U/mL青霉素和300μg/mL鏈霉素。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述卵巢原發上皮性惡性腫瘤細胞標志物為EpCAM。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述成纖維細胞標志物為α平滑肌動蛋白(α-SMA)。
6.卵巢癌相關間充質干細胞在評價藥物對腫瘤微環境基質支持的腫瘤細胞增殖的藥效中的用途。
7.卵巢癌相關間充質干細胞在評價藥物對腫瘤微環境基質支持的抗侵襲能力中的用途。
8.卵巢癌相關間充質干細胞在評價藥物對腫瘤微環境基質支持的抗成球能力中的用途。
9.卵巢癌相關間充質干細胞在評價藥物抗腫瘤藥效中的用途。
10.根據權利要求6-9任一項所述的用途，其特征在于：所述藥物為活性物質、中藥單體、和/或中藥復方。
【技術特征摘要】
1.一種卵巢癌相關間充質干細胞的分離方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述采用直接組織塊分離法，提取并分離出間充質干細胞具體包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述雙抗為300u/ml青霉素和300μg/ml鏈霉素。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述卵巢原發上皮性惡性腫瘤細胞標志物為epcam。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述成纖維細胞標志物為α平滑...
【專利技術屬性】
技術研發人員：盧天公，卜子軒，薛夢微，田佳微，
申請(專利權)人：北京中醫藥大學，
類型：發明
國別省市：
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