【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及分子診斷，具體涉及mir-300-3p的檢測試劑在制備診斷angⅱ介導的心肌肥厚產(chǎn)品中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、病理性心肌肥厚是心肌細胞對病理狀況下壓力和/或容量超負荷，以及多種生長因子和/或激素的過度刺激所產(chǎn)生的心肌細胞結(jié)構(gòu)和功能的改變，表現(xiàn)為心肌沿細胞長軸方向增大，心房鈉尿肽anp、b型利鈉肽bnp、β肌球蛋白重鏈β-mhc等胚胎型基因表達的上調(diào)，最終導致心臟順應(yīng)性和循環(huán)泵功能降低，引發(fā)心力衰竭、心律失常和猝死。現(xiàn)有技術(shù)中，心肌肥厚的早期診斷尚存在不足，治療的藥物效果也不太理想，盡管心肌肥厚早期為代償性反應(yīng)，但在持續(xù)性炎癥、氧化應(yīng)激等多種病理性應(yīng)激刺激下，肥厚的心肌細胞可出現(xiàn)嚴重的能量代謝障礙，誘發(fā)大量心肌細胞凋亡，最終失代償并導致心力衰竭，然而大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已發(fā)展為心力衰竭，因此尋找特異的關(guān)鍵分子診斷靶點對心肌肥厚的早期診斷具有重要意義。
2、血管緊張素ⅱ，英文名稱為angiotensinⅱ，簡稱angⅱ是一種來自腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的生物活性肽，angⅱ水平升高有助于心臟重塑，長期心臟高負荷可以導致心肌肥大、心肌重塑，甚至發(fā)生心力衰竭。在與心衰相關(guān)的心肌重塑中，angⅱ含量與心肌肥大程度成正比，抑制其合成或阻斷其作用可有效減輕心肌肥大程度。
3、微小rna，即microrna，簡稱mirna，mirs是一類長度約為20～25個核苷酸的內(nèi)源性非編碼rna，不僅對人體內(nèi)的細胞發(fā)育及分化、細胞周期和穩(wěn)態(tài)等進行調(diào)節(jié)，還影響著生物體內(nèi)各種病理狀態(tài)的進程，是多種疾病的機制之一。研究顯示：
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、為解決以上問題，本專利技術(shù)提供mir-300-3p的檢測試劑在制備診斷angⅱ介導的心肌肥厚產(chǎn)品中的應(yīng)用。
2、本專利技術(shù)是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：
3、mir-300-3p的檢測試劑在制備診斷angⅱ介導的心肌肥厚產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述mir-300-3p的序列如seq?id?no.1所示。
4、優(yōu)選的，所述診斷的檢測樣本為動物心臟組織或心肌細胞。
5、優(yōu)選的，所述檢測試劑為定量檢測所述mir-300-3p表達水平的檢測試劑。
6、優(yōu)選的，所述檢測試劑包括擴增mir-300-3p特異性引物對forward?primer和reverse?primer；所述forward?primer如seq?id?no.2所示；所述reverse?primer如seq?idno.3所示。
7、優(yōu)選的，所述定量檢測所述mir-300-3p的方法為qrt-pcr。
8、優(yōu)選的，所述qrt-pcr具體步驟如下：
9、(1)rna提取：從細胞或組織中提取總rna。
10、(2)逆轉(zhuǎn)錄：使用逆轉(zhuǎn)錄酶將rna逆轉(zhuǎn)錄成cdna。
11、(3)qrt-pcr檢測mir-300-3p的表達：使用mir-300-3p特異性引物對forwardprimer和reverse?primer進行pcr擴增，監(jiān)測熒光信號的變化。
12、優(yōu)選的，所述qrt-pcr檢測mir-300-3p的表達的反應(yīng)體系為tb?green?premix?extaqii?10μl，forward?primer?0.8μl，reverse?primer?0.8μl，模板cdna2μl，ddh2o?6.4μl，總體積20μl。
13、優(yōu)選的，所述qrt-pcr檢測mir-300-3p的表達的反應(yīng)體系為tb?green?premix?extaqii?10μl，forward?primer?0.8μl，reverse?primer?0.8μl，模板cdna?2μl，ddh2o?6.4μl，總體積20μl。
14、優(yōu)選的，所述qrt-pcr檢測mir-300-3p的表達的反應(yīng)程序為95℃30s，95℃5s，60℃34s，反應(yīng)進行45個循環(huán)。
15、優(yōu)選的，所述qrt-pcr檢測mir-300-3p的表達的反應(yīng)程序為95℃30s，95℃5s，60℃34s，反應(yīng)進行45個循環(huán)。
16、與現(xiàn)有技術(shù)相比較，本專利技術(shù)具有如下有益效果：
17、本專利技術(shù)提供了mir-300-3p的檢測試劑在制備診斷angⅱ介導的心肌肥厚產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述mir-300-3p的序列如seq?id?no.1所示。本專利技術(shù)首次發(fā)現(xiàn)mir-300-3p在angⅱ誘導的心肌肥厚中表達上調(diào)，并且mir-300-3p促進angⅱ誘導的心肌肥厚，通過檢測mir-300-3p在心臟組織和心肌細胞中的表達水平，并且過表達mir-300-3p通過靶向acox1促進了心肌肥厚，這為壓力負荷過度引起的心肌肥厚的診斷提供基礎(chǔ)，為以后從分子水平診斷病理性心肌肥厚提供了理論依據(jù)，具有重大的理論意義和潛在的實用價值。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護點】
1.miR-300-3p的檢測試劑在制備診斷AngⅡ介導的心肌肥厚產(chǎn)品中的應(yīng)用，其特征在于，所述miR-300-3p的序列如SEQ?ID?NO.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述診斷的檢測樣本為動物心臟組織或心肌細胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測試劑為定量檢測所述miR-300-3p表達水平的檢測試劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測試劑包括擴增mi?R-300-3p特異性引物對Forward?Primer和Reverse?Primer；所述Forward?Prime?r如SEQ?ID?NO.2所示；所述Reverse?Primer如SEQ?ID?NO.3所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述定量檢測所述miR-300-3p的方法為qRT-PCR。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述qRT-PCR具體步驟如下：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述qRT-PCR檢測miR-300-3p的表達的反應(yīng)體系為TB
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述qRT-PCR檢測miR-300-3p的表達的反應(yīng)體系為TB?Green?Premix?Ex?TaqII?10μL，F(xiàn)orward?Primer?0.8μL，Reverse?Primer?0.8μL，模板cDNA2μL，ddH2O?6.4μL，總體積20μL。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述qRT-PCR檢測miR-300-3p的表達的反應(yīng)程序為94℃～96℃29s～31s，94℃～96℃4s～6s，59℃～61℃33s～35s，反應(yīng)進行45個循環(huán)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述qRT-PCR檢測miR-300-3p的表達的反應(yīng)程序為95℃30s，95℃5s，60℃34s，反應(yīng)進行45個循環(huán)。
...【技術(shù)特征摘要】
1.mir-300-3p的檢測試劑在制備診斷angⅱ介導的心肌肥厚產(chǎn)品中的應(yīng)用，其特征在于，所述mir-300-3p的序列如seq?id?no.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述診斷的檢測樣本為動物心臟組織或心肌細胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測試劑為定量檢測所述mir-300-3p表達水平的檢測試劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測試劑包括擴增mi?r-300-3p特異性引物對forward?primer和reverse?primer；所述forward?prime?r如seq?id?no.2所示；所述reverse?primer如seq?id?no.3所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述定量檢測所述mir-300-3p的方法為qrt-pcr。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述qrt-pcr具體步驟如下：
7.根據(jù)權(quán)利要...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：楊曉玲，李珍，王艷佳，楊梓堯，李昕怡，徐茜，
申請(專利權(quán))人：寧夏醫(yī)科大學，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。