【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于化妝品檢測領域，具體公開了一種化妝品及化妝品原料防曬功能評價方法及應用。
技術介紹
1、紫外線主要分為三種：長波紫外線（uva）、中波紫外線（uvb）和短波紫外線（uvc），uva和uvb對皮膚健康影響較大，其中uva能深入皮膚真皮層，導致皮膚光老化，uvb則主要引起皮膚曬傷。防曬產品（如防曬霜）是防護紫外線的重要手段。目前，防曬產品的防曬效果評價方法主要依賴紫外光譜儀器法、人體spf值法和體外重建皮膚模型法。
2、紫外光譜儀器法通過紫外光譜儀測定防曬樣品的紫外線吸光度和透射率，快速評估防曬效果。盡管該方法操作簡便，但由于結果較為抽象，消費者難以直觀理解，且不能完全模擬皮膚的生理反應，缺乏與實際防曬功效的直接聯系。人體spf值法通過在人體皮膚上測試防曬效果，評估防曬產品的有效性。雖然該方法具有較高的權威性和說服力，但測試過程成本高、時間長，且涉及人體實驗，存在一定的安全隱患，因此多用于防曬產品上市前的效果驗證，而不適用于防曬原料篩選或初期研發。體外重建皮膚模型法是利用體外重建皮膚模型來評估防曬功效，具備較高的安全性和精確性。然而，該方法模型制備周期長、成本高，限制了其廣泛應用，且不適合快速篩選大量防曬原料或進行初步預實驗。一些專利披露了使用石英玻璃板結合mrna表達檢測法，以石英玻璃材質板作為承接藥物的媒介，通過評價輻照后細胞的mrna表達水平來評價原料或產品的防曬功效。但該方法主要用于物理防曬劑或原料的評估，尤其是無透皮活性的物理防曬產品，對于化學和生物防曬劑，其安全性和功效性則難以通過該方法進行準確
技術實現思路
1、針對這些缺陷，本項專利技術提供了一種化妝品及化妝品原料防曬功能評價方法及應用。該方法基于細胞和斑馬魚模型，結合無接觸給藥方式，通過多層次指標實現防曬功效的全面評價：以長波紫外線（uva）輻照人真皮成纖維細胞后，通過細胞內β-半乳糖苷酶的表達和/或相關膠原蛋白的分泌來表征測試樣品的防曬老功效；以中波紫外線（uvb）輻照人角質形成細胞/斑馬魚后，通過檢測細胞存活率、dna損傷情況或炎癥因子分泌和斑馬魚胚胎的致死/致畸情況來表征測試樣品的防曬傷功效，該方法不僅能夠在細胞層面對防曬功效進行體外評價，還可通過斑馬魚模型模擬體內紫外線損傷，從而形成體內外結合的多維度評價體系。本專利技術提供的防曬功效評價體系高效、科學、可靠，為防曬化妝品的研發和性能優化提供了重要參考依據。
2、為實現上述目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、第一方面，本專利技術提供一種化妝品及化妝品原料防曬功能評價方法，所述評價方法利用不接觸給藥方式對測試樣品進行防曬效果測試，所述測試樣品為化妝品成品或經稀釋后的化妝品原料；所述測試包括皮膚細胞評價體外防曬功效和/或斑馬魚胚胎模型評價體內防曬功效；
4、所述不接觸給藥方式借助不接觸給藥裝置實現；所述不接觸給藥裝置包括給藥載體層，所述給藥載體層用于承載測試樣品；所述測試樣品與所述皮膚細胞或所述斑馬魚胚胎以所述給藥載體層相隔；所述給藥載體層為有光透射性的膜，所述膜帶有或不帶有微孔，所述微孔孔徑大小0.4-25?μm；
5、所述皮膚細胞評價體外防曬功效包括人角質形成細胞防曬傷功效檢測和人真皮成纖維細胞防曬老功效檢測；所述人角質形成細胞防曬傷功效檢測包括測量在uvb照射后由所述測試樣品引起的人角質形成細胞的細胞存活率、培養基中il-8含量或tail?dna含量中一項或多項的變化；所述人真皮成纖維細胞防曬老功效檢測包括測量在uva照射后由所述測試樣品引起的人真皮成纖維細胞中膠原蛋白表達和/或β-半乳糖苷酶染色的變化；所述斑馬魚胚胎模型評價體內防曬功效包括斑馬魚胚胎模型防曬傷功效檢測；所述斑馬魚胚胎模型曬傷功效檢測包括測量在uvb照射后由所述測試樣品引起的斑馬魚防胚胎致死率和致畸率的變化；
6、測量所述變化前，將所述測試樣品均勻涂覆于給藥載體層上；將所述皮膚細胞和所述斑馬魚胚胎放置在所述給藥載體層下方，在所述給藥載體層上方輻照紫外光。
7、本專利技術提供的防曬評價方法結合皮膚細胞和斑馬魚胚胎模型的變化指標，實現體外和體內防曬功效的多層次的全面評價。通過uvb輻照評估防曬傷功效，檢測人角質形成細胞的存活率、dna損傷（tail?dna含量）或炎癥因子（il-8）分泌變化，以及斑馬魚胚胎的致死率和致畸率；通過uva輻照評估防曬老功效，檢測人真皮成纖維細胞中膠原蛋白的分泌及β-半乳糖苷酶表達水平，利用皮膚細胞和胚胎模型全面模擬紫外線對人體皮膚的光損傷和光老化效應。
8、不接觸給藥方式為防曬功效評價提供了一種穩定、精準且創新的給藥方式。不接觸給藥裝置的給藥載體層具備穩定的透光性，能夠均勻傳遞紫外光至測試樣品下方的皮膚細胞或斑馬魚胚胎，真實模擬紫外線照射人體皮膚的環境。給藥載體層通過微孔設計實現通透性，允許化學和生物類防曬化妝品中的有效成分擴散至測試模型周圍，與皮膚細胞或斑馬魚胚胎接觸而不破壞化妝品體系。物理防曬化妝品可通過不帶微孔的不接觸給藥裝置實現物理防曬化妝品與皮膚細胞或斑馬魚胚胎的隔絕接觸，或使用帶微孔的不接觸給藥裝置通過皮膚細胞或馬魚胚胎的培養液面與給藥載體層保持一定的空間距離實現物理防曬化妝品與皮膚細胞或斑馬魚胚胎的隔絕接觸。該裝置兼容不同類型防曬產品，解決了測試過程中體系適配難題，為各類防曬產品的功效評價提供了科學且高效的技術支持。
9、本專利技術所提供的評價方法適用于物理防曬化妝品或化妝品原料，包括但不限于二氧化鈦、氧化鋅和奧克利林等防曬品原料以及含有這些成分的防曬霜、防曬棒、防曬噴霧等防曬產品。這些防曬物質，不易溶于水且不會滲透皮膚，通過物理屏障機制有效防止紫外線照射，通常通過反射或散射紫外線。
10、本專利技術所提供的評價方法還適用于化學防曬化妝品或化妝品原料，包括但不限于阿伏苯宗、辛伐他汀和雙苯酮等常見的化學防曬劑，這些成分通過吸收紫外線并轉化為熱能來達到防曬效果。
11、本專利技術所提供的評價方法還適用于生物防曬化妝品或化妝品原料，包括但不限于天然植物提取物和微生物發酵產物等，生物防曬成分通過增強皮膚的自然屏障功能或抗氧化作用來提供紫外線防護。
12、本專利技術中所述致畸率中畸形包括：發育停滯、無魚鰾、心包囊腫、脊柱彎曲、卵黃囊水腫、尾巴和尾鰭自我分解的一種或多種。
13、在一些實施例中，本專利技術所提供的一種化妝品及化妝品原料防曬功能評價方法還包括以下操作：
14、人角質形成細胞培養；
15、人真皮成纖維細胞培養；
16、獲取斑馬魚胚胎：將性成熟的斑馬魚按雌雄比1:2配對，自然交配后，雌魚進行產卵活動，即得所述斑馬魚受胚胎。
17、化妝品/化妝品原料樣品處理：化妝品原料根據產品擬定添加量使用適當溶劑稀釋。
18、優選地，所述不接觸給藥裝置包括內嵌小室本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種化妝品及化妝品原料防曬功能評價方法，其特征在于，所述評價方法利用不接觸給藥方式對測試樣品進行防曬效果測試，所述測試樣品為化妝品成品或經稀釋后的化妝品原料；所述測試包括皮膚細胞評價體外防曬功效和/或斑馬魚胚胎模型評價體內防曬功效；
2.根據權利要求1所述的防曬功能評價方法，其特征在于，所述不接觸給藥裝置包括內嵌小室和設有用于容納所述皮膚細胞或所述斑馬魚胚胎模型的凹槽的培養板；所述內嵌小室為上端開口的杯狀結構，所述給藥載體層構成內嵌小室杯底；所述內嵌小室的腔室位于所述凹槽內，所述內嵌小室上端口周向設置有水平向外延伸的邊沿，所述內嵌小室通過所述邊沿卡接在所述培養板的板面上并伸入所述培養板的凹槽內；所述給藥載體層與所述凹槽的底部留有間距；在使用所述不接觸給藥裝置進行防曬功效時，所述內嵌小室除底部給藥載體層外其余部分需做隔絕紫外線處理。
3.根據權利要求2所述的防曬功能評價方法，其特征在于，所述內嵌小室的給藥載體層不帶有微孔，材質為聚甲基丙烯酸甲酯。
4.根據權利要求2所述的防曬功能評價方法，其特征在于，所述內嵌小室的給藥載體層帶有微孔，材質為聚
5.根據權利要求2所述的防曬功能評價方法，其特征在于，所述給藥載體層與所述培養板底部之間的距離為0.5-1?cm。
6.根據權利要求2所述的防曬功能評價方法，其特征在于，所述給藥載體層表面具有凹凸紋理，厚度為1-4?mm。
7.根據權利要求1所述的防曬功能評價方法，其特征在于，所述人角質形成細胞防曬傷功效檢測的方法，包括以下步驟：
8.根據權利要求1所述的防曬功能評價方法，其特征在于，所述人真皮成纖維細胞防曬老功效檢測的方法，包括以下步驟：
9.根據權利要求1所述的防曬功能評價方法，其特征在于，所述斑馬魚胚胎模型防曬傷功效檢測的方法，包括以下步驟：
10.權利要求1-9任一項所述的防曬功能評價方法在評價化妝品防曬功能或篩選防曬化妝品中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種化妝品及化妝品原料防曬功能評價方法，其特征在于，所述評價方法利用不接觸給藥方式對測試樣品進行防曬效果測試，所述測試樣品為化妝品成品或經稀釋后的化妝品原料；所述測試包括皮膚細胞評價體外防曬功效和/或斑馬魚胚胎模型評價體內防曬功效；
2.根據權利要求1所述的防曬功能評價方法，其特征在于，所述不接觸給藥裝置包括內嵌小室和設有用于容納所述皮膚細胞或所述斑馬魚胚胎模型的凹槽的培養板；所述內嵌小室為上端開口的杯狀結構，所述給藥載體層構成內嵌小室杯底；所述內嵌小室的腔室位于所述凹槽內，所述內嵌小室上端口周向設置有水平向外延伸的邊沿，所述內嵌小室通過所述邊沿卡接在所述培養板的板面上并伸入所述培養板的凹槽內；所述給藥載體層與所述凹槽的底部留有間距；在使用所述不接觸給藥裝置進行防曬功效時，所述內嵌小室除底部給藥載體層外其余部分需做隔絕紫外線處理。
3.根據權利要求2所述的防曬功能評價方法，其特征在于，所述內嵌小室的給藥載體層不帶有微孔，材質為聚甲...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張志遠，孫波，王汝鮮，劉春楊，張晨旭，郭文柱，馬原，
申請(專利權)人：天津諾卡生物醫藥科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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