【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)屬于微生物及生物制品，具體涉及一株類(lèi)芽孢桿菌、菌劑、制備方法及其在多重耐藥大腸桿菌上的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、作為一種重要的人畜共患病原體-大腸桿菌，其耐藥性是一個(gè)令人擔(dān)憂(yōu)的問(wèn)題，目前，大腸桿菌感染的治療主要依賴(lài)于抗生素，抗耐藥微生物及其活性產(chǎn)物資源的開(kāi)發(fā)和利用被認(rèn)為是抗生素的可行替代品，眾多的研究表明藥用植物內(nèi)生菌及其代謝活性產(chǎn)物具有開(kāi)發(fā)新藥的潛力和解決細(xì)菌多重耐藥問(wèn)題的潛力。
2、藥用植物內(nèi)生菌是指能存在于藥用植物體內(nèi)，能單獨(dú)合成與藥用植物相同或類(lèi)似的活性產(chǎn)物。具有抗病毒、抗腫瘤、抗菌活性的植物內(nèi)生微生物次生代謝產(chǎn)物的發(fā)現(xiàn)為天然藥物的研發(fā)和生產(chǎn)提供了重要研究思路。
3、研究表明，中藥材內(nèi)生菌除產(chǎn)生具有抗菌、抗腫瘤和抗氧化作用的活性物質(zhì)外，還能產(chǎn)生抗蟲(chóng)類(lèi)、抗糖尿病類(lèi)等其他作用的活性物質(zhì)。從巴西蓮子草(alternantherabrasiliana)中分離出的枯草芽胞桿菌(bacillus?spp)可產(chǎn)生與其寄主植物相同的生物活性化合物。從藥用植物鳶尾的內(nèi)生真菌中分離出兩種異構(gòu)體pestacin和異pestacin，都表現(xiàn)出抗菌活性和抗氧化活性；從莢蘭屬植物內(nèi)生菌的代謝產(chǎn)物中分離的芳香倍半萜烯類(lèi)物質(zhì)對(duì)惡性瘧原蟲(chóng)具有顯著殺滅活性；黃連內(nèi)生真菌(phomopsis?sp)能夠產(chǎn)出黃連主要活性生物堿小檗堿；stierle等從短葉紅豆杉內(nèi)生菌安德列亞霉(taxomyces?andreanae)的次生代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)了抗癌化合物紫杉醇；藥用植物烏頭的內(nèi)生菌黑孢霉(nigrospora?sp.)產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物對(duì)
4、藥用植物及其內(nèi)生菌是重要的藥用資源，有利于天然藥物的研究與開(kāi)發(fā)，這類(lèi)內(nèi)生菌一旦開(kāi)發(fā)，能夠直接與實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用相關(guān)聯(lián)，產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會(huì)價(jià)值，這對(duì)加大天然產(chǎn)物的生產(chǎn)力及藥用植物的保護(hù)均具有重要意義。因此，加大內(nèi)生菌代謝成分的研究，獲取新的有效成分途徑是未來(lái)研究的重點(diǎn)。進(jìn)一步深入了解內(nèi)生菌與宿主植物的動(dòng)態(tài)相互作用和內(nèi)生菌基因的起源將有利于中藥材內(nèi)生菌戰(zhàn)略產(chǎn)業(yè)的巨大發(fā)展。
5、基于此，本專(zhuān)利技術(shù)欲從連翹根、莖、葉、花等不同組織中分離鑒定篩選內(nèi)生菌，并對(duì)其抗菌效果及抗菌活性物質(zhì)進(jìn)行研究，為新型抗菌活性物質(zhì)篩選奠定基礎(chǔ)，為新型抗耐藥微生物藥物的研究提供參考。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、針對(duì)目前獸醫(yī)臨床大腸桿菌病難防難控、細(xì)菌耐藥性強(qiáng)、無(wú)特效藥物等防控難題，本專(zhuān)利技術(shù)提供一株類(lèi)芽孢桿菌、菌劑、制備方法及其在多重耐藥大腸桿菌上的應(yīng)用，從連翹根、莖、葉、花等不同組織中分離鑒定篩選內(nèi)生菌，并對(duì)其抗菌效果及抗菌活性物質(zhì)進(jìn)行研究，為新型抗菌活性物質(zhì)篩選奠定基礎(chǔ)，為新型抗耐藥微生物藥物的研究提供參考，為畜禽生產(chǎn)中抗生素替代物的改進(jìn)及研究提供思路。
2、本專(zhuān)利技術(shù)解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的方案是：一株類(lèi)芽孢桿菌，所述芽孢桿菌為類(lèi)芽孢桿菌(paenibacillus?sp.)hnyj2209j，保藏編號(hào)：cgmcc?no.31256，保藏日期：2024年7月10日，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。
3、進(jìn)一步地，所述類(lèi)芽孢桿菌hnyj2209j是從連翹及其植物組織中篩選得到。
4、本專(zhuān)利技術(shù)還提供一種類(lèi)芽孢桿菌生物菌劑，包括類(lèi)芽孢桿菌hnyj2209j和/或所述類(lèi)芽孢桿菌hnyj2209j的代謝產(chǎn)物。
5、本專(zhuān)利技術(shù)還提供一種類(lèi)芽孢桿菌生物菌劑的制備方法，包括以下步驟：
6、步驟一、將類(lèi)芽孢桿菌hnyj2209j接種到胰蛋白大豆瓊脂固體培養(yǎng)基上，在28-30℃下培養(yǎng)24-48小時(shí)；
7、步驟二、取步驟一培養(yǎng)的菌種接入胰蛋白大豆液體培養(yǎng)基內(nèi)，在28-30℃下培養(yǎng)24-48h，得種子液；
8、步驟三、將種子液按照2-3％的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在28-30℃、轉(zhuǎn)速80-120rpm、ph?6.8-7.2條件下發(fā)酵培養(yǎng)24-48小時(shí)，收集發(fā)酵液，即得微生物菌劑；
9、步驟四、將步驟三所得發(fā)酵液，用噴粉設(shè)備噴成干粉，即得微生物粉劑。
10、進(jìn)一步地，所述芽孢桿菌生物菌劑的活菌濃度為10-13×1012cfu/ml。
11、本專(zhuān)利技術(shù)還提供一株類(lèi)芽孢桿菌或依據(jù)其制備的生物菌劑在多重耐藥大腸桿菌上的應(yīng)用。
12、進(jìn)一步地，是其在防治多重耐藥大腸桿菌為攜帶新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶(ndm1/ndm4/ndm5)上的應(yīng)用。
13、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專(zhuān)利技術(shù)的有益效果是：
14、本專(zhuān)利技術(shù)提供的一株類(lèi)芽孢桿菌、菌劑、制備方法及其在多重耐藥大腸桿菌上的應(yīng)用，其中是從連翹及其組織中分離篩選出的類(lèi)芽孢桿菌hnyj2209j，并通過(guò)評(píng)估其抑菌活性可以得到，該類(lèi)芽孢桿菌hnyj2209j對(duì)大腸桿菌的抑菌圈直徑均＞20mm，說(shuō)明類(lèi)芽孢桿菌hnyj2209j對(duì)攜帶新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶的“超級(jí)耐藥”大腸桿菌效果均具有較強(qiáng)的抑菌效果，即依據(jù)該芽孢桿菌制備的生物菌劑對(duì)多重耐藥大腸桿菌有較強(qiáng)的抑菌殺菌效果。
15、并且本專(zhuān)利技術(shù)經(jīng)過(guò)多重實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本專(zhuān)利技術(shù)的類(lèi)芽孢桿菌hnyj2209j制備的生物菌劑對(duì)產(chǎn)蛋雞大腸桿菌病均具有100％的防治效果；本專(zhuān)利技術(shù)的類(lèi)芽孢桿菌hnyj2209j制備的生物菌劑對(duì)羔羊腹瀉具有很好的防治效果，可以有效解決羔羊腹瀉的防治難題；本專(zhuān)利技術(shù)類(lèi)芽孢桿菌hnyj2209j制備的生物菌劑對(duì)犢牛大腸桿菌病具有很好的防治效果，可以有效解決犢牛大腸桿菌病的防治難題。
16、且本專(zhuān)利技術(shù)的生物菌劑制備方法簡(jiǎn)單，按照口服、伴料或飲水中的任一種方式使用對(duì)多重耐藥菌：大腸桿菌均能達(dá)到很好的抗菌效果，使用方便，無(wú)抗生素殘留，高效安全。
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1.一株類(lèi)芽孢桿菌，其特征在于：所述芽孢桿菌為類(lèi)芽孢桿菌（Paenibacillus?sp.）HNYJ2209J，保藏編號(hào)：CGMCC?No.31256，保藏日期：2024年7月10日，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的類(lèi)芽孢桿菌，其特征在于：所述類(lèi)芽孢桿菌HNYJ2209J是從連翹及其植物組織中篩選得到。
3.一種類(lèi)芽孢桿菌生物菌劑，其特征在于：包括類(lèi)芽孢桿菌HNYJ2209J和/或所述類(lèi)芽孢桿菌HNYJ2209J的代謝產(chǎn)物。
4.一種類(lèi)芽孢桿菌生物菌劑的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的類(lèi)芽孢桿菌生物菌劑的制備方法，其特征在于：所述芽孢桿菌生物菌劑的活菌濃度為10-13×1012cfu/mL。
6.一株類(lèi)芽孢桿菌或依據(jù)其制備的生物菌劑在多重耐藥大腸桿菌上的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于：其在防治多重耐藥大腸桿菌為攜帶新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶（NDM1/NDM4/NDM5）上的
...【技術(shù)特征摘要】
1.一株類(lèi)芽孢桿菌，其特征在于：所述芽孢桿菌為類(lèi)芽孢桿菌（paenibacillus?sp.）hnyj2209j，保藏編號(hào)：cgmcc?no.31256，保藏日期：2024年7月10日，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的類(lèi)芽孢桿菌，其特征在于：所述類(lèi)芽孢桿菌hnyj2209j是從連翹及其植物組織中篩選得到。
3.一種類(lèi)芽孢桿菌生物菌劑，其特征在于：包括類(lèi)芽孢桿菌hnyj2209j和/或...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李海利，辛?xí)粤?/a>，楊素新，徐引弟，王治方，張立憲，朱文豪，游一，焦文強(qiáng)，白紅杰，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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