【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及畜禽疫苗，尤其涉及一種茯苓多糖負載型納米材料及其制備方法和應用。
技術介紹
1、茯苓是多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，是我國傳統的藥食同源中藥材，性味甘、淡，平，歸心、脾、腎經，具有利水滲濕、健脾寧心等功效。現代研究表明，茯苓的主要藥理作用為免疫調節、抗腫瘤、保肝、抗炎等。茯苓多糖（poria?cocos?polysaccharide，pcp）是茯苓的主要成分，主要由葡萄糖、半乳糖、巖藻糖和甘露糖組成，具有良好的免疫活性。研究發現，茯苓多糖作為多種疫苗（流感病毒滅活疫苗、乙肝疫苗、炭疽疫苗以及全滅活狂犬病疫苗等）的免疫刺激劑或佐劑，能有效增強機體的體液免疫和細胞免疫應答，提高機體抗病毒攻擊的能力，具有良好的疫苗佐劑應用前景。然而，茯苓多糖在體內代謝較快，存在靶向性差和生物利用度低等不足，無法誘導持久的免疫應答，且只有在高劑量時才具有理想的免疫增強效果。因此，如何提高茯苓多糖的免疫增強作用和佐劑活性，延長作用時間，降低使用劑量，提高茯苓多糖的靶向性和生物利用度，是目前畜禽臨床疫苗領域亟需解決的問題。
技術實現思路
1、針對上述問題，本專利技術提供一種茯苓多糖負載型納米材料及其制備方法和應用，以氧化錳納米材料作為茯苓多糖的載體，能夠顯著提高茯苓多糖的免疫刺激作用，延長其半衰期，靶向遞送至細胞和器官，促進樹突狀細胞的活化，從而提高茯苓多糖的生物利用度，增強藥物的功效。
2、為解決上述技術問題，本專利技術提供的技術方案是：
3、第一方面，本專利技術提供一種
4、相對于現有技術，本專利技術提供的茯苓多糖負載型納米材料，以氧化錳納米材料作為藥物載體，可以控制釋放負載的茯苓多糖，延長其半衰期，靶向遞送至細胞和器官，從而提高茯苓多糖（藥物）的生物利用度，增強藥物的功效。氧化錳納米材料的穩定性好，具有良好的生物相容性，可與機體的h+/h2o2反應生成水溶性的mn2+和o2，或與機體的谷胱甘肽反應生成氧化性谷胱甘肽，從而被腎臟快速代謝排出體外，具有良好的生物安全性和生物降解性。茯苓多糖負載型納米材料不僅能夠解決茯苓多糖的體內代謝快、生物利用度低、使用劑量高等問題，而且體系中的茯苓多糖和氧化錳納米材料協同能夠增強機體的免疫應答，增強疫苗的免疫效果，對防治疾病具有重要意義。
5、實施例結果表明，氧化錳納米材料作為茯苓多糖的藥物載體能夠顯著提高茯苓多糖的免疫刺激作用，同時還能夠激活cgas-sting通路，促進樹突狀細胞的活化，并將其與模式抗原ova混合吸附后對小鼠進行應用免疫，有效提高了小鼠的體液免疫與細胞免疫應答，具有較高的市場應用價值。錳離子可作為一種有效的先天免疫刺激劑，通過激活環狀gmp-amp酶（cyclic?gmp-amp?synthase，cgas）-干擾素基因的激活基因（stimulator?ofinterferon?genes，sting）通路（即cgas-sting通路），誘導樹突狀細胞（dendritic?cells，dcs）的成熟，促進i型ifn細胞因子（ifn-β）的表達，激活先天性免疫應答。
6、優選的，所述茯苓多糖和所述氧化錳納米材料的質量比為(5~30):100，進一步優選為(10~20):100。
7、優選的，所述氧化錳納米材料為蜂窩狀氧化錳納米顆粒。
8、蜂窩狀氧化錳納米顆粒為超大介孔的納米尖刺結構，比表面積大，能夠高效吸附藥物和抗原，起到保護藥物和抗原的效果，延長作用時間，促進藥物和抗原被細胞攝取，從而提高抗原的靶向性和藥物的生物利用度。
9、優選的，所述茯苓多糖負載型納米材料的粒徑為100nm~300nm，表面積為210m2/g~270m2/g，孔體積為0.7cm3/g~1.2cm3/g，平均孔徑為12nm~18nm。
10、優選的，所述氧化錳納米材料的制備方法包括以下步驟：
11、將高錳酸鉀溶于水中，加入不飽和還原劑進行氧化還原反應，得氧化錳納米材料。
12、進一步優選的，所述不飽和還原劑為油酸。
13、本專利技術采用油酸作為還原劑和模板劑，可以增加氧化錳納米材料的空隙，得到蜂窩狀氧化錳納米顆粒。
14、示例的，水選用去離子水。
15、進一步優選的，所述高錳酸鉀、所述水和所述不飽和還原劑的質量體積比為1g:(450~550)ml:(8~12)ml。
16、本專利技術通過限定上述比例，可以進一步提高氧化錳納米材料的的表面積和孔體積，更利用提高后續對茯苓多糖和抗原的負載量，以增強藥效。
17、進一步優選的，所述氧化還原反應的溫度為5℃~40℃，反應時間為5h~12h。
18、進一步優選的，所述氧化還原反應結束后，還需要進行固液分離，取沉淀物進行洗滌和干燥，得所述氧化錳納米材料。
19、示例的，固液分離可在10000rpm~13000rpm下離心15min~30min后，收集沉淀。
20、示例的，洗滌可先用乙醇洗滌2次~3次，再用去離子水洗滌2次~3次。
21、示例的，干燥的溫度為55℃~65℃，干燥時間為24h~48h。
22、第二方面，本專利技術提供一種所述的茯苓多糖負載型納米材料的制備方法，包括以下步驟：
23、將氧化錳納米材料與水混合，加入茯苓多糖進行攪拌浸漬，得茯苓多糖負載型納米材料。
24、優選的，所述混合采用超聲處理，超聲功率為120w~180w，混合溫度為-5℃~5℃，混合時間為15min~30min。
25、示例的，混合可采用冰水浴。
26、示例的，水選自去離子水。
27、優選的，所述氧化錳納米材料、所述水和所述茯苓多糖的質量體積比為(1~5)g:(1~5)l:1g。
28、優選的，所述攪拌浸漬的溫度為5℃~40℃，浸漬時間為12h~24h。
29、優選的，所述攪拌浸漬結束后，還包括進行固液分離，取沉淀物進行洗滌和干燥，得所述茯苓多糖負載型納米材料。
30、示例的，固液分離可在10000rpm~13000rpm下離心15min~30min后，收集沉淀。
31、示例的，洗滌可用水洗滌2次~3次。
32、示例的，干燥的溫度為55℃~65℃，干燥時間為24h~48h。
33、本專利技術提供的茯苓多糖負載型納米材料的制備方法，操作簡單易行，設備簡單，通過常溫下的物理吸附即可將茯苓多糖負載于氧化錳納米材料的孔徑中。
34、第三方面，本專利技術提供一種免疫佐劑，包括所述的茯苓多糖負載型納米材料或由所述的茯苓多糖負載型納米材料的制備方法制備得到的茯苓多糖負載型納米材料。
35、第四方面，本專利技術提供一種疫苗，包括所述的免疫佐劑和抗原。
36、優選的，所述抗原為ova抗原。
37、優選的，所述茯苓多糖負載型納米材料和所述抗本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種茯苓多糖負載型納米材料，其特征在于，包括氧化錳納米材料和負載在所述氧化錳納米材料上的茯苓多糖。
2.如權利要求1所述的茯苓多糖負載型納米材料，其特征在于，所述茯苓多糖和所述氧化錳納米材料的質量比為(5~30):100。
3.如權利要求1所述的茯苓多糖負載型納米材料，其特征在于，所述氧化錳納米材料為蜂窩狀氧化錳納米顆粒；
4.如權利要求1~3任一項所述的茯苓多糖負載型納米材料，其特征在于，所述氧化錳納米材料的制備方法包括以下步驟：
5.如權利要求4所述的茯苓多糖負載型納米材料，其特征在于，所述不飽和還原劑為油酸；
6.權利要求1~5任一項所述的茯苓多糖負載型納米材料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
7.如權利要求6所述的茯苓多糖負載型納米材料的制備方法，其特征在于，所述混合采用超聲處理，超聲功率為120W~180W，混合溫度為-5℃~5℃，混合時間為15min~30min；
8.一種免疫佐劑，其特征在于，包括權利要求1~5任一項所述的茯苓多糖負載型納米材料或由權利要求6~7任一項所述的
9.一種疫苗，其特征在于，包括權利要求8所述的免疫佐劑和抗原。
10.如權利要求9所述的疫苗，其特征在于，所述抗原為OVA抗原；
...【技術特征摘要】
1.一種茯苓多糖負載型納米材料，其特征在于，包括氧化錳納米材料和負載在所述氧化錳納米材料上的茯苓多糖。
2.如權利要求1所述的茯苓多糖負載型納米材料，其特征在于，所述茯苓多糖和所述氧化錳納米材料的質量比為(5~30):100。
3.如權利要求1所述的茯苓多糖負載型納米材料，其特征在于，所述氧化錳納米材料為蜂窩狀氧化錳納米顆粒；
4.如權利要求1~3任一項所述的茯苓多糖負載型納米材料，其特征在于，所述氧化錳納米材料的制備方法包括以下步驟：
5.如權利要求4所述的茯苓多糖負載型納米材料，其特征在于，所述不飽和還原劑為油酸；
6.權利要求1~5任一...
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