【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于檢測，具體涉及一種基于液相芯片檢測ad診斷標志物的方法，還涉及一種與該檢測方法相匹配的檢測試劑盒。
技術介紹
1、老年性癡呆(又稱阿爾茨海默病，alzheimer?disease，ad)是一種以認知功能減退、生活功能下降及精神行為異常為臨床表現的神經系統退行性疾病。ad的典型病理特征是神經元內出現神經原纖維纏結(nft)，細胞外有老年斑(sp)沉積及神經元數量減少。
2、ad早期患者的生理和心理與正常衰老之間沒有明顯的界限，很難及時為患者確診，因此目前仍缺乏特異的診斷及有效的治療。而理想的診療應在大量突觸和神經元喪失以前，所以目前對于該病的研究重點轉移到了對于ad早期或極早期的診斷和治療上。然而，除了在患者死后通過大腦中衰老斑和神經纖維混亂的出現這些指標進行疾病確認外還沒有公認的診斷標準。臨床診斷主要根據病人的病史，大腦影像學以及心理學，認知和神經學測試。實驗室輔助診斷方法主要是檢測體液中含有的可溶性標志物。
3、近年，眾多ad研究專家及機構投入大量精力研究生物學檢測指標，并從ad患者的腦脊液或血液中發現一些具鑒別診斷意義的生化指標，如tau蛋白、β淀粉樣蛋白(aβ)、載脂蛋白e(apoe)、aβ前體蛋白(app)、早老素(ps-1，ps-2)和天冬氨酸轉氨酶(ast)等。t-tau(總tau蛋白)，p-tau(磷酸化tau蛋白)和aβ1-42是用于ad輔助診斷的3種重要生物學標記物。如公開號為：cn117471007b的專利技術專利公開了一種血漿β-淀粉樣蛋白檢測方法，該方法先通過磁珠富集
技術實現思路
1、基于現有技術中存在上述問題，本專利技術提供一種基于液相芯片檢測ad診斷標志物的方法，在樣品和特異性微球免疫吸附反應體系或者交聯反應體系中加入鈣離子，所述樣品包括標準品、待測樣本、對照樣本或者標記樣本。
2、優選的，在反應體系中加入鈣離子的具體方法是配制含有鈣離子的反應緩沖液，再將樣品和特異性微球置于反應緩沖液中進行免疫吸附反應或者交聯反應；所述反應緩沖液包括氯化鈣和氨基酸鈣，氯化鈣:氨基酸鈣＝3-4:1，且反應緩沖液中鈣離子的工作濃度是0.8-2.4mol/l。
3、優選的，所述氨基酸鈣是甘氨酸鈣或者天門冬氨酸鈣，或者甘氨酸鈣和天門冬氨酸鈣的混合物。
4、優選的，所述液相芯片包括：
5、包被微球：包括包被了aβ42捕獲抗體的微球、包被了aβ40捕獲抗體的微球、包被了p-tau181捕獲抗體的微球、包被了p-tau217捕獲抗體的微球、包被了t-tau捕獲抗體的微球、包被了gfap捕獲抗體的微球和包被了nfl捕獲抗體的微球，上述微球分別具有不同顏色編碼；
6、生物素標記檢測抗體：包括分別用生物素標記的aβ42、aβ40、p-tau181、p-tau217、t-tau、gfap和nfl的檢測抗體；
7、鏈親和素藻紅蛋白。
8、優選的，所述的一種基于液相芯片檢測ad診斷標志物的方法包括以下詳細步驟：
9、步驟s1，等比例取各包被微球并都加入到反應緩沖液中，震蕩，使包被微球均勻的懸浮于反應緩沖液中，得到混合體系a；
10、步驟s2，取待測樣本加入到混合體系a中，黑暗震蕩孵育，得到混合體系b；
11、步驟s3，取生物素標記檢測抗體加入到混合體系b中，黑暗震蕩孵育，得到混合體系c，各檢測抗體的終濃度是1-3μg/ml；
12、步驟s4，取鏈親和素藻紅蛋白加入到混合體系c中，黑暗震蕩孵育，得到混合體系d；
13、步驟s5，采用液相芯片分析儀對混合體系d進行檢測分析。
14、優選的，所述步驟s1中各包被微球在混合體系a的終濃度都是145-165個/μl；步驟s1中反應緩沖液的用量是每1ml待測樣本使用1ml反應緩沖液。
15、優選的，步驟s2、s3和s4中的孵育溫度都是25℃，震蕩是置于微孔板振蕩器上以600轉速度震蕩。
16、優選的，所述步驟s1中震蕩后還包括超聲波處理，超聲波處理的時間是30s。
17、本專利技術還提供一種基于液相芯片檢測ad診斷標志物的試劑盒，其包括免疫結合或交聯反應緩沖液，所述免疫結合或交聯反應緩沖液包含氯化鈣和氨基酸鈣，氯化鈣:氨基酸鈣＝3-4mol:1mol，且反應緩沖液中鈣離子的工作濃度是0.8-2.4mol/l；所述氨基酸鈣是甘氨酸鈣或者天門冬氨酸鈣，或者甘氨酸鈣和天門冬氨酸鈣的混合物。
18、優選的，所述的一種基于液相芯片檢測ad診斷標志物的試劑盒還包括：
19、捕獲抗體，分別是aβ42、aβ40、p-tau181、p-tau217、t-tau、gfap和nfl的捕獲抗體，所述捕獲抗體是分別能與對應蛋白特異性結合的單克隆抗體；
20、生物素標記檢測抗體：包括分別用生物素標記的aβ42、aβ40、p-tau181、p-tau217、t-tau、gfap和nfl的檢測抗體，所述檢測抗體是分別能與對應蛋白特異性結合的單克隆抗體或者多克隆抗體；
21、標準品，分別是aβ42、aβ40、p-tau181、p-tau217、t-tau、gfap和nfl的標準品；
22、以及鏈親和素藻紅蛋白、沒包被的原始微球、質控液和基質液。
23、本專利技術的有益效果是：在免疫反應或者交聯反應體系中引入了鈣離子，通過鈣離子能促進蛋白結合的特性提升了反應體系中兩相互特異性結合的蛋白的結合效率，再配合甘氨酸和天門冬氨酸的促進作用能進一步的提升結合效率，可以極大的降低檢測下限，從而可以進一步的降低取樣量，減少傷害或者以相同的取樣量進行更多的檢測。
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1.一種基于液相芯片檢測AD診斷標志物的方法，其特征在于，在樣品和特異性微球免疫吸附反應體系或者交聯反應體系中加入鈣離子，所述樣品包括標準品、待測樣本、對照樣本或者標記樣本。
2.根據權利要求1所述的一種基于液相芯片檢測AD診斷標志物的方法，其特征在于，在反應體系中加入鈣離子的具體方法是配制含有鈣離子的反應緩沖液，再將樣品和特異性微球置于反應緩沖液中進行免疫吸附反應或者交聯反應；所述反應緩沖液包括氯化鈣和氨基酸鈣，氯化鈣:氨基酸鈣＝3-4:1，且反應緩沖液中鈣離子的工作濃度是0.8-2.4mol/L。
3.根據權利要求2所述的一種基于液相芯片檢測AD診斷標志物的方法，其特征在于，所述氨基酸鈣是甘氨酸鈣或者天門冬氨酸鈣，或者甘氨酸鈣和天門冬氨酸鈣的混合物。
4.根據權利要求1-3任一所述的一種基于液相芯片檢測AD診斷標志物的方法，其特征在于，所述液相芯片包括：
5.根據權利要求4所述的一種基于液相芯片檢測AD診斷標志物的方法，其特征在于，其包括以下詳細步驟：
6.根據權利要求5所述的一種基于液相芯片檢測AD診斷標志物的方法
7.根據權利要求5所述的一種基于液相芯片檢測AD診斷標志物的方法，其特征在于，步驟S2、S3和S4中的孵育溫度都是25℃，震蕩是置于微孔板振蕩器上以600轉速度震蕩。
8.根據權利要求5所述的一種基于液相芯片檢測AD診斷標志物的方法，其特征在于，所述步驟S1中震蕩后還包括超聲波處理，超聲波處理的時間是30s。
9.一種基于液相芯片檢測AD診斷標志物的試劑盒，其特征在于，其包括免疫結合或交聯反應緩沖液，所述免疫結合或交聯反應緩沖液包含氯化鈣和氨基酸鈣，氯化鈣:氨基酸鈣＝3-4mol:1mol，且反應緩沖液中鈣離子的工作濃度是0.8-2.4mol/L；所述氨基酸鈣是甘氨酸鈣或者天門冬氨酸鈣，或者甘氨酸鈣和天門冬氨酸鈣的混合物。
10.根據權利要求9所述的一種基于液相芯片檢測AD診斷標志物的試劑盒，其特征在于，其還包括：
...【技術特征摘要】
1.一種基于液相芯片檢測ad診斷標志物的方法，其特征在于，在樣品和特異性微球免疫吸附反應體系或者交聯反應體系中加入鈣離子，所述樣品包括標準品、待測樣本、對照樣本或者標記樣本。
2.根據權利要求1所述的一種基于液相芯片檢測ad診斷標志物的方法，其特征在于，在反應體系中加入鈣離子的具體方法是配制含有鈣離子的反應緩沖液，再將樣品和特異性微球置于反應緩沖液中進行免疫吸附反應或者交聯反應；所述反應緩沖液包括氯化鈣和氨基酸鈣，氯化鈣:氨基酸鈣＝3-4:1，且反應緩沖液中鈣離子的工作濃度是0.8-2.4mol/l。
3.根據權利要求2所述的一種基于液相芯片檢測ad診斷標志物的方法，其特征在于，所述氨基酸鈣是甘氨酸鈣或者天門冬氨酸鈣，或者甘氨酸鈣和天門冬氨酸鈣的混合物。
4.根據權利要求1-3任一所述的一種基于液相芯片檢測ad診斷標志物的方法，其特征在于，所述液相芯片包括：
5.根據權利要求4所述的一種基于液相芯片檢測ad診斷標志物的方法，其特征在于，其包括以下詳細步驟：
6.根據權利要求5所述的一種基...
【專利技術屬性】
技術研發人員：黃曉蕓，林菡，陳國華，吳強強，伏紅霞，官少兵，黃文彩，付文金，
申請(專利權)人：東莞市厚街醫院，
類型：發明
國別省市：
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