【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于納米材料，具體涉及一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗及其制備方法。
技術(shù)介紹
1、惡性腫瘤是導(dǎo)致患者死亡的主要原因，腫瘤高效治療及延緩腫瘤復(fù)發(fā)對于提高全球預(yù)期壽命至關(guān)重要。免疫治療(包括免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過繼細(xì)胞治療、細(xì)胞因子和癌癥疫苗)已成為腫瘤治療的趨勢和主流。尤其是腫瘤疫苗，其對防治腫瘤復(fù)發(fā)和腫瘤轉(zhuǎn)移具有先天的優(yōu)勢，具有預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)和形成長期免疫記憶的特點(diǎn)。與傳統(tǒng)疫苗稍有區(qū)別，腫瘤疫苗是通過激發(fā)特異性的細(xì)胞免疫反應(yīng)阻止腫瘤生長，最終根除腫瘤細(xì)胞。它基于腫瘤細(xì)胞自身包含多種腫瘤相關(guān)抗原這一原理。正常情況下，人體免疫系統(tǒng)可能無法有效識別腫瘤細(xì)胞，腫瘤疫苗通過對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行處理，例如滅活腫瘤細(xì)胞、提取腫瘤細(xì)胞裂解物或者利用基因工程技術(shù)改造腫瘤細(xì)胞相關(guān)成分等。這些處理后的腫瘤相關(guān)抗原可以激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，包括t細(xì)胞、b細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活化，使免疫系統(tǒng)能夠識別并殺傷腫瘤細(xì)胞，無論是原發(fā)性腫瘤還是潛在的轉(zhuǎn)移瘤，為腫瘤治療開辟了新的方向。目前，腫瘤疫苗已成為腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。
2、但是現(xiàn)有的腫瘤疫苗存在以下難題：(1)制備困難：腫瘤疫苗的制備過程復(fù)雜，需要獲取患者的腫瘤組織，從中提取腫瘤抗原，然后進(jìn)行加工和制備疫苗。這一過程不僅耗時(shí)費(fèi)力，還可能受到腫瘤組織質(zhì)量和數(shù)量的限制。原因在于腫瘤組織的獲取需要進(jìn)行手術(shù)或活檢，這對患者來說有一定的風(fēng)險(xiǎn)和負(fù)擔(dān)，而且并非所有的腫瘤組織都適合用于疫苗制備。(2)穩(wěn)定性不高：腫瘤疫苗中的腫瘤抗原可能不穩(wěn)定，容易降解或失活，從而影響疫苗的效果。原因是腫瘤抗原通常是蛋白質(zhì)或多
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，提供一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗及其制備方法。
2、本專利技術(shù)的目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，它包括以下步驟：
3、s1.合成納米片：中-四(4-羧基苯基)卟吩的氫氧化鉀溶液中滴入稀鹽酸，密封反應(yīng)容器，加熱攪拌反應(yīng)70～74h，所得反應(yīng)產(chǎn)物為納米片；
4、s2.制備疫苗：將腫瘤組織的單細(xì)胞懸液中加入步驟s1合成的納米片，在37℃的培養(yǎng)箱中共孵育2.5～3.5h，孵育完成后660nm近紅外激光照射細(xì)胞15～25min再置于37℃的培養(yǎng)箱中靜置1.5～2.5h，過濾去除大塊絮狀物，所得液體為基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗。
5、作為優(yōu)選技術(shù)方案，步驟s1中所述氫氧化鉀溶液的濃度為0.3～0.7mol/l，中-四(4-羧基苯基)卟吩的氫氧化鉀溶液中中-四(4-羧基苯基)卟吩與氫氧化鉀溶液的質(zhì)量體積比為0.04～0.06g:1ml；所述稀鹽酸的濃度為0.08～0.12mol/l。
6、作為優(yōu)選技術(shù)方案，所述中-四(4-羧基苯基)卟吩的氫氧化鉀溶液和稀鹽酸的體積比為1:4～5。
7、作為優(yōu)選技術(shù)方案，步驟s1中所述加熱的溫度為75～85℃，攪拌速率為1100～1300rpm/min。
8、作為優(yōu)選技術(shù)方案，步驟s1反應(yīng)物加熱攪拌反應(yīng)后，將容器中的液體冷卻至室溫，在速率為5500～6500rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心13～18min，所得沉淀用雙蒸水洗滌，重懸沉淀，再在280～330rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心4～6min，去除沉淀，液體置于旋蒸儀中55～65℃的溫度下旋蒸至完全干燥，所得粉末為納米片粉末。
9、作為優(yōu)選技術(shù)方案，步驟s2中所述單細(xì)胞懸液的濃度1×106～1×108個(gè)/ml，將納米片加入單細(xì)胞懸液后使得納米片的終濃度為90～110ug/ml。
10、作為優(yōu)選技術(shù)方案，步驟s2中所述近紅外激光的功率為0.4～0.6w/cm2。
11、作為優(yōu)選技術(shù)方案，所述腫瘤細(xì)胞為乳腺癌細(xì)胞。
12、上述的方法制備的基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗。
13、本專利技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：本專利技術(shù)設(shè)計(jì)了一種以納米片為免疫佐劑并且可簡單制備的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗，并將該復(fù)合體應(yīng)用于腫瘤的免疫治療和預(yù)防。在取得部分腫瘤組織后，將納米片與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后，使腫瘤細(xì)胞充分?jǐn)z取納米片。然后照射近紅外激光，通過納米片所具有的光催化效應(yīng)，使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫效應(yīng)，破裂并釋放出大量的腫瘤抗原。又因?yàn)榧{米片本身多層堆疊和粗糙的物理性質(zhì)，腫瘤抗原會(huì)吸附于納米片表面，提高了免疫細(xì)胞對于抗原的攝取，降低免疫逃逸效應(yīng)。本納米片是由中-四(4-羧基苯基)卟吩單體在水相中自組裝堆疊而成。在疫苗的制備過程中，納米片既利用其優(yōu)異的光催化效應(yīng)來使腫瘤細(xì)胞破裂并釋放大量抗原，也無需分離，在腫瘤疫苗中繼續(xù)作為免疫佐劑存在。本專利技術(shù)公開的方法大大降低了腫瘤疫苗的制備難度，并提高了腫瘤抗原的攝取率，為制備方便、安全的腫瘤疫苗接種提供了一種簡潔有效的制劑。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，步驟S1中所述氫氧化鉀溶液的濃度為0.3～0.7mol/L，中-四(4-羧基苯基)卟吩的氫氧化鉀溶液中中-四(4-羧基苯基)卟吩與氫氧化鉀溶液的質(zhì)量體積比為0.04～0.06g:1ml；所述稀鹽酸的濃度為0.08～0.12mol/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，所述中-四(4-羧基苯基)卟吩的氫氧化鉀溶液和稀鹽酸的體積比為1:4～5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，步驟S1中所述加熱的溫度為75～85℃，攪拌速率為1100～1300rpm/min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，步驟S1反應(yīng)物加熱攪拌反應(yīng)后，將容器中的液體冷卻至室溫，在速率為5500～6500rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心13～18m
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，步驟S2中所述單細(xì)胞懸液的濃度為1×106～1×108個(gè)/ml，將納米片加入單細(xì)胞懸液后使得納米片的終濃度為90～110ug/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，步驟S2中所述近紅外激光的功率為0.4～0.6w/cm2。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，所述腫瘤細(xì)胞為乳腺癌細(xì)胞。
9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法制備的基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，步驟s1中所述氫氧化鉀溶液的濃度為0.3～0.7mol/l，中-四(4-羧基苯基)卟吩的氫氧化鉀溶液中中-四(4-羧基苯基)卟吩與氫氧化鉀溶液的質(zhì)量體積比為0.04～0.06g:1ml；所述稀鹽酸的濃度為0.08～0.12mol/l。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，所述中-四(4-羧基苯基)卟吩的氫氧化鉀溶液和稀鹽酸的體積比為1:4～5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，步驟s1中所述加熱的溫度為75～85℃，攪拌速率為1100～1300rpm/min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于納米片的腫瘤抗原復(fù)合體腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，步驟s1反應(yīng)物加熱...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王朝輝，潘宇航，吳佳艷，鄧小金，黃緒娟，
申請(專利權(quán))人：海南大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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