【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物，具體涉及具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠的制備方法，還涉及由該方法制得的產(chǎn)品和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、蠶絲自古以來就被人類利用，它是一種天然絲，被人們稱作“纖維皇后”。蠶絲纖維是唯一得到實際應(yīng)用的天然長絲纖維，繭絲由內(nèi)層約占25％的絲素蛋白和外圍約占75％的絲膠蛋白組成。絲素蛋白具有良好的生物相容性和降解性，可形成緩釋膜、凝膠、海綿等絲蛋白材料，而且蠶絲具有良好的力學(xué)性能，具有優(yōu)異的強(qiáng)度和韌性，因而蠶絲目前在高新
的應(yīng)用前途明朗。脂聯(lián)素是脂肪細(xì)胞分泌的一種蛋白質(zhì)，全長人rhapn由244個氨基酸殘基組成，是一種胰島素增敏激素，能改善組織的胰島素敏感性、抗動脈粥樣硬化、抗炎、抗凋亡、促血管生成和促脂肪生成等作用，研究發(fā)現(xiàn)，腸上皮細(xì)胞中存在脂聯(lián)素受體，脂聯(lián)素可以抑制lps誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞生成il-8。脂聯(lián)素可以抑制巨噬細(xì)胞的浸潤和促炎細(xì)胞因子的釋放，阻止杯狀細(xì)胞凋亡、增加上皮細(xì)胞向杯狀細(xì)胞分化，保護(hù)dss誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎。
2、因此，亟需一種通過家蠶絲腺生物反應(yīng)器可獲得具有活性的重組人脂聯(lián)素蛋白。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、有鑒于此，本專利技術(shù)的目的之一在于提供一種具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠的制備方法，根據(jù)人脂聯(lián)素基因序列構(gòu)建外源蛋白表達(dá)載體，顯微注射蠶卵飼養(yǎng)至g1代，熒光篩選蠶卵獲得陽性個體，利用絲腺生物反應(yīng)器在蠶繭中獲得重組人脂聯(lián)素蛋白，探索出活性重組人脂聯(lián)素蛋白的提取方法。本專利技術(shù)的目的之二在于提供所述制備方法制得的具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠；本專利技術(shù)的目
2、為達(dá)到上述目的，本專利技術(shù)提供如下技術(shù)方案：
3、1、具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠的制備方法，將seq?id?no.2所示的rhapn基因連入ser1啟動子調(diào)控下在家蠶中絲腺中表達(dá)，篩選轉(zhuǎn)基因個體，飼養(yǎng)至結(jié)繭，獲得含有重組人脂聯(lián)素的蠶絲；
4、取含重組人脂聯(lián)素的蠶絲溶于尿素溶液中提取，得到提取液ⅰ，然后將野生蠶絲溶于尿素溶液中提取，得到提取液ⅱ，將提取液ⅰ和提取液ⅱ按體積比為1:1混合，透析自組裝為水凝膠，得到具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠。
5、由于本專利技術(shù)中通過8m?urea，50℃提取30min得到的rhapn蠶絲提取液中絲膠濃度較低，不能在低溫下自組裝成水凝膠，所以需要加入8m?urea，80℃提取1h的野生蠶絲得到的高濃度絲膠提取液與前者混合后才能在低溫下自組裝成水凝膠。
6、本專利技術(shù)優(yōu)選的，所述提取液ⅰ的制備方法如下：將rhapn蠶絲含重組人脂聯(lián)素的蠶絲按質(zhì)量體積比為50：1，單位為mg：ml，溶于8m?urea溶液中，50℃提取30min。
7、本專利技術(shù)優(yōu)選的，所述提取液ⅱ的制備方法如下：將野生蠶絲溶于按質(zhì)量體積比為160：1，單位為mg：ml，8m尿素溶液，80℃提取1h，再加入野生蠶絲復(fù)提。
8、本專利技術(shù)優(yōu)選的，所述透析為3.5kda的透析袋中4℃透析3天，每天換3次透析液，所述透析液為水。
9、本專利技術(shù)優(yōu)選的，提取液ⅰ和提取液ⅱ混合前在2000rpm離心10min。
10、2、所述制備方法制得的具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠。
11、3、所述水凝膠在制備治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物中的應(yīng)用。
12、本專利技術(shù)優(yōu)選的，所述水凝膠通過抗炎、抑制no生成、促進(jìn)m1型的raw?264.7向m2型極化、抑制raw?264.7偽足伸長治療潰瘍性結(jié)腸炎。
13、4、所述水凝膠在制備在降脂藥物中的應(yīng)用。
14、本專利技術(shù)的有益效果在于：本專利技術(shù)公開了具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠的制備方法，本專利技術(shù)根據(jù)人脂聯(lián)素基因序列構(gòu)建外源蛋白表達(dá)載體，顯微注射蠶卵飼養(yǎng)至g1代，熒光篩選蠶卵獲得陽性個體，利用絲腺生物反應(yīng)器在蠶繭中獲得重組人脂聯(lián)素蛋白，探索出活性重組人脂聯(lián)素蛋白的提取方法，并且制備得到具有生物學(xué)活性的重組人脂聯(lián)素水凝膠，能夠用于降脂藥物或潰瘍性結(jié)腸炎的治療。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點】
1.具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠的制備方法，其特征在于：將SEQ?ID?NO.2所示的rhAPN基因連入Ser1啟動子調(diào)控下在家蠶中絲腺中表達(dá)，篩選轉(zhuǎn)基因個體，飼養(yǎng)至結(jié)繭，獲得含有重組人脂聯(lián)素的蠶絲；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠的制備方法，其特征在于：所述提取液Ⅰ的制備方法如下：將rhAPN蠶絲含重組人脂聯(lián)素的蠶絲按質(zhì)量體積比為50：1，單位為mg：ml，溶于濃度為8M的Urea溶液中，50℃提取30min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠的制備方法，其特征在于：所述提取液Ⅱ的制備方法如下：將野生蠶絲溶于按質(zhì)量體積比為160：1，單位為mg：ml，8M尿素溶液，80℃提取1h，再加入野生蠶絲復(fù)提。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠的制備方法，其特征在于：所述透析為3.5kDa的透析袋中4℃透析3天，每天換3次透析液，所述透析液為水。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠的制備方法，其特征在于：提取液Ⅰ和提取液Ⅱ混合前在2000rpm離心10min。
6.權(quán)
7.權(quán)利要求6所述水凝膠在制備治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，所述水凝膠通過抗炎、抑制NO生成、促進(jìn)M1型的Raw264.7向M2型極化、抑制Raw?264.7偽足伸長治療潰瘍性結(jié)腸炎。
9.權(quán)利要求6所述水凝膠在制備在降脂藥物中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠的制備方法，其特征在于：將seq?id?no.2所示的rhapn基因連入ser1啟動子調(diào)控下在家蠶中絲腺中表達(dá)，篩選轉(zhuǎn)基因個體，飼養(yǎng)至結(jié)繭，獲得含有重組人脂聯(lián)素的蠶絲；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠的制備方法，其特征在于：所述提取液ⅰ的制備方法如下：將rhapn蠶絲含重組人脂聯(lián)素的蠶絲按質(zhì)量體積比為50：1，單位為mg：ml，溶于濃度為8m的urea溶液中，50℃提取30min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述具有活性重組人脂聯(lián)素水凝膠的制備方法，其特征在于：所述提取液ⅱ的制備方法如下：將野生蠶絲溶于按質(zhì)量體積比為160：1，單位為mg：ml，8m尿素溶液，80℃提取1h，再加入野生蠶絲復(fù)提。
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【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王峰，周虹吉，夏慶友，
申請(專利權(quán))人：西南大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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