【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)學(xué)或生物制藥，具體涉及一種靶向a104r蛋白的核酸適配體apt-1及其在非洲豬瘟病毒或其抗體檢測中的用途。
技術(shù)介紹
1、非洲豬瘟(african?swine?fever，asf)是由非洲豬瘟病毒(african?swine?fevervirus，asfv)感染家豬和野豬引起的一種急性、高熱、出血性、烈性傳染病。該病危害嚴重，致死率可高達100％，對我國養(yǎng)豬業(yè)及相關(guān)產(chǎn)業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。世界動物衛(wèi)生組織(woah)將其列為必須報告的動物傳染病，也是我國規(guī)定的一類動物疫病。非洲豬瘟的潛伏期一般為4～19天，根據(jù)其臨床表現(xiàn)，可分為超急性型、急性型、亞急性型、慢性型和無臨床表現(xiàn)型。該病主要通過直接接觸傳播，軟蜱可以作為該病的儲藏宿主和傳播媒介。非洲豬瘟引起的臨床癥狀和病理變化跟病毒毒力相關(guān)，總體上，與經(jīng)典豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病等豬的其他發(fā)熱、出血性疾病相似，臨床上很難進行鑒別診斷，而實驗室檢測對于該病的防控和凈化尤為重要。隨著非洲豬瘟在世界范圍內(nèi)的持續(xù)發(fā)生和蔓延，流行毒株呈現(xiàn)出極為復(fù)雜的態(tài)勢，也對該病的診斷和防控帶來了新的挑戰(zhàn)。目前，非洲豬瘟尚未有安全有效的疫苗和治療措施，開展新型診斷檢測技術(shù)及抗病毒制劑的開發(fā)將為該病的防控提供重要的技術(shù)支撐。
2、核酸適配體是一種經(jīng)selex技術(shù)篩選而得到的對靶標(biāo)分子具有特異性和親和力的寡聚核苷酸，能夠通過其三維結(jié)構(gòu)與靶標(biāo)分子相結(jié)合。核酸適配體與靶標(biāo)分子的結(jié)合屬性類似于抗體與抗原之間的相互作用，因此也稱之為化學(xué)抗體，但核酸適配體相比較傳統(tǒng)的抗體分子具
3、現(xiàn)有技術(shù)方法中針對非洲豬瘟的診斷、抗病毒和致病機制等方面的研究均基于傳統(tǒng)的抗體分子，包括多克隆抗體、單克隆抗體和納米抗體等，存在成本高、難以獲得、不易商業(yè)化和批量應(yīng)用等缺點。a104r蛋白是非洲豬瘟病毒的結(jié)構(gòu)蛋白之一，屬于dna結(jié)合蛋白，也是非洲豬瘟診斷和抗病毒等研究的重要靶標(biāo)。因此，篩選獲得能夠特異性識別和結(jié)合非洲豬瘟病毒a104r蛋白的核酸適配體，將克服現(xiàn)有基于傳統(tǒng)抗體在診斷、抗病毒等方面的局限性。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、針對上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)提供了一種靶向a104r蛋白的核酸適配體apt-1及其在非洲豬瘟病毒或其抗體檢測中的用途。具體包括以下內(nèi)容：
2、第一方面，本專利技術(shù)提供了一種靶向非洲豬瘟病毒a104r蛋白的核酸適配體apt-1，所述核酸適配體apt-1的序列如seq?id?no.1所示。
3、優(yōu)選地，所述核酸適配體apt-1的序列經(jīng)過化學(xué)修飾。
4、優(yōu)選地，所述化學(xué)修飾包括磷酸化、甲基化、氨基化、巰基化、氟化、用硫取代氧、用硒取代氧或同位素化中的至少一種。
5、第二方面，本專利技術(shù)提供了上述第一方面所述的核酸適配體apt-1在非洲豬瘟病毒或非洲豬瘟病毒a104r蛋白的分析、純化、成像或非檢測目的的濃度檢測中的應(yīng)用。
6、第三方面，本專利技術(shù)提供了上述第一方面所述的核酸適配體apt-1在制備檢測非洲豬瘟病毒或抗體的試劑或試劑盒中的應(yīng)用。
7、第四方面，本專利技術(shù)提供了一種上述第一方面所述的核酸適配體apt-1在制備預(yù)防或治療非洲豬瘟病毒感染的藥物中的應(yīng)用。
8、第五方面，本專利技術(shù)提供了一種核酸適配體偶聯(lián)物，所述核酸適配體偶聯(lián)物是在上述第一方面所述的核酸適配體apt-1的序列中連接上用于標(biāo)記、檢測、診斷或治療的物質(zhì)。
9、優(yōu)選地，所述用于標(biāo)記、檢測、診斷或治療的物質(zhì)包括：熒光標(biāo)記物、放射性物質(zhì)、治療性物質(zhì)、生物素、地高辛、納米發(fā)光材料、肽或sirna中的至少一種。
10、優(yōu)選地，所述用于標(biāo)記、檢測、診斷或治療的物質(zhì)連接在所述核酸適配體apt-1的5’端和/或3’端。
11、優(yōu)選地，所述用于標(biāo)記、檢測、診斷或治療的物質(zhì)選自多肽、抗原、抗體、檢測標(biāo)記物、金納米顆粒、納米發(fā)光材料、治療藥物、酶中的至少一種。
12、優(yōu)選地，所述用于標(biāo)記、檢測、診斷或治療的物質(zhì)為鏈霉親和素、生物素。
13、第六方面，本專利技術(shù)提供了上述第五方面所述的核酸適配體偶聯(lián)物在非洲豬瘟病毒或非洲豬瘟病毒a104r蛋白的分析、純化、成像或非檢測目的的濃度檢測中的應(yīng)用。
14、第七方面，本專利技術(shù)提供了上述第五方面所述的核酸適配體偶聯(lián)物在制備檢測非洲豬瘟病毒或抗體的試劑或試劑盒中的應(yīng)用。
15、第八方面，本專利技術(shù)提供了上述第五方面所述的核酸適配體偶聯(lián)物在制備預(yù)防或治療非洲豬瘟病毒感染的藥物中的應(yīng)用。
16、第九方面，本專利技術(shù)提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包括：(i)上述第一方面所述的核酸適配體apt-1，或上述第五方面所述的核酸適配體偶聯(lián)物；以及(ii)藥學(xué)上可接受的載體。
17、第十方面，本專利技術(shù)提供了一種非洲豬瘟病毒檢測試劑，所述的檢測試劑包含：(i)上述第一方面所述的核酸適配體apt-1，或上述第五方面所述的核酸適配體偶聯(lián)物；以及(ii)檢測學(xué)上可接受的載體。
18、第十一方面，本專利技術(shù)提供了一種檢測非洲豬瘟病毒a104r蛋白的試劑，所述試劑含有上述第一方面所述的核酸適配體apt-1，或上述第五方面所述的核酸適配體偶聯(lián)物，或上述第十面所述的檢測試劑。
19、第十二方面，本專利技術(shù)提供了一種產(chǎn)生上述第一方面所述核酸適配體apt-1的方法，所述方法包括以下步驟：
20、(1)設(shè)計和合成隨機初始寡核苷酸文庫；
21、(2)利用selex技術(shù)，從合成的隨機寡核苷酸文庫中正向篩選與非洲豬瘟病毒a104r蛋白結(jié)合的ssdna序列，并利用非洲豬瘟病毒p30蛋白作為反篩蛋白，經(jīng)過十輪篩選，獲得與a104r蛋白具有較高親和力和特異性的ssdna序列；
22、(3)將第十輪篩選得到的ssdna序列通過pcr大量擴增，并將pcr產(chǎn)物純化回收后進行高通量測序，合成富集頻次較高的ssdna序列，并進行生物素標(biāo)記，通過elisa方法鑒定獲得靶向非洲豬瘟病毒a104r蛋白的核酸適配體apt-1。
23、本專利技術(shù)的有益效果是：
24、(1)本專利技術(shù)提供了一種靶向非洲豬瘟病毒a104r蛋白的核酸適配體apt-1，所述核酸適配體能夠特異性識別和結(jié)合非洲豬瘟病毒a104r蛋白；
25、(2)本專利技術(shù)所述的核酸適配體apt-1與非洲豬瘟病毒蛋白a104r具有較好的親和力和反應(yīng)性，且與p30蛋白沒有交叉反應(yīng)，具有良好的特異性；
26、(3)本專利技術(shù)所述的核酸適配體apt-1與豬圓環(huán)病毒2型、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病毒、豬細小病毒、口蹄疫病毒和豬瘟病毒等無交叉反本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種靶向非洲豬瘟病毒A104R蛋白的核酸適配體APT-1，其特征在于，所述核酸適配體APT-1的序列如SEQ?ID?No.1所示。
2.如權(quán)利要求1所述的核酸適配體APT-1，其特征在于，所述核酸適配體APT-1的序列經(jīng)過化學(xué)修飾。
3.如權(quán)利要求2所述的核酸適配體APT-1，其特征在于，所述化學(xué)修飾包括磷酸化、甲基化、氨基化、巰基化、氟化、用硫取代氧、用硒取代氧或同位素化中的至少一種。
4.一種核酸適配體偶聯(lián)物，其特征在于，所述核酸適配體偶聯(lián)物是在權(quán)利要求1所述的核酸適配體APT-1的序列中連接上用于標(biāo)記、檢測、診斷或治療的物質(zhì)。
5.如權(quán)利要求4所述的核酸適配體偶聯(lián)物，其特征在于，所述用于標(biāo)記、檢測、診斷或治療的物質(zhì)包括：熒光標(biāo)記物、放射性物質(zhì)、治療性物質(zhì)、生物素、地高辛、納米發(fā)光材料、肽或siRNA中的至少一種。
6.如權(quán)利要求5所述的核酸適配體偶聯(lián)物，其特征在于，所述用于標(biāo)記、檢測、診斷或治療的物質(zhì)連接在所述核酸適配體APT-1的5’端和/或3’端。
7.如權(quán)利要求6所述的核酸適配體偶聯(lián)物，其特征
8.如權(quán)利要求1-3任一所述的核酸適配體APT-1，或權(quán)利要求4-7任一所述的核酸適配體偶聯(lián)物在非洲豬瘟病毒或非洲豬瘟病毒A104R蛋白的分析、純化、成像或非檢測目的的濃度檢測中的應(yīng)用。
9.如權(quán)利要求1-3任一所述的核酸適配體APT-1，或權(quán)利要求4-7任一所述的核酸適配體偶聯(lián)物在制備檢測非洲豬瘟病毒或抗體的試劑或試劑盒中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求1-3任一所述的核酸適配體APT-1，或權(quán)利要求4-7任一所述的核酸適配體偶聯(lián)物在制備預(yù)防或治療非洲豬瘟病毒感染的藥物中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種靶向非洲豬瘟病毒a104r蛋白的核酸適配體apt-1，其特征在于，所述核酸適配體apt-1的序列如seq?id?no.1所示。
2.如權(quán)利要求1所述的核酸適配體apt-1，其特征在于，所述核酸適配體apt-1的序列經(jīng)過化學(xué)修飾。
3.如權(quán)利要求2所述的核酸適配體apt-1，其特征在于，所述化學(xué)修飾包括磷酸化、甲基化、氨基化、巰基化、氟化、用硫取代氧、用硒取代氧或同位素化中的至少一種。
4.一種核酸適配體偶聯(lián)物，其特征在于，所述核酸適配體偶聯(lián)物是在權(quán)利要求1所述的核酸適配體apt-1的序列中連接上用于標(biāo)記、檢測、診斷或治療的物質(zhì)。
5.如權(quán)利要求4所述的核酸適配體偶聯(lián)物，其特征在于，所述用于標(biāo)記、檢測、診斷或治療的物質(zhì)包括：熒光標(biāo)記物、放射性物質(zhì)、治療性物質(zhì)、生物素、地高辛、納米發(fā)光材料、肽或sirna中的至少一種。
6.如權(quán)利要求5所述的核酸...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：牛慶麗，楊吉飛，王錦明，劉陽河，張忠輝，李學(xué)賽，關(guān)貴全，殷宏，
申請(專利權(quán))人：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心蘭州分中心，
類型：發(fā)明
國別省市：
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