【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及到血液儲存領域，具體涉及到一種細胞穩定劑及其應用。
技術介紹
1、外周血是生物醫學最頻繁接近的組織，其生化指標的檢測項目復雜多樣，常作為臨床醫學診斷依據之一，不僅可以在客觀上反映人體的健康狀況，對機體主要系統的功能進行診斷，同時對臨床治療效果、預后評價等都具有較為重要的意義，比如在血液學、輸血、免疫學、再生醫學和腫瘤學中分離血源性細胞具有廣泛的臨床和科學重要性。因此外周血生化檢測結果的準確性與血液標本的質量情況密切相關，但血液標本在采集后，受條件影響往往未能及時進行檢測，需進行較長時間的保存與運輸，而全血(whole?blood，wb)離體后會迅速劣化。例如養分喪失、氧化應激、摩爾滲透壓濃度(osmolarity)和ph變化，以及有毒代謝副產物蓄積，迅速開始發生；在數小時內，中性粒細胞發生活化、突發性氧化作用以及壞死和凋亡；血液樣品的運輸產生了誘導溶血和血小板活化的失控振蕩。這些損傷不僅影響樣品中目的細胞的活力和功能，還極大影響廣泛應用的富集技術。
2、血液離開機體循環后，由于受到儲存及保養條件的限制，可能發生“保存損傷”，從而對血液各種功能指標造成影響。隨著血液儲存保存期的延長、紅細胞生存條件的改變、代謝廢物的產生，加之部分保存紅細胞壽命縮短、損傷增加等因素，儲存血液中的紅細胞代謝、功能等出現不同程度的改變。
3、血液保存液是影響血液儲存的主要因素之一，現有技術中，通過血液保存液為了使供輸血用的血液能保存一定時間，加入適當的抗凝劑，并盡量防止在保存期發生變質。
4、而在人體外周
5、基于上述原理，現有體外檢測試劑盒，如體外定性檢測經刺激活化后的人全血cd4和t淋巴細胞內的三磷酸腺苷（atp），通過熒光素酶法的cd4細胞atp釋放試驗，用于機體免疫狀態的監測，即當免疫系統功能異常時，體內抗體水平或者t、b細胞功能會異常的降低或升高，并且cd4和t淋巴細胞數及狀態通常會產生顯著變化。而在機體的免疫活動中，需要atp作為能量物質為整個過程提供能量。因此通過測定經pha活化刺激后的cd4和t淋巴細胞內三磷酸腺苷（atp）濃度，可以反映機體的免疫狀態。
6、但全血樣本為離體時長超過30小時后的樣本進行刺激后檢測值下降明顯，影響了檢測結果的準確性。現有專利技術cn?106796219?a（一種使全血樣品穩定化的方法）公開了一種全血樣品穩定劑及方法，放置30h后或更久時間，對于檢測檢驗中的樣品非刺激組，保存穩定性效果仍較好。但對刺激值影響較大，刺激組血樣atp檢測值極不穩定。
7、因此，需要研究一種細胞穩定劑，該穩定劑保存的血樣在離體時長超過30小時后，對樣本進行刺激后，其atp檢測值能夠保持穩定，從而可以延長全血樣本離體后的保存時間，并保證體外檢測試劑盒的檢測結果。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于克服現有技術的至少一個不足，提供一種細胞穩定劑及其應用。
2、本專利技術所采取的技術方案是：
3、第一個方面，本專利技術提供一種細胞穩定劑，包括以下組分：細胞分離劑、胱天蛋白酶抑制劑、血小板抑制劑、模擬肽、α-d-葡萄糖、乙酰-l-半胱氨酸、nacl、無水乙酸鈉。
4、在一些實例中，所述細胞穩定劑中各組分濃度為：細胞分離劑3～10%（w/v）、胱天蛋白酶抑制劑3～8?um、模擬肽0.33～0.40?mm、α-d-葡萄糖3.35～7.25?mm、n-乙酰-l-半胱氨酸0.50～1.50?mm、nacl?2～15mm、血小板抑制劑0.02～90?ug/ml、無水乙酸鈉20～40mm。
5、在一些實例中，所述細胞分離劑選自percoll試劑或者ficoll?70試劑。
6、在一些實例中，所述血小板抑制劑選自氯吡格雷、噻氯匹定、雙嘧達莫、ifetroban、阿昔單抗、tirofiban、epgifibatide或阿那格雷。
7、在一些實例中，所述胱天蛋白酶抑制劑選自(3s)?5?(2?,6?二氟苯氧基)?3[[(2s)?3?甲基?2?(喹啉?2?羰基氨基)丁酰基]氨基]4?氧代戊酸、甲基(3s)?5?氟?3[[(2s)?2?[[(2s)?3?甲基?2?(苯基甲氧基羰基氨基)丁酰基]氨基]丙酰基]氨基]4?氧代戊酸酯、(s)?甲基5?(2?,6?二氟苯氧基)?3?((s)?3?甲基?2?(喹啉?2?羧酰胺基)丁酰胺基)?4氧代戊酸酯或5?氟?3?[(2?甲基丙烷?2?基)氧羰基氨基]4?氧代戊酸甲酯中的至少一種。
8、在一些實例中，所述細胞穩定劑中各組分濃度為：percoll試劑3～4%（w/v）、胱天蛋白酶抑制劑4～6?um、模擬肽0.35～0.39?mm、α-d-葡萄糖5.35～7.00?mm、n-乙酰-l-半胱氨酸0.60～1.00?mm、nacl?3～10?mm、氯吡格雷0.5～20?ug/ml、無水乙酸鈉20～40?mm。
9、第二個方面，本專利技術第一個方面提供的細胞穩定劑在全血保存中的應用。
10、第三個方面，本專利技術提供一種全血保存方法，包括在采集的新鮮血液中加入第一個方面所述的細胞穩定劑。
11、在一些實例中，所述細胞穩定劑在新鮮血液采集后的1小時內加入或于采血前加入采血管中。
12、在一些實例中，所述血液的保存溫度為0～37℃；和/或保存時間不超過78?h。
13、本專利技術的有益效果是：
14、本專利技術提供的細胞穩定劑，能夠延長全血樣本離體后的保存時間，從而能夠延長收集到的檢測試劑盒的樣本檢測的時長，并能保證檢測試劑盒atp檢測值的穩定性。另外該細胞穩定劑還可以長期保存骨髓、外周血、組織等，并保證免疫分型、淋巴細胞亞群檢測等多種細胞相關檢測的結果穩定和正確。
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1.一種細胞穩定劑，其特征在于，包括以下組分：細胞分離劑、胱天蛋白酶抑制劑、血小板抑制劑、模擬肽、α-D-葡萄糖、乙酰-L-半胱氨酸、NaCl、無水乙酸鈉。
2.根據權利要求1所述的細胞穩定劑，其特征在于，所述細胞穩定劑中各組分濃度為：細胞分離劑3～10%（w/v）、胱天蛋白酶抑制劑3～8?uM、模擬肽0.33～0.40?mM、α-D-葡萄糖3.35～7.25?mM、N-乙酰-L-半胱氨酸0.50～1.50?mM、NaCl?2～15mM、血小板抑制劑0.02～90?ug/ml、無水乙酸鈉20～40?mM。
3.根據權利要求1所述的細胞穩定劑，其特征在于，所述細胞分離劑選自Percoll試劑或者Ficoll?70試劑。
4.根據權利要求1所述的細胞穩定劑，其特征在于，所述血小板抑制劑選自氯吡格雷、噻氯匹定、雙嘧達莫、ifetroban、阿昔單抗、tirofiban、epGIFibatide或阿那格雷。
5.根據權利要求1所述的細胞穩定劑，其特征在于，所述胱天蛋白酶抑制劑選自(3S)-5-(2?,6-二氟苯氧基)-?3-[[(2S)-3
6.根據權利要求1～5任一項所述的細胞穩定劑，其特征在于，所述細胞穩定劑中各組分濃度為：Percoll試劑3～4%（w/v）、胱天蛋白酶抑制劑4～6?uM、模擬肽0.35～0.39?mM、α-D-葡萄糖5.35～7.00?mM、N-乙酰-L-半胱氨酸0.60～1.00?mM、NaCl?3～10?mM、氯吡格雷0.5～20?ug/ml、無水乙酸鈉20～40?mM。
7.權利要求1～6任一項所述的細胞穩定劑在全血保存中的應用。
8.一種全血保存方法，其特征在于，包括在采集的新鮮血液中加入權利要求1～6任一項所述的細胞穩定劑。
9.根據權利要求8所述的全血保存方法，其特征在于，所述細胞穩定劑在新鮮血液采集后的1小時內加入或于采血前加入采血管中。
10.根據權利要求8所述的全血保存方法，其特征在于，所述血液的保存溫度為0～37℃；和/或保存時間不超過78?h。
...【技術特征摘要】
1.一種細胞穩定劑，其特征在于，包括以下組分：細胞分離劑、胱天蛋白酶抑制劑、血小板抑制劑、模擬肽、α-d-葡萄糖、乙酰-l-半胱氨酸、nacl、無水乙酸鈉。
2.根據權利要求1所述的細胞穩定劑，其特征在于，所述細胞穩定劑中各組分濃度為：細胞分離劑3～10%（w/v）、胱天蛋白酶抑制劑3～8?um、模擬肽0.33～0.40?mm、α-d-葡萄糖3.35～7.25?mm、n-乙酰-l-半胱氨酸0.50～1.50?mm、nacl?2～15mm、血小板抑制劑0.02～90?ug/ml、無水乙酸鈉20～40?mm。
3.根據權利要求1所述的細胞穩定劑，其特征在于，所述細胞分離劑選自percoll試劑或者ficoll?70試劑。
4.根據權利要求1所述的細胞穩定劑，其特征在于，所述血小板抑制劑選自氯吡格雷、噻氯匹定、雙嘧達莫、ifetroban、阿昔單抗、tirofiban、epgifibatide或阿那格雷。
5.根據權利要求1所述的細胞穩定劑，其特征在于，所述胱天蛋白酶抑制劑選自(3s)-5-(2?,6-二氟苯氧基)-?3-[[(2s)-3-甲基-2-(喹啉-2-羰基氨基)丁酰基]氨基]-4-氧代戊酸、甲基(3s)-5-氟-3-?[[(2s)-2-[[(2s...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳肖英，李妍，楊翔，樓建榮，
申請(專利權)人：廣州市雷德生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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