【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種與綿羊抗熱應(yīng)激性狀相關(guān)的snp標(biāo)記及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、在現(xiàn)代集約化養(yǎng)羊生產(chǎn)中，養(yǎng)殖密度不斷增加，環(huán)境應(yīng)激對(duì)羊只生產(chǎn)和健康的影響不容忽視。其中熱環(huán)境往往是影響?zhàn)B羊產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素之一。因此，提高綿羊的抗熱應(yīng)激性能對(duì)于綿羊養(yǎng)殖具有重大意義。培育出抗熱應(yīng)激的綿羊品系可以提高綿羊群體的抗逆性。在綿羊育種工作中，可以利用具有抗熱應(yīng)激性能的分子標(biāo)記鑒定抗熱應(yīng)激性能較好的個(gè)體用于育種，但目前沒有適合選育國內(nèi)地方綿羊品種抗熱應(yīng)激性狀的分子標(biāo)記較少。
2、pdlim5（pdz?和lim?結(jié)構(gòu)域蛋白5）又叫enh(enigma?homolog），該蛋白由pdlim5基因編碼的蛋白質(zhì)。kuroda?等人首次發(fā)現(xiàn)的pdlim5?蛋白，由1個(gè)n端pdz?結(jié)構(gòu)域和3?個(gè)c端lim?結(jié)構(gòu)域組成，其組成與enigma?蛋白類似。并且發(fā)現(xiàn)pdlim5?基因可見于骨骼肌、脊髓等中，并且其在骨骼肌中表達(dá)量較高。pdlim5?基因編碼的蛋白參與細(xì)胞骨架組裝、細(xì)胞譜系規(guī)范、器官發(fā)育和腫瘤發(fā)生。pdlim5?基因已發(fā)現(xiàn)編碼不同種型的多種轉(zhuǎn)錄物變體。pdlim5基因能充當(dāng)信號(hào)調(diào)節(jié)器影響器官發(fā)育。pdlim5基因在鼠上已經(jīng)報(bào)道了四種剪接形式，包括序列含有nh2-末端pdz?結(jié)構(gòu)域和三個(gè)cooh-末端lim?結(jié)構(gòu)域的最長(zhǎng)的亞型enh1，以及其他三個(gè)不含有l(wèi)im?結(jié)構(gòu)域的enh。研究發(fā)現(xiàn)enh1在多種組織中表達(dá)，如心臟，腦，脾，肝和腎，而enh這些較短的剪接形式則在心臟和骨骼肌中特異性表達(dá)。而在雞上則不同，pdl
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的是提供一種與綿羊抗熱應(yīng)激性狀相關(guān)的snp標(biāo)記及其應(yīng)用。
2、為了實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)目的，第一方面，本專利技術(shù)提供一種與綿羊抗熱應(yīng)激性狀相關(guān)的snp標(biāo)記，所述snp標(biāo)記含有綿羊 pdlim5基因如seq?id?no:1所示序列第366位的多態(tài)性為g/a的核苷酸序列。
3、進(jìn)一步地，具有所述多態(tài)性的位點(diǎn)的基因型為aa的綿羊個(gè)體比基因型為ga、gg的綿羊個(gè)體具有更高的抗熱應(yīng)激性能。
4、本專利技術(shù)中，綿羊 pdlim5基因在ncbi中的參考序列編號(hào)為nc_056059.1?ars-ui_ramb_v2.0。
5、第二方面，本專利技術(shù)提供用于擴(kuò)增所述snp標(biāo)記的引物，包括如seq?id?no:2所示的上游引物和如seq?id?no:3所示的下游引物。
6、第三方面，本專利技術(shù)提供含有所述引物的檢測(cè)試劑或試劑盒。
7、第四方面，本專利技術(shù)提供一種抗熱應(yīng)激綿羊品系的鑒定及選育方法，包括：
8、1）提取待測(cè)綿羊總dna；
9、2）以dna為模板，利用seq?id?no:2-3所示引物進(jìn)行pcr擴(kuò)增；
10、3）分析pcr擴(kuò)增產(chǎn)物。
11、優(yōu)選地，pcr反應(yīng)體系為：2?×?phanta?max?master?mix?12.5?μl，dna模板50-100ng，10μm上、下游引物各1?μl，ddh2o?補(bǔ)充至25?μl。
12、優(yōu)選地，pcr反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，34個(gè)循環(huán)；72℃終延伸5min。
13、進(jìn)一步地，步驟3）包括：將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行sanger測(cè)序，獲得具有所述多態(tài)性的位點(diǎn)的基因型，基因型為aa的綿羊個(gè)體比基因型為ga、gg的綿羊個(gè)體具有更高的抗熱應(yīng)激性能。
14、第五方面，本專利技術(shù)提供所述snp標(biāo)記或其檢測(cè)試劑的以下任一應(yīng)用：
15、（1）用于抗熱應(yīng)激綿羊的早期預(yù)測(cè)；
16、（2）用于綿羊分子標(biāo)記輔助育種。
17、借由上述技術(shù)方案，本專利技術(shù)至少具有下列優(yōu)點(diǎn)及有益效果：
18、本專利技術(shù)首次發(fā)現(xiàn)在 pdlim5基因上存在一個(gè)snp與綿羊抗熱應(yīng)激性狀顯著相關(guān)，可以作為綿羊抗熱應(yīng)激性狀分子標(biāo)記。該方法鑒定獲得的綿羊個(gè)體具有相對(duì)較強(qiáng)的抗熱應(yīng)激的能力，可用于選育具有抗熱應(yīng)激性能的綿羊新品系。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.與綿羊抗熱應(yīng)激性狀相關(guān)的SNP標(biāo)記，其特征在于，所述SNP標(biāo)記含有綿羊PDLIM5基因如SEQ?ID?NO:1所示序列第366位的多態(tài)性為G/A的核苷酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SNP標(biāo)記，其特征在于，具有所述多態(tài)性的位點(diǎn)的基因型為AA的綿羊個(gè)體比基因型為GA、GG的綿羊個(gè)體具有更高的抗熱應(yīng)激性能。
3.用于擴(kuò)增權(quán)利要求1或2所述SNP標(biāo)記的引物，其特征在于，包括如SEQ?ID?NO:2所示的上游引物和如SEQ?ID?NO:3所示的下游引物。
4.含有權(quán)利要求3所述引物的檢測(cè)試劑或試劑盒。
5.抗熱應(yīng)激綿羊品系的鑒定及選育方法，其特征在于，包括：
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，PCR反應(yīng)體系為：2?×?Phanta?Max?MasterMix?12.5?μL，DNA模板50-100ng，10μM上、下游引物各1?μL，ddH2O?補(bǔ)充至25?μL。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，34
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于，步驟3）包括：將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行sanger測(cè)序，獲得具有所述多態(tài)性的位點(diǎn)的基因型，基因型為AA的綿羊個(gè)體比基因型為GA、GG的綿羊個(gè)體具有更高的抗熱應(yīng)激性能。
9.權(quán)利要求1或2所述SNP標(biāo)記或其檢測(cè)試劑的以下任一應(yīng)用：
...【技術(shù)特征摘要】
1.與綿羊抗熱應(yīng)激性狀相關(guān)的snp標(biāo)記，其特征在于，所述snp標(biāo)記含有綿羊pdlim5基因如seq?id?no:1所示序列第366位的多態(tài)性為g/a的核苷酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的snp標(biāo)記，其特征在于，具有所述多態(tài)性的位點(diǎn)的基因型為aa的綿羊個(gè)體比基因型為ga、gg的綿羊個(gè)體具有更高的抗熱應(yīng)激性能。
3.用于擴(kuò)增權(quán)利要求1或2所述snp標(biāo)記的引物，其特征在于，包括如seq?id?no:2所示的上游引物和如seq?id?no:3所示的下游引物。
4.含有權(quán)利要求3所述引物的檢測(cè)試劑或試劑盒。
5.抗熱應(yīng)激綿羊品系的鑒定及選育方法，其特征在于，包括：
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉秋月，張宇亭，彭詩羽，王海濤，李霞，黃勛，馬潤(rùn)林，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
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