【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥，具體涉及一種用于培養脂肪肉瘤類器官的培養基，還涉及一種脂肪肉瘤類器官的構建與培養方法。
技術介紹
1、脂肪肉瘤是一類由分化程度及異性程度不等的脂肪細胞組成的惡性腫瘤，約占軟組織肉瘤的20%，是成人最常見的軟組織惡性腫瘤之一，多發于四肢與腹膜后，好發于40-60歲，男性高發于女性。脂肪肉瘤具有復發率高、治療有效率低的特點。手術治療是脂肪肉瘤的首選治療方案，但術后仍有原位復發及轉移的風險，目前化療是術后輔助治療的有效手段，但部分患者對全身化療不敏感，因此脂肪肉瘤的治療方案，仍需進一步優化。近年來，免疫檢查點抑制劑、溶瘤病毒、過繼細胞療法和癌癥疫苗等免疫治療在其他腫瘤領域被廣泛研究與應用，但不同脂肪肉瘤患者間的高度異質性對免疫治療的響應存在差異。因此個性化建立與母體腫瘤組織病理學、遺傳物質與表型一致的疾病模型，不僅可以實現個性化的用藥方案篩選，也可以為早日攻克脂肪肉瘤奠定基礎。
2、與其他癌癥一樣，肉瘤細胞系和患者來源的異種移植模型已被開發出來，并用于確定這些腫瘤的特征和確定治療靶點，但這些模型有固有局限性：建立效率低、不能復制體內腫瘤異質性、基因組不穩定、培養周期長等原因，導致臨床轉化率極低。
3、2009年，hans?clevers等從lgr5+的小腸干細胞中培養出了小腸類器官，開創了類器官培養新紀元。系統的類器官概念即：干細胞或器官祖細胞在體外培養中，能夠發生與體內相似的細胞分化和譜系定向過程，并自組織形成具有人體器官部分的空間結構和特定功能的3d結構。2011年，sato等從結腸
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術的目的之一在于提供一種用于培養脂肪肉瘤類器官的培養基；本專利技術的目的之二在于提供一種脂肪肉瘤類器官的構建與培養方法。
2、為達到上述目的，本專利技術提供如下技術方案：
3、一種用于培養脂肪肉瘤類器官的培養基，包含培養基的基礎成分、添加劑成分和特異性因子成分；所述基礎成分包括：dmem/f12，fbs，p/s，glutamax，hepes；所述添加劑成分包括：hydrocortisone，sb202190，rspondin1，egf，n-acetylcysteine，nicotinamide；所述特異性因子成分包括：pge2，insulin，fgf-10，a?83-01。
4、在本專利技術的一些實施例中，所述培養基中各組分的濃度范圍為：在dmem/f12中加入3-15?%?fbs，0.5-2×?p/s，1-5?mm?glutamax，5-20?mm?hepes，5-50?nmhydrocortisone，1-15?μm?sb202190，0.3-1.5?μg/ml?rspondin1，1-15?ng/ml?egf，1-5?mmn-acetylcysteine，1-15?mm?nicotinamide，500-1500?nm?pge2，1-10?μg/ml?insulin，5-20?ng/ml?fgf-10，5-40?nm?a?83-01。
5、在本專利技術的一些實施例中，所述添加劑成分還包括y-27632。
6、在本專利技術的一些實施例中，y-27632的濃度為5-30?μm。
7、一種脂肪肉瘤類器官的構建與培養方法，包含如下步驟：
8、(1）脂肪肉瘤手術樣本離體后，使用5倍樣本體積的樣本清洗與保存液清洗一遍后，轉移樣本至新的10倍樣本體積的樣本清洗與保存液中，0-8℃冷鏈運輸，迅速轉移樣本至實驗室；
9、（2）清洗樣本：取出脂肪肉瘤樣本，使其浸沒入10倍樣本體積的樣本清洗與保存液中，于200rpm，25℃恒溫搖床震蕩孵育30min，期間每10min更換一次樣本清洗與保存液；
10、（3）清洗結束，收集樣本，使用無菌手術刀將樣本切成1?mm3肉糜狀小塊，使用1×dpbs重懸樣本至15?ml離心管中；
11、（4）300?rpm，離心3?min，棄去上清，收集樣本沉淀，加入所述含y-27632的培養基重懸，形成細胞懸液，與matrigel充分混勻后形成mix，使用寬口槍頭將mix均勻平鋪于細胞培養板中；
12、（5）37℃培養箱靜置30?min，matrigel充分凝固后向孔板中補入脂肪肉瘤類器官培養基；
13、（6）37℃培養箱培養過夜，次日更換為所述不含y-27632的培養基；
14、（7）37℃培養箱持續培養10~40天，每3天換液一次。
15、在本專利技術的一些實施例中，所述樣本清洗與保存液的配方為：在1×?dpbs中加入1-2×?青霉素-鏈霉素-兩性霉素b，5-10?μm?y-27632，現用現配，0-8℃暫存或運輸。
16、本專利技術的有益效果在于：本專利技術提供了一種脂肪肉瘤類器官的培養基、構建與培養方法，意在克服上述技術障礙，助力精準醫療，為延長患者生存時間，提高患者生活質量；同時也為后續疾病研究與相關藥物研發提供新的體外研究平臺。本專利技術提供的脂肪肉瘤類器官培養基、構建與培養方法，可以高效轉化手術切除的脂肪肉瘤組織樣本為脂肪肉瘤類器官。根據脂肪肉瘤發生的信號通路，制備適合脂肪肉瘤類器官特異性生長的脂肪肉瘤類器官培養基，利用matrigel模擬細胞外基質為樣本提供3d支撐，持續培養，使其始終保留與原始腫瘤一致的干性與異質性，與傳統脂肪肉瘤模型相比縮短了模型構建時間，并提升了構建效率。
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1.一種用于培養脂肪肉瘤類器官的培養基，其特征在于：包含培養基的基礎成分、添加劑成分和特異性因子成分；所述基礎成分包括：DMEM/F12，FBS，P/S，GlutaMAX，HEPES；所述添加劑成分包括：Hydrocortisone，SB202190，Rspondin1，EGF，N-Acetylcysteine，Nicotinamide；所述特異性因子成分包括：PGE2，Insulin，FGF-10，A?83-01。
2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于：所述培養基中各組分的濃度范圍為：在DMEM/F12中加入3-15?%?FBS，0.5-2×?P/S，1-5?mM?GlutaMAX，5-20?mM?HEPES，5-50?nMHydrocortisone，1-15?μM?SB202190，0.3-1.5?μg/mL?Rspondin1，1-15?ng/mL?EGF，1-5?mMN-Acetylcysteine，1-15?mM?Nicotinamide，500-1500?nM?PGE2，1-10?μg/mL?Insulin，5-20?ng/mL?FGF-10，5-
3.根據權利要求2所述的培養基，其特征在于：所述添加劑成分還包括Y-27632。
4.根據權利要求3所述的培養基，其特征在于：Y-27632的濃度為5-30?μM。
5.一種脂肪肉瘤類器官的構建與培養方法，其特征在于：包含如下步驟：
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述樣本清洗與保存液的配方為：在1×DPBS中加入1-2×?青霉素-鏈霉素-兩性霉素B，5-10?μM?Y-27632，現用現配，0-8℃暫存或運輸。
...【技術特征摘要】
1.一種用于培養脂肪肉瘤類器官的培養基，其特征在于：包含培養基的基礎成分、添加劑成分和特異性因子成分；所述基礎成分包括：dmem/f12，fbs，p/s，glutamax，hepes；所述添加劑成分包括：hydrocortisone，sb202190，rspondin1，egf，n-acetylcysteine，nicotinamide；所述特異性因子成分包括：pge2，insulin，fgf-10，a?83-01。
2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于：所述培養基中各組分的濃度范圍為：在dmem/f12中加入3-15?%?fbs，0.5-2×?p/s，1-5?mm?glutamax，5-20?mm?hepes，5-50?nmhydrocortisone，1-15?μm?sb202190，0.3-1.5?μg/ml?rsp...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉海洋，蘇芮，孫潤，于升，闞方明，何曉燕，米小容，黃璘，
申請(專利權)人：北京嘉士騰醫學檢驗實驗室有限公司，
類型：發明
國別省市：
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