一種基于納米酶的金黃色葡萄球菌信號“開關”型電化學適體傳感器，按照下述制備方法制得：步驟一：Pt/C?ZIF?8納米酶的合成：先用常規溶劑熱法制得ZIF?8；再按照以下工藝制備Pt?NPs：將PVP加入H<subgt;2</subgt;PtCl<subgt;6</subgt;溶液中，然后將NaBH<subgt;4</subgt;緩慢滴入該溶液中，待上述溶液顏色為深褐色時，繼續攪拌生成的Pt?NPs分散體備用；然后將ZIF?8溶液與Pt?NPs分散液混合，持續攪拌得到Pt/ZIF?8；將形成的Pt/ZIF?8粉末碳化，得到Pt/C?ZIF?8納米酶；步驟二：制得Apt/Pt/C?ZIF?8/GCE傳感器：將Pt/C?ZIF?8懸浮液滴涂在拋光后的玻碳電極表面制得Pt/C?ZIF?8/GCE，將Pt/C?ZIF?8/GCE浸入金黃色葡萄球菌?Apt溶液中，得到Apt/Pt/C?ZIF?8/GCE傳感器。本發明專利技術用于高靈敏高選擇性檢測金黃色葡萄球菌。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種基于納米酶的金黃色葡萄球菌信號“開關”型電化學適體傳感器的制備方法及應用方法，屬于電化學生物傳感。
技術介紹
1、金黃色葡萄球菌(staphylococcus?aureus,s.aureus)是一種革蘭氏陽性致病性細菌，在世界范圍內可引起人類廣泛的感染和疾病(如腦膜炎、心內膜炎、肺炎、膿腫和敗血癥)，并可產生不同的毒素導致食物中毒。因此，構建有效的金黃色葡萄球菌檢測傳感方法是十分必要的。
2、傳統的金黃色葡萄球菌實驗室檢測方法包括酶聯免疫吸附法、聚合酶鏈反應、d鏈位移擴增和連接酶鏈反應等。這些方法非常重要，但通常存在耗時、操作復雜或儀器昂貴等缺點。
3、與這些傳統方法相比，基于納米酶的電化學傳感器具有響應快速，制作簡單且成本低的特點。但金屬基納米酶容易聚集和失活，且大多數納米酶的催化能力較弱，缺乏特異性識別位點，這對其實際應用造成了很大的限制。因此，需要設計合適的載體來錨定金屬以提高納米酶的活性和穩定性，同時設計特異性的識別探針，以提高檢測的選擇性。
技術實現思路
1、本專利技術要解決的技術問題是：克服現有技術存在的缺陷，用zif-8衍生碳來固載鉑納米粒子，用適配體作為識別器件，提出一種基于納米酶的金黃色葡萄球菌信號“開關”型電化學適體傳感器，用于高靈敏高選擇性檢測金黃色葡萄球菌。
2、為了解決上述技術問題，本專利技術提出下列技術方案：一種基于納米酶的金黃色葡萄球菌信號“開關”型電化學適體傳感器，按照下述制備方法制得：
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p>3、步驟一：pt/c-zif-8納米酶的合成；4、先用常規溶劑熱法制得zif-8，然后按照以下工藝制備pt?nps：將pvp加入h2ptcl6溶液中，然后將nabh4緩慢滴入該溶液中，待上述溶液顏色為深褐色時，繼續攪拌生成的ptnps分散體備用；
5、將zif-8溶液與pt?nps分散液混合，持續攪拌得到pt/zif-8；
6、將形成的pt/zif-8粉末碳化，得到pt/c-zif-8納米酶；
7、步驟二：制得apt/pt/c-zif-8/gce傳感器；
8、將pt/c-zif-8懸浮液滴涂在拋光后的玻碳電極表面制得pt/c-zif-8/gce，將pt/c-zif-8/gce浸入金黃色葡萄球菌-apt溶液中，得到apt/pt/c-zif-8/gce傳感器。
9、上述技術方案的進一步限定在于，步驟一中：將51.5mg?pvp加入2.0mm?h2ptcl6溶液(50.0ml)中，然后將3.0ml?nabh4(0.15mol/l)緩慢滴入該溶液中，待上述溶液顏色為深褐色時，繼續攪拌生成的pt?nps分散體3小時備用；
10、將5.0ml?zif-8溶液(1.0mg/ml)與100.0ml?pt?nps分散液混合，持續攪拌得到pt/zif-8；
11、將形成的pt/zif-8粉末在800℃(5℃/min)下碳化2h，得到pt/c-zif-8納米酶；
12、步驟二中：將10μl的pt/c-zif-8懸浮液(0.5mg/ml)滴涂在拋光后的玻碳電極表面。
13、本專利技術具有下列有益效果：
14、1、本專利技術合成了一種具有優異的過氧化物酶模擬活性的pt/c-zif-8納米雜化物，并將其創新性地用于制備簡單靈敏的金黃色葡萄球菌“off-on”電化學apt傳感器。實驗結果表明，所制備的pt/c-zif-8納米酶能夠通過催化opd氧化加速dap的生成。pt/c-zif-8一旦與apt結合形成apt/pt/c-zif-8傳感器，其活性就會被抑制，導致dap峰值電流降低(信號“關”)。加入金黃色葡萄球菌后，催化活性成功恢復，且強度與金黃色葡萄球菌度呈線性關系，導致dap峰增加(信號“on”)。通過對實驗條件的優化，所提出的基于信號“off-on”納米酶的電化學apt傳感器對金黃色葡萄球菌(lod,2cfu/ml；線性范圍，10-109cfu/ml)。
15、2、本專利技術制備了以鉑納米粒子(pt/zif-8)修飾的zif-8(一種鋅基mof)，然后對其進行炭化處理，形成的pt/c-zif-8具有高導電性和豐富的活性位點。結果表明，pt/c-zif-8納米酶對1,2-二氨基苯(opd)氧化和二氨基苯(dap)具有顯著的催化活性。將金黃色葡萄球菌的apt直接作用于pt/c-zif-8表面后，由于活性位點被覆蓋，相關納米酶活性受到抑制，導致dap峰消失(信號“off”)。當金黃色葡萄球菌存在時，這種催化活性可以恢復，并且dap電流會相對增加，稱為信號“開”狀態。基于這一機制，本專利技術設計了一種新型的基于納米酶的信號“off-on”電化學apt傳感器，實現了對金黃色葡萄球菌的簡單靈敏監測，該傳感器還可以避免apt的固定化過程，在金黃色葡萄球菌以外的多種病原體的檢測中具有很大的應用潛力，為通過簡單改變相關apt來檢測各種病原體提供一種新穎、簡單、可靠的策略。
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【技術保護點】
1.一種基于納米酶的金黃色葡萄球菌信號“開關”型電化學適體傳感器，其特征在于，其按照下述制備方法制得：
2.根據權利要求1所述的一種基于納米酶的金黃色葡萄球菌信號“開關”型電化學適體傳感器，其特征在于，
【技術特征摘要】
1.一種基于納米酶的金黃色葡萄球菌信號“開關”型電化學適體傳感器，其特征在于，其按照下述制備方法制得：
【專利技術屬性】
技術研發人員：蔣曉華，呂智文，陳小文，
申請(專利權)人：深圳職業技術大學，
類型：發明
國別省市：
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