【技術實現步驟摘要】
本申請涉及分子生物學領域，具體地，涉及一種檢測乳腺癌相關的多基因的引物組及其應用、試劑盒。
技術介紹
1、乳腺癌是全球女性中最常見的惡性腫瘤之一，其早期診斷和有效治療對提高患者生存率至關重要。傳統的乳腺癌檢測方法(如影像學檢查和組織活檢)存在一定的局限性，如侵入性、檢測靈敏度不足等。
2、數字pcr(dpcr)是一種核酸分子絕對定量技術，其采用微流控或微液滴化方法，將稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微液滴中，每個反應器的核酸模板數少于一個或等于一個，經過pcr循環后，有核酸分子模板的反應器會給出熒光信號，沒有模板的反應器沒有熒光信號，從而可以推測出原始溶液的核酸濃度。相比傳統的pcr方法，數字pcr具有更高的靈敏度和準確性。能夠實現對低豐度核酸分子的精確定量，為多重生物標志物的檢測提供了新的技術途徑。
3、目前乳腺癌治療中，用于臨床的主要有下幾種基因檢測產品：21基因檢測、50基因檢測、70基因檢測、28基因檢測、12基因檢測及bcra基因檢測。其中，21基因檢測、12基因檢測、50基因檢測、70基因檢測、28基因檢測都屬于多基因檢測，用于基因檢測的樣本是手術切下來的腫瘤組織。采用rt-pcr(逆轉錄pcr)方法或基于ngs平臺檢測與乳腺癌復發相關的基因表達水平。
4、目前市場上的現有方法檢測往往面臨靈敏度不足、檢測時間長和結果不穩定等問題，無法利用全血樣本對乳腺癌進行早期診斷。市場上亟需一種能夠對全血樣本、高靈敏度、高效地檢測多種乳腺癌生物標志物檢測的技術，一種可以應用dpcr技術同時
技術實現思路
1、為解決以上技術問題，本申請提出了一種檢測乳腺癌相關的多基因的引物組，包括：檢測epcam基因的第一引物對，所述第一引物對包括序列如seq?id?no.1所示的正向引物和序列如seq?id?no.2所示的反向引物；檢測actb基因的第二引物對，所述第二引物對包括序列如seq?id?no.3所示的正向引物和序列如seq?id?no.4所示的反向引物；檢測ck-19基因的第三引物對，所述第三引物對包括序列如seq?id?no.5所示的正向引物和序列如seqid?no.6所示的反向引物；檢測scgb2a2基因的第四引物對，所述第四引物對包括序列如seqid?no.7所示的正向引物和序列如seq?id?no.8所示的反向引物；檢測gapdh基因的第五引物對，所述第五引物對包括序列如seq?id?no.9所示的正向引物和序列如seq?id?no.10所示的反向引物。
2、根據本申請實施方式，引物組還包括：檢測epcam基因的第一探針，所述第一探針的序列如seq?id?no.11所示；檢測actb基因的第二探針，所述第二探針的序列如seq?idno.12所示；檢測ck-19基因的第三探針，所述第三探針的序列如seq?id?no.13所示；檢測scgb2a2基因的第四探針，所述第四探針的序列如seq?id?no.14所示；檢測gapdh基因的第五探針，所述第五探針的序列如seq?id?no.15所示。
3、本申請還提出了，包含第一引物對、第二引物對、第三引物對、第四引物對和第五引物對以及第一探針、第二探針、第三探針、第四探針和第五探針的引物組在制備檢測乳腺癌相關的多基因的產品中的應用。
4、根據本申請實施方式，所述產品為試劑盒。
5、本申請還提出了一種檢測乳腺癌相關的多基因的試劑盒，其特征在于，包含第一引物對、第二引物對、第三引物對、第四引物對和第五引物對以及第一探針、第二探針、第三探針、第四探針和第五探針的檢測乳腺癌相關的多基因的引物組合。
6、根據本申請實施方式，第一引物對、第二引物對、第三引物對、第四引物對和第五引物對中各引物的工作濃度均為250nm。
7、根據本申請實施方式，所述第一探針、第二探針、第三探針、第四探針和第五探針的工作濃度均為250nm。
8、本申請提供的一種檢測乳腺癌相關的多基因的引物組和試劑盒，搭配數字pcr技術，能夠實現對低豐度基因進行高靈敏性測試，在同一反應體系中可以同時檢測多個生物標志物基因的基因拷貝數，簡化操作流程，提高檢測效率。同時，可以根據多個生物標志物基因的基因拷貝數的比值，對乳腺癌進行初步識別。
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1.一種檢測乳腺癌相關的多基因的引物組，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的引物組，其特征在于，還包括：
3.一種引物組在制備檢測乳腺癌相關的多基因的產品中的應用，其特征在于，所述引物組包括：
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述產品為試劑盒。
5.一種檢測乳腺癌相關的多基因的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：
6.根據權利要求5所述的檢測乳腺癌相關的多基因的試劑盒，其特征在于，所述第一引物對、所述第二引物對、所述第三引物對、所述第四引物對和所述第五引物對中各引物的工作濃度均為250nM。
7.根據權利要求6所述的檢測乳腺癌相關的多基因的試劑盒，其特征在于，所述第一探針、所述第二探針、所述第三探針、所述第四探針和所述第五探針的工作濃度均為250nM。
【技術特征摘要】
1.一種檢測乳腺癌相關的多基因的引物組，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的引物組，其特征在于，還包括：
3.一種引物組在制備檢測乳腺癌相關的多基因的產品中的應用，其特征在于，所述引物組包括：
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述產品為試劑盒。
5.一種檢測乳腺癌相關的多基因的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包...
【專利技術屬性】
技術研發人員：裘宇容，于雪，全智慧，李奎，
申請(專利權)人：廣州華銀醫學檢驗中心有限公司，
類型：發明
國別省市：
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