【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種可檢測imp多種變體的抗體制備及其應用，屬于生物醫藥領域。
技術介紹
1、抗微生物藥物耐藥性是一場緊迫的全球衛生和社會經濟危機。抗微生物藥物耐藥性威脅著所有區域的所有年齡組，低收入和中等收入國家受影響最大。它對人類和動物健康、糧食生產和環境產生重大影響，并威脅到多個可持續發展目標的實現。
2、細菌耐藥監測報告均有數據報道顯示：總體上臨床感染仍以革蘭氏陰性菌為主(70.1％)，呼吸道標本占比升高至42.2％；碳青霉烯耐藥革蘭氏陰性菌(cro)檢出率仍保持高位，碳青霉烯類耐藥肺炎克雷伯菌(crkp)、碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌(crab)及碳青霉烯類耐藥銅綠假單胞菌(crpa)均呈上升趨勢；而甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(mrsa)也有上升。
3、碳青霉烯耐藥腸桿菌(cre)作為臨床抗感染治療中的“難治性對手”，近年來其威脅也日益凸顯。更令人擔憂的是cre感染的高病死率。cre感染多發生于罹患嚴重基礎疾病、免疫缺陷，和(或)長期反復使用廣譜抗菌藥物的患者，感染后患者病情相對較重——總體住院死亡率更是高達46.2％。
4、亞胺培酶或imp型金屬β-內酰胺酶(mbl)自1990年代在日本被發現以來，已成為一種常見酶，尤其是在亞洲。imp型酶目前有88種變體。imp型酶最常見的是imp-1的變體。已在腸桿菌科的十多個物種中檢測到imp型mbl，銅綠假單胞菌是全球最常見的imp型酶載體。在全世界報道的88種imp型mbl變體中，僅發現32種變體具有易感性特征。大多數攜帶imp型mbls的細
5、有研究對imp型mbl基因進行了計算機分析，對88種imp變體的多重序列比對，確定了活性位點的保守序列如下：his95、phe96、his97、asp99、ser100、his157、cys176和his215，這些序列是內酰胺環催化位點的殘基。整體分析顯示氨基酸序列相似性為79.3％–96.7％。imp酶結構域預測結果表明其僅包含一個結構域，即“金屬水解酶樣mbl折疊超家族”，覆蓋從氨基酸位置23到位置234。所構建的系統發育樹第i組包含38個變體，第ii組包含41個變體，第iii組包含9個變體。
6、目前針對cre感染的治療選擇有限，而且死亡率高，并帶來巨大的經濟和社會負擔。及早識別cpgnb有助于及時采取感染預防和控制措施以及治療管理，而隨著幾種新型抗菌藥物的面世，識別耐藥機制已變得至關重要。
7、免疫層析是一種快速、便捷的體外診斷技術，其無需儀器設備，且不受基因沉默的假陽性影響。但是，如果目標蛋白的表達較弱，或所使用的抗體識別的抗原表位的關鍵氨基酸發生變化，免疫層析也可能出現假陰性。因而提供一種靈敏度高、可結合imp酶多種變體的特異性抗體仍然是目前市場亟需的。
技術實現思路
1、針對上述現有技術的不足，本專利技術提供了一種可檢測imp多種變體的抗體制備及其應用，目的在于解決imp酶具有較多的變體，而現有免疫層析中，由于目標蛋白的表達較弱會導致對于imp酶多種變體出現假陰性的技術問題。
2、本專利技術提供的第一個技術方案為抗imp型碳青霉烯酶抗體，所述抗imp型碳青霉烯酶抗體包括輕鏈可變區和重鏈可變區，所述輕鏈可變區具有由cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3組成的輕鏈cdr，所述重鏈可變區具有由cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3組成的重鏈cdr，所述cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3、cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3的氨基酸序列如(a)～(b)任一組所示：
3、(a)seq?id?no:1～3、seq?id?no:5～7；
4、(b)seq?id?no:9～11、seq?id?no:13～15。
5、在某些實施方式中，所述輕鏈可變區、重鏈可變區的氨基酸序列如(c)～(d)任一組所示：
6、(c)seq?id?no:4、seq?id?no:8；
7、(d)seq?id?no:12、seq?id?no:16。
8、本專利技術提供的第二個技術方案為編碼第一個技術方案所述抗體的基因。
9、本專利技術提供的第三個技術方案為攜帶第二個技術方案所述多核苷酸的重組載體。
10、在某些實施方式中，所述重組載體以質粒pcmv-c-flag為表達載體。
11、本專利技術提供的第四個技術方案為表達有第一個技術方案所述抗體，或者含有第二個技術方案所述基因，或者轉化有第三個技術方案所述重組載體的重組細胞。
12、在某些實施方式中，所述重組細胞以真菌、細菌、動物細胞或植物細胞為宿主。
13、在某些實施方式中，所述真菌包括酵母或霉菌，所述細菌包括大腸桿菌。
14、在某些實施方式中，所述動物細胞包括但不限于293細胞。
15、本專利技術提供的第五個技術方案為一種抗imp型碳青霉烯酶抗體的制備方法，所述方法是培養第四個技術方案所述的重組細胞，獲得含有第一個技術方案所述抗體的培養物。
16、本專利技術提供的第六個技術方案一種生物標記或化學標記的產品，所述產品為被標記物標記的抗體，所述抗體來源為如下任意一種：
17、(1)第一個技術方案所述的抗體；
18、(2)第四個技術方案所述重組細胞的培養物。
19、在某些實施方式中，所述標記物包括但不限于酶類、生物素類、熒光素類、化學發光類、同位素類、膠體類、乳膠微球類、磁珠類；所述酶類包括但不限于辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、過氧化物酶-抗過氧化物酶橋接物、堿性磷酸酶-抗堿性磷酸酶橋接物、β-半乳糖苷酶-抗β-半乳糖苷酶橋接物；所述生物素類包括但不限于生物素及其衍生物；所述熒光素類包括但不限于af350、af488、af532、af546、af555、af568、af594、af633、af647、af660、af680、fitc、tritc、rb200、藻紅蛋白、apc、cy5、oregon?green488、pacificblue染料、pacific?orange染料、texas?red、percp染料；所述化學發光類包括但不限于異魯米諾及其衍生物、吖啶酯及其衍生物、三聯吡啶釕及其衍生物等；所述同位素類包括但不限于碘標記；所述膠體類標記包括但不限于膠體金、膠體碳、膠體硒等。
20、本專利技術提供的第七個技術方案為一種試劑盒，所述試劑盒含有第一個技術方案所述的抗體或第六個技術方案所述的生物標記或化學標記的產品。
21、在某些實施方式中，所述試劑盒為免疫層析試劑盒，包括檢測卡，所述檢測卡包括：pvc底板、樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙；所述的樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙依次搭接粘貼在所述的底板上；結合墊上噴涂有輕鏈可變區氨基酸序列如seqid?no:12所示和重鏈可本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.抗IMP型碳青霉烯酶抗體，其特征在于，所述抗IMP型碳青霉烯酶抗體包括輕鏈可變區和重鏈可變區，所述輕鏈可變區具有由CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3組成的輕鏈CDR，所述重鏈可變區具有由CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3組成的重鏈CDR，所述CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3的氨基酸序列如(a)～(b)任一組所示：
2.根據權利要求1所述的抗體，其特征在于，所述輕鏈可變區、重鏈可變區的氨基酸序列如(c)～(d)任一組所示：
3.編碼權利要求1或2所述抗體的基因。
4.攜帶權利要求3所述基因的重組載體。
5.表達有權利要求1或2所述抗體，或者含有權利要求3所述基因，或者轉化有權利要求4所述重組載體的重組細胞。
6.根據權利要求5所述的重組細胞，其特征在于，所述重組細胞以細菌、真菌、動物細胞或植物細胞為宿主；可選地，所述真菌包括酵母或霉菌，所述細菌包括大腸桿菌。
7.一種抗IMP型碳青霉烯酶抗體的制備方法，其特征在于，所述方法是培養權利要求5或6所述
8.一種生物標記或化學標記的產品，其特征在于，所述產品為被標記物標記的抗體，所述抗體來源為如下任意一種：
9.根據權利要求8所述的產品，其特征在于，所述標記物包括但不限于酶類、生物素類、熒光素類、化學發光類、同位素類、膠體類、乳膠微球類、磁珠類；可選地，所述酶類包括但不限于辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、過氧化物酶-抗過氧化物酶橋接物、堿性磷酸酶-抗堿性磷酸酶橋接物、β-半乳糖苷酶-抗β-半乳糖苷酶橋接物；所述生物素類包括但不限于生物素及其衍生物；所述熒光素類包括但不限于AF350、AF488、AF532、AF546、AF555、AF568、AF594、AF633、AF647、AF660、AF680、FITC、TRITC、RB200、藻紅蛋白、APC、Cy5、Oregon?Green488、Pacific?Blue染料、Pacific?Orange染料、Texas?Red、PerCP染料；所述化學發光類包括但不限于異魯米諾及其衍生物、吖啶酯及其衍生物、三聯吡啶釕及其衍生物；所述同位素類包括但不限于碘標記；所述膠體類標記包括但不限于膠體金、膠體碳、膠體硒。
10.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有權利要求1或2所述的抗體或權利要求8或9所述的生物標記或化學標記的產品。
11.根據權利要求10所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括酶聯免疫試劑盒、免疫熒光試劑盒。
12.根據權利要求10或11所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒為免疫層析試劑盒，包括檢測卡，所述檢測卡包括：PVC底板、樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙；所述的樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙依次搭接粘貼在所述的底板上；結合墊上噴涂有輕鏈可變區氨基酸序列如SEQ?ID?NO:12所示和重鏈可變區氨基酸序列如SEQ?ID?NO:16所示的抗體標記的示蹤標志物，C線、T線，其中C線固定鼠抗人IgG抗體，T線固定輕鏈可變區氨基酸序列如SEQ?ID?NO:4所示和重鏈可變區氨基酸序列如SEQ?ID?NO:8所示抗體。
13.權利要求1或2所述的抗體，或者權利要求3所述的基因，或者權利要求4所述的重組載體，或者權利要求5或6所述的重組細胞，或者權利要求7所述的方法，或者權利要求8或9所述的生物標記或化學標記的產品在制備用于檢測IMP型碳青霉烯酶產品中的應用。
14.根據權利要求13所述的應用，其特征在于，所述產品包括試劑、試劑盒、檢測芯片或生物傳感器。
...【技術特征摘要】
1.抗imp型碳青霉烯酶抗體，其特征在于，所述抗imp型碳青霉烯酶抗體包括輕鏈可變區和重鏈可變區，所述輕鏈可變區具有由cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3組成的輕鏈cdr，所述重鏈可變區具有由cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3組成的重鏈cdr，所述cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3、cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3的氨基酸序列如(a)～(b)任一組所示：
2.根據權利要求1所述的抗體，其特征在于，所述輕鏈可變區、重鏈可變區的氨基酸序列如(c)～(d)任一組所示：
3.編碼權利要求1或2所述抗體的基因。
4.攜帶權利要求3所述基因的重組載體。
5.表達有權利要求1或2所述抗體，或者含有權利要求3所述基因，或者轉化有權利要求4所述重組載體的重組細胞。
6.根據權利要求5所述的重組細胞，其特征在于，所述重組細胞以細菌、真菌、動物細胞或植物細胞為宿主；可選地，所述真菌包括酵母或霉菌，所述細菌包括大腸桿菌。
7.一種抗imp型碳青霉烯酶抗體的制備方法，其特征在于，所述方法是培養權利要求5或6所述的重組細胞，獲得含有權利要求1或2所述抗體的培養物。
8.一種生物標記或化學標記的產品，其特征在于，所述產品為被標記物標記的抗體，所述抗體來源為如下任意一種：
9.根據權利要求8所述的產品，其特征在于，所述標記物包括但不限于酶類、生物素類、熒光素類、化學發光類、同位素類、膠體類、乳膠微球類、磁珠類；可選地，所述酶類包括但不限于辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、過氧化物酶-抗過氧化物酶橋接物、堿性磷酸酶-抗堿性磷酸酶橋接物、β-半乳糖苷酶-抗β-半乳糖苷酶橋接物；所述生物素類包括但不限于生物素及其衍生物；所述熒光素類包括但不限于af350、af488、af532、...
【專利技術屬性】
技術研發人員：孫康俊，鄭焙文，劉美江，徐浩，鄧玲玲，井良宸，
申請(專利權)人：江蘇美克醫學技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。