【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術屬于分子生物學檢測領域，具體地，涉及hpv的檢測，更具體地，涉及基于非對稱pcr單管檢測26種hpv并分型的組合物。
技術介紹
1、人乳頭瘤病毒(human?papilloma?virus,hpv)屬于乳頭瘤病毒科，是一種小分子的、無被膜包被的環(huán)狀雙鏈dna病毒，基因組長約8000堿基對(bp)，分為3個功能區(qū)，即早期轉錄區(qū)(e區(qū))、晚期轉錄區(qū)(l區(qū))和非轉錄區(qū)(長控制區(qū)，lcr)。人乳頭瘤病毒通過直接或間接接觸污染物品或性傳播感染人類。該病毒不但具有宿主特異性，而且具有組織特異性，只能感染人的皮膚和粘膜上皮細胞，引起人類皮膚的多種乳頭狀瘤或疣及生殖道上皮增生性損傷。
2、根據(jù)各基因型別致病力大小或致癌危險性大小可分為低危型和高危型兩大類。在有性生活史的女性中生殖道hpv感染具有普遍性，據(jù)統(tǒng)計70％～80％的女性在其一生中會有至少一次的hpv感染，但大多數(shù)感染為自限性，超過90％的感染的女性會出現(xiàn)一種有效的免疫應答，在沒有任何長期的健康干預時在6到24個月之間可以清除感染。而持續(xù)性的高危型hpv感染則是導致宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的主要原因。
3、目前hpv基因分型檢測方法，流式熒光雜交法：該技術將pcr擴增產(chǎn)物和微球上交聯(lián)的熒光標記物探針雜交，最后在多功能流式點陣儀上檢測熒光信號。缺點操作復雜繁瑣，價格昂貴且需要專業(yè)技術人員操作。pcr-taqmanmgb探針分型法，因其操作簡單，分型準確，全程閉管操作等特點，是目前常用的檢測方法。然而由于儀器采集信號通道的限制，每次反應都只能檢測有限的hpv型
4、本領域需求一種單管擴增到雜交的多重pcr鑒別方法，能夠?qū)崿F(xiàn)同時對多種病原體的快速檢測，大大縮短了傳統(tǒng)檢測方法所需的時間，提高了多重pcr的時效性，同時能快速檢測樣本中是否存在26種高危型人乳頭瘤病毒并分型，為hpv的預防和治療提供新的技術選擇。
技術實現(xiàn)思路
1、有鑒于此，第一方面，本專利技術提供一種檢測hpv并分型的組合物，包括檢測下列26個靶標中至少8個的引物及探針組：
2、如seq?id?no:1～3所示的檢測hpv6的上游引物、下游引物及探針；
3、如seq?id?no:4～6所示的檢測hpv11的上游引物、下游引物及探針；
4、如seq?id?no:7～9所示的檢測普hpv16的上游引物、下游引物及探針；
5、如seq?id?no:10～12所示的檢測hpv18的上游引物、下游引物及探針；
6、如seq?id?no:13～15所示的檢測hpv31的上游引物、下游引物及探針；
7、如seq?id?no:16～18所示的檢測hpv33的上游引物、下游引物及探針；
8、如seq?id?no:19～21所示的檢測hpv35的上游引物、下游引物及探針；
9、如seq?id?no:22～24所示的檢測hpv39的上游引物、下游引物及探針；
10、如seq?id?no:25～27所示的檢測hpv40的上游引物、下游引物及探針；
11、如seq?id?no:28～30所示的檢測hpv42的上游引物、下游引物及探針；
12、如seq?id?no:31～33所示的檢測hpv43的上游引物、下游引物及探針；
13、如seq?id?no:34～36所示的檢測hpv44的上游引物、下游引物及探針；
14、如seq?id?no:37～39所示的檢測hpv45的上游引物、下游引物及探針；
15、如seq?id?no:40～42所示的檢測hpv51的上游引物、下游引物及探針；
16、如seq?id?no:43～45所示的檢測hpv52的上游引物、下游引物及探針；
17、如seq?id?no:46～48所示的檢測hpv53的上游引物、下游引物及探針；
18、如seq?id?no:49～51所示的檢測hpv54的上游引物、下游引物及探針；
19、如seq?id?no:52～54所示的檢測hpv55的上游引物、下游引物及探針；
20、如seq?id?no:55～57所示的檢測hpv56的上游引物、下游引物及探針；
21、如seq?id?no:58～60所示的檢測hpv57的上游引物、下游引物及探針；
22、如seq?id?no:61～63所示的檢測hpv58的上游引物、下游引物及探針；
23、如seq?id?no:64～66所示的檢測hpv59的上游引物、下游引物及探針；
24、如seq?id?no:67～69所示的檢測hpv66的上游引物、下游引物及探針；
25、如seq?id?no:70～72所示的檢測hpv67的上游引物、下游引物及探針；
26、如seq?id?no:73～75所示的檢測hpv68的上游引物、下游引物及探針；或
27、如seq?id?no:76～78所示的檢測hpv73的上游引物、下游引物及探針。
28、進一步地，所述組合物包括檢測上述26個靶標中至少8個、10個、12個、15個、18個、20個、22個、24個、25個、26個的引物及探針組。
29、本專利技術提供的聯(lián)檢的組合物，主要利用不對稱多重pcr的分析方法，通過檢測不同病原體上的靶點，對不同靶標進行檢測，從而在單管反應體系中同時實現(xiàn)26種hpv的檢測和區(qū)分，以便為后續(xù)治療提供針對性策略。本專利技術的組合物大大縮短了傳統(tǒng)檢測方法所需的時間，整個檢測過程僅需要40-50分鐘，提高了多重pcr的時效性，使得臨床醫(yī)生能夠針對性地為上述病原體引發(fā)感染的防治提供策略。
30、在一個具體的實施方案中，本專利技術提供一種檢測hpv并分型的組合物，包括：
31、如seq?id?no:1～3所示的檢測hpv6的上游引物、下游引物及探針；
32、如seq?id?no:4～6所示的檢測hpv11的上游引物、下游引物及探針；
33、如seq?id?no:7～9所示的檢測普hpv16的上游引物、下游引物及探針；
34、如seq?id?no:10～12所示的檢測hpv18的上游引物、下游引物及探針；
35、如seq?id?no:13～15所示的檢測hpv31的上游引物、下游引物及探針；
36、如seq?id?no:16～18所示的檢測hpv33的上游引物、下游引物及探針；
37、如seq?id?本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
1.一種檢測HPV并分型的組合物，包括檢測下列26個靶標中至少8個的引物及探針組：
2.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括檢測上述26個靶標中至少20個的引物及探針組。
3.根據(jù)權利要求2所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括檢測上述26個靶標的引物及探針組。
4.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物中上下游引物其中之一是限制性引物，另一個是非限制性引物；限制性引物和非限制性引物的濃度比為1:1～1:50。
5.根據(jù)權利要求1～4中任一項所述的組合物，其特征在于，所述組合物中還包括載體。
6.根據(jù)權利要求5所述的組合物，其特征在于，所述載體為芯片。
7.根據(jù)權利要求1～6中任一項所述的組合物在制備檢測HPV的試劑盒中的用途。
8.一種檢測HPV的試劑盒，所述試劑盒包括如權利要求1～6中任一項所述的組合物。
9.一種組合物用于制備檢測HPV并分型的試劑的用途，所述檢測包括以下步驟：
10.根據(jù)權利要求9所述的用途，其特征在于，所述步驟2)和
...【技術特征摘要】
1.一種檢測hpv并分型的組合物，包括檢測下列26個靶標中至少8個的引物及探針組：
2.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括檢測上述26個靶標中至少20個的引物及探針組。
3.根據(jù)權利要求2所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括檢測上述26個靶標的引物及探針組。
4.根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物中上下游引物其中之一是限制性引物，另一個是非限制性引物；限制性引物和非限制性引物的濃度比為1:1～1:50。
5.根據(jù)權利要...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：陳霞，丁平慧，劉佩珊，吳康，任小梅，戴立忠，
申請(專利權)人：圣湘生物科技股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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