【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病模型，具體涉及一種濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、濕熱型濕疹(damp-heat?eczema)是由多種復(fù)雜的內(nèi)、外因素引起的一種疾病，病因復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚。分為急性期、亞急性期、慢性期，不同時(shí)期具有不同的病理表現(xiàn)。大量基礎(chǔ)和臨床研究表明，濕熱型濕疹是一種濕熱證伴有過敏性炎癥性疾病，具有脾胃運(yùn)化不力、臟器形態(tài)異常、濕熱蘊(yùn)結(jié)于內(nèi)、精神萎靡、形體消瘦并伴有表皮滲液及糜爛、皮損苔蘚化及鱗屑狀病理變化。
2、全球疾病負(fù)擔(dān)研究顯示，兒童的濕疹患病率約20％，成人患病率高達(dá)10％。在常見的非致命性疾病中排名第15位，并且患者人數(shù)逐年遞增。由于濕熱型濕疹發(fā)病人數(shù)的持續(xù)增加，社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)日益明顯，但是已有的濕熱型濕疹治療藥物僅僅能延緩疾病的進(jìn)展和改善癥狀，并不能根治且副作用較明顯。多年來，全球藥企投入巨額經(jīng)費(fèi)研發(fā)相關(guān)藥物，但所研發(fā)的藥物療效不明顯。究其原因主要是常用的嚙齒類動(dòng)物模型不能模擬患者的真實(shí)情況，從而導(dǎo)致有很多候選藥物在臨床試驗(yàn)中失敗。因此，構(gòu)建能模擬患者真實(shí)情況的動(dòng)物模型，一直是該領(lǐng)域發(fā)病機(jī)制研究和藥物開發(fā)急需解決的一大難題。
3、嚙齒類動(dòng)物具有價(jià)格低廉、資源廣泛、生存率高、遺傳背景清晰、基因操作成熟和飼養(yǎng)成本低等特點(diǎn)，在研究中被大量使用。但是單一濕疹模型并不能同時(shí)表現(xiàn)濕熱型濕疹全部的典型癥狀，且單一的濕疹模型不符合中醫(yī)范疇內(nèi)濕疹疾病的發(fā)病機(jī)理及病因，病理癥狀表現(xiàn)不穩(wěn)定。因此，嚙齒類濕熱型濕疹模型不能模擬人類患者的真實(shí)情況，運(yùn)用其模型驗(yàn)證的新藥臨床成果難
4、嚙齒類動(dòng)物大鼠的皮膚結(jié)構(gòu)功能與人類相似，皮膚的基本結(jié)構(gòu)包括有表皮、真皮和皮下組織構(gòu)成，能夠阻止外界物質(zhì)的侵入，防止水分過度散失，對(duì)機(jī)體起到一定的保護(hù)作用，具有感知外界刺激的能力，在受到損傷后，具有一定的自我修復(fù)功能，通過細(xì)胞增殖和分化來恢復(fù)皮膚的完整性，可以完成臨床常用的復(fù)雜皮膚模型構(gòu)造，結(jié)果互通性高。研究顯示，選擇單一濕疹模型，不能獲得同時(shí)表現(xiàn)出濕熱證和濕疹狀改變的動(dòng)物模型，因此，建立同時(shí)兼?zhèn)錆駸嶙C及濕疹樣改變的濕熱型濕疹動(dòng)物模型對(duì)新型療法的評(píng)估有重要意義；其中，濕熱證主要表現(xiàn)為精神狀態(tài)、情志改變、嗜睡扎堆現(xiàn)象、毛發(fā)光澤、肛周狀況和二便；濕疹樣主要表現(xiàn)為表皮變化、體質(zhì)量、病理狀況和臟器指數(shù)改變。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本專利技術(shù)一方面提供一種濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，該方法包括以下步驟：
2、(1)正常喂養(yǎng)：將5-6周齡的sd大鼠正常喂養(yǎng)水和常規(guī)飼料3-7d；
3、(2)梯度喂養(yǎng)：將經(jīng)過正常喂養(yǎng)的sd大鼠梯度喂養(yǎng)2-4d，其中，所述梯度喂養(yǎng)的過程在人工氣候箱中實(shí)施，且所述sd大鼠每天放入人工氣候箱的時(shí)間為8-12h，梯度喂養(yǎng)的飼料含有常規(guī)飼料和高脂飼料；
4、所述梯度喂養(yǎng)的飼料中的高脂飼料含量以及所述人工氣候箱中的溫度和濕度均逐天梯度增加，其中，所述梯度喂養(yǎng)的飼料中的高脂飼料的含量由40wt％-50wt％梯度增加至100wt％，所述人工氣候箱中的溫度和濕度分別由24-26℃和70-80％梯度增加至28-32℃和90-100％；
5、(3)高脂喂養(yǎng)：將經(jīng)過梯度喂養(yǎng)的sd大鼠采用100wt％高脂飼料高脂喂養(yǎng)12-19d，其中，所述高脂喂養(yǎng)的過程在人工氣候箱中實(shí)施，且所述sd大鼠每天放入人工氣候箱的時(shí)間為8-12h，所述人工氣候箱中的溫度和濕度分別為28-32℃和90-100％；
6、其中，高脂喂養(yǎng)期間，第2-4d采用0.1-7wt％二硝基氯苯溶液對(duì)所述sd大鼠的腹部區(qū)域致敏5-7d，然后在1-2d后采用0.1-7wt％二硝基氯苯溶液對(duì)所述sd大鼠的背部區(qū)域再致敏3-5d；
7、梯度喂養(yǎng)和高脂喂養(yǎng)的過程中，所述sd大鼠每隔一日灌服白酒，所述白酒的用量為9-11ml/kg。
8、優(yōu)選地，步驟(1)中，所述常規(guī)飼料的成分包含玉米、麩皮、面粉、豆粕、魚粉、骨粉和食鹽。
9、優(yōu)選地，步驟(1)中，所述常規(guī)飼料的用量為120-15g/kg。
10、優(yōu)選地，步驟(2)中，所述梯度喂養(yǎng)的飼料中的高脂飼料的含量增加的梯度為20-25wt％/d；和/或
11、步驟(2)中，所述人工氣候箱中的溫度增加的梯度為1-2℃/d；和/或
12、步驟(2)中，所述人工氣候箱中的濕度增加的梯度為10-15％/d。
13、優(yōu)選地，步驟(2)中，所述梯度喂養(yǎng)的飼料中的高脂飼料的含量增加的梯度為25wt％/d；和/或
14、步驟(2)中，所述人工氣候箱中的溫度增加的梯度為2℃/d；和/或
15、步驟(2)中，所述人工氣候箱中的濕度增加的梯度為25％/d。
16、優(yōu)選地，步驟(2)中，所述梯度喂養(yǎng)的飼料中的高脂飼料的初始含量為50wt％；和/或
17、步驟(2)中，所述人工氣候箱中的初始溫度為26℃；和/或
18、步驟(2)中，所述人工氣候箱中的初始濕度為75％。
19、優(yōu)選地，所述高脂飼料的成分包含豬油、蛋黃粉和糖；和/或
20、步驟(2)中，所述梯度喂養(yǎng)的飼料的用量為65-80g/kg。
21、優(yōu)選地，步驟(3)中，所述sd大鼠的腹部區(qū)域致敏過程中，所述0.1-7wt％二硝基氯苯溶液的用量為20-30μl/cm2；和/或
22、步驟(3)中，所述sd大鼠的背部區(qū)域致敏過程中，所述0.1-7wt％二硝基氯苯溶液的用量為10-15μl/cm2。
23、優(yōu)選地，步驟(3)中，所述高脂飼料的用量為65-80g/kg。
24、本專利技術(shù)第二方面提供一種上述構(gòu)建方法構(gòu)建的濕熱型濕疹動(dòng)物模型。
25、本專利技術(shù)第三方面提供上述濕熱型濕疹動(dòng)物模型在醫(yī)藥
的應(yīng)用。
26、在本專利技術(shù)中，通過將傳統(tǒng)濕疹模型與濕熱證模型相結(jié)合的方法，可以成功培養(yǎng)出濕熱型濕疹sd大鼠模型。該濕熱型濕疹大鼠模型是一種出現(xiàn)濕疹樣改變并伴有濕熱癥狀兩種病理變化的濕疹模型，同時(shí)表觀指標(biāo)和臟器組織均出現(xiàn)濕熱癥狀及濕疹樣變化。
27、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具有如下優(yōu)點(diǎn)：
28、(1)本專利技術(shù)建立的動(dòng)物模型是大鼠模型，大鼠的皮膚結(jié)構(gòu)和功能結(jié)構(gòu)與人類相似，首次將濕熱證與濕疹結(jié)合，符合中醫(yī)理論范疇的發(fā)病機(jī)制與原則，為中醫(yī)治療濕疹疾病提供模型，可以完成臨床常用的復(fù)雜皮膚模型構(gòu)造，結(jié)果互通性高，運(yùn)用其模型驗(yàn)證的新藥臨床成果易成功轉(zhuǎn)化；
29、(2)本專利技術(shù)所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型，通過梯度喂養(yǎng)的步驟使得sd大鼠更好的適應(yīng)高脂喂養(yǎng)的條件，成模率高；
30、(3)本專利技術(shù)所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型通過放入人工氣候箱中每隔一日灌服白酒，在濕熱模型的構(gòu)建中，灌服白酒具有以下作用：
31、1.損傷脾胃：中醫(yī)理論認(rèn)為，過量飲酒易損傷脾胃功能，脾胃受損可能影響水液代謝和運(yùn)化功能，導(dǎo)致水濕內(nèi)生；...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，步驟(1)中，所述常規(guī)飼料的成分包含玉米、麩皮、面粉、豆粕、魚粉、骨粉和食鹽；
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，步驟(2)中，所述梯度喂養(yǎng)的飼料中的高脂飼料的含量增加的梯度為20-25wt％/d；和/或
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，步驟(2)中，所述梯度喂養(yǎng)的飼料中的高脂飼料的含量增加的梯度為25wt％/d；和/或
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，步驟(2)中，所述梯度喂養(yǎng)的飼料中的高脂飼料的初始含量為50wt％；和/或
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，所述高脂飼料的成分包含豬油、蛋黃粉和糖；和/或
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，步驟(3)中，所述SD大鼠的腹部區(qū)域致敏過程中，所述0.1-7w
8.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，步驟(3)中，所述高脂飼料的用量為65-80g/kg。
9.權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)所述的構(gòu)建方法構(gòu)建的濕熱型濕疹動(dòng)物模型。
10.權(quán)利要求9所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型在醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，步驟(1)中，所述常規(guī)飼料的成分包含玉米、麩皮、面粉、豆粕、魚粉、骨粉和食鹽；
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，步驟(2)中，所述梯度喂養(yǎng)的飼料中的高脂飼料的含量增加的梯度為20-25wt％/d；和/或
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，步驟(2)中，所述梯度喂養(yǎng)的飼料中的高脂飼料的含量增加的梯度為25wt％/d；和/或
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的濕熱型濕疹動(dòng)物模型的建立方法，其特征在于，步驟(2)中，所述梯度喂養(yǎng)的...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陳新，劉松林，韓康寧，胡俊杰，周賢，岳瀅瀅，
申請(專利權(quán))人：湖北中醫(yī)藥大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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