【技術實現步驟摘要】
本申請涉及生物檢測，具體而言，涉及一種檢測結核分枝桿菌的slamp引物組和試劑盒。
技術介紹
1、結核分枝桿菌(mycobacteriumtuberculosis，mtb)是引起結核病的病原體，該菌可侵犯全身各器官，但以引起肺結核最多見。結核病是一種古老的疾病，全球廣泛分布，是細菌感染性疾病致死的首位原因。
2、結核分枝桿菌的經典檢測方法為分離培養，具體為將經中和集菌材料接種于固體培養基，器皿口加橡皮塞于37℃培養，每周觀察1次。但結核分枝桿菌生長緩慢，一般需2～4周長成肉眼可見的落菌。其他較為快速和準確的方法，包括基于rt-pcr的針對結核分枝桿菌dna的擴增信號的檢測，每毫升中只需含幾個細菌即可檢測到陽性，且1～2天即得出結果。
3、現有的檢測方法中的，pcr、dna探針技術等。盡管這些技術能快速檢測樣品中結核分枝桿菌的數量，但這些方法依賴于特殊而昂貴的設備，且其操作過程復雜費時(包括dna的分離、雜交、比色以及探針和引物的合成等)，只有熟練掌握了其操作技巧的技術人員才能完成測試。因此，以上方法并不適用于現場快速檢測，建立一種快速、靈敏、特異的結核分枝桿菌檢測方法迫在眉睫。
技術實現思路
1、本申請的目的在于提供一種檢測結核分枝桿菌的slamp引物組，此slamp引物組具有敏感性高、特異性強的優點。
2、本申請的另一目的在于提供一種檢測結核分枝桿菌的試劑盒，該試劑盒檢測速度快、準確性高、使用方便。
3、為解決上述技術問題，本申請采
4、一方面，本申請提供一種檢測結核分枝桿菌的slamp引物組，所述slamp引物組為引物對mtb-sf/r-sr；
5、其中，mtb-sf的核苷酸序列如seq?id?no.1所示，mtb-sr的核苷酸序列如seq?idno.2所示。
6、另一方面，本申請提供一種檢測結核分枝桿菌的試劑盒，所述試劑盒的反應體系包括上述slamp引物組。
7、基于短鏈頸環介導的核酸恒溫擴增技術(short?loop?mediated?isothermalamplification?ofnucleic?acids，slamp)是專利技術人團隊在前期開發的cda技術(中國專利授權號：zl202110473121.8)和日本lamp核酸擴增的方法的基礎上，新近改進研發的一種核酸在恒溫條件下的擴增技術(中國專利申請號：202411655233.5)。
8、團隊前期所研發的slamp方法(中國專利申請號：202411655233.5)主要利用2個不同的特異性引物識別靶基因的特定區域，在恒溫條件進行擴增反應。與常規基因檢測手段(如pcr等)相比，slamp反應在恒溫水浴箱中便可完成，儀器設備要求低，較傳統pcr和培養法操作簡單許多，不需要專業人士也可準確完成，且擴增結果可結合金屬離子指示劑羥基萘酚蘭(hnb)，通過肉眼觀察顏色變化以實現對結果的判斷，使其適用于基層醫療機構及地方檢驗檢疫部門。并且，slamp還可以大大縮短操作時間，減少樣品污染機會，適合應用于結核分枝桿菌的快速診斷。此外，slamp所用關鍵成環引物約為30bp，較lamp中成環引物40bp短，相關引物設計極為簡單，僅需做簡單重排，這將極大程度的節約設計時間和開發成本。
9、相對于現有技術，本申請的實施例至少具有如下優點或有益效果：
10、1、本申請通過對結核分枝桿菌的特異保守區域(genbank:cp136197.1)設計多個引物組，并從中篩選出擴增效率最高的引物組。該引物組由2條引物組成，包括序列內引物對(mtb-sf/mtb-sr)分別為上下游外部引物。本申請提供的引物組敏感性高、特異性強，由其制成的試劑盒能夠快速、準確的檢測到待測樣品中含有的結核分枝桿菌。
11、2、由于本申請提供的引物組具有極高的特異性，slamp擴增所需時間短，進一步縮短檢測的時間，簡化操作。
12、3、本申請提供的方法或試劑盒無需昂貴的儀器、也無需復雜的操作就可完成對結核分枝桿菌的快速準確檢測，因此，適用于專業程度不高的機場、海關、口岸、社區等地的現場快速檢測。本申請所提供的可視化試劑盒將為現場檢測提供極大便利，可實現對結核分枝桿菌快速準確的檢測。
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1.一種檢測結核分枝桿菌的SLAMP引物組，其特征在于，所述SLAMP引物組為引物對MTB-SF/R-SR；
2.一種檢測結核分枝桿菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反應體系包括權利要求1所述的SLAMP引物組。
3.根據權利要求2所述的一種檢測結核分枝桿菌的試劑盒，其特征在于，所述SLAMP引物組中，引物MTB-SF與引物MTB-SR的濃度均為1～2μM。
4.根據權利要求2所述的一種檢測結核分枝桿菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反應體系還包括Bst聚合酶、SLAMP反應緩沖液、反應溶劑以及顯色劑。
5.根據權利要求4所述的一種檢測結核分枝桿菌的試劑盒，其特征在于，所述顯色劑選自SYBR?green?I、Eva?green、羥基萘酚藍以及鉻黑T中的一種。
6.根據權利要求4所述的一種檢測結核分枝桿菌的試劑盒，其特征在于，所述SLAMP反應緩沖液包括：Tris-HCl、KCl、(NH4)2SO4、MgSO4和TritonX-100。
7.根據權利要求2所述的一種檢測結核分枝桿菌的試劑盒，其特征在于，所述
...【技術特征摘要】
1.一種檢測結核分枝桿菌的slamp引物組，其特征在于，所述slamp引物組為引物對mtb-sf/r-sr；
2.一種檢測結核分枝桿菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反應體系包括權利要求1所述的slamp引物組。
3.根據權利要求2所述的一種檢測結核分枝桿菌的試劑盒，其特征在于，所述slamp引物組中，引物mtb-sf與引物mtb-sr的濃度均為1～2μm。
4.根據權利要求2所述的一種檢測結核分枝桿菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反應體系還包括bst聚合酶、slamp反應緩沖液、反應溶劑以及顯色劑。
5.根據權利要求4所述的一種檢測結核分枝桿菌的試劑盒，其特征在于，所述顯色劑選自sybr?green?i、eva?green...
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