【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于基因工程，尤其涉及一種6030442e23rik條件性基因敲除小鼠模型的構建方法。
技術介紹
1、全球日益老齡化社會是世界各地的重大公共衛生挑戰之一。衰老是最重要的心血管危險因素，血管衰老是個體衰老過程中的一種結構異常和功能障礙，其特征是血管細胞衰老加劇、血管功能障礙和血管重塑。因此，進一步了解衰老誘導的血管功能障礙的具體分子機制可能為延緩血管衰老和降低與年齡相關的心血管疾病的發病率和死亡率提供新的治療選擇。
2、長鏈非編碼rna(long?noncoding?rna，lncrna)是一類長度大于200nt的非編碼rna，是非編碼基因組的重要組成部分。大量研究表明，lncrnas參與了多種生物學過程，包括細胞衰老、dna甲基化、組蛋白修飾、rna轉錄后調控和蛋白質翻譯調控等，并且影響了各種生理和病理過程的調節，是細胞乃至個體調控基因的重要分子。
3、我們前期利用衰老主動脈組織和年輕主動脈組織，結合lncrnaarray技術，篩選出與年齡相關的lncrna——6030442e23rik，并給它命名為“衰老相關轉錄本”(agingassociatedtranscript，aat)。此外，我們已在小鼠主動脈組織中驗證得到，6030442e23rik的表達會隨著年齡的增長而不斷增加，而6030442e23rik突變后小鼠血管功能改善，能量代謝激活，活動能力增強。
4、總的來說，人同樣具有與小鼠同源的aat序列，靶向該序列有望成為延緩血管衰老、改善血管功能的潛在治療策略。
【技術保護點】
1.6030442E23Rik條件性基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的6030442E23Rik條件性基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，步驟1中用于制備gRNA的引物序列包括gRNA1和gRNA2，gRNA1和gRNA2的核苷酸序列如下所示：
3.根據權利要求2所述的6030442E23Rik條件性基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，步驟2中同源重組載體包含2.9kb?5’同源臂、2.2kb的flox區域和2.6kb?3’同源臂。
4.根據權利要求3所述的6030442E23Rik條件性基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，同源重組載體的構建方法包括：用In-fusion?cloning方法將5’同源臂、flox區域和3’同源臂的目的片段連接到pBR-322載體上。
5.根據權利要求4所述的6030442E23Rik條件性基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，F0代小鼠鑒定方案如下：
6.根據權利要求5所述的6030442E23Rik條件性基因敲除小鼠模型的構建
7.根據權利要求6所述的6030442E23Rik條件性基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，3’同源臂的PCR引物序列如下所示：
8.根據權利要求7所述的6030442E23Rik條件性基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，小鼠為C57BL/6J小鼠。
...【技術特征摘要】
1.6030442e23rik條件性基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的6030442e23rik條件性基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，步驟1中用于制備grna的引物序列包括grna1和grna2，grna1和grna2的核苷酸序列如下所示：
3.根據權利要求2所述的6030442e23rik條件性基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，步驟2中同源重組載體包含2.9kb?5’同源臂、2.2kb的flox區域和2.6kb?3’同源臂。
4.根據權利要求3所述的6030442e23rik條件性基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，同源重組載體的構建方法包括：用in-fus...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陶軍，丘雨旻，夏文豪，
申請(專利權)人：中山大學附屬第一醫院，
類型：發明
國別省市：
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