【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于外泌體修飾，具體涉及利用nhs-peg-nhs進行外泌體表面修飾及其在靶向藥物遞送中的應用。
技術介紹
1、中樞神經系統(centralnervous?system，cns)髓鞘損傷是脫髓鞘疾病的主要病理特點，脫髓鞘疾病的危害主要表現在影響神經系統功能，包括肌肉控制、感覺、協調和平衡等方面。在中樞神經系統疾病的臨床治療中，由于血腦屏障(blood-brainbarrier，bbb)的存在，藥物很難在中樞病灶區(qū)達到有效的治療劑量，需要長期服用或高劑量給藥，容易造成機體肝腎功能損傷等副作用。因此，缺少一種靶向藥物遞送體系能夠將藥物精準遞送到病灶處從而更有效地治療并減輕藥物副作用。
2、臨床上目前常見的給藥方式包括口服、注射、鼻內、眼內、頰內等，其中口服給藥與其他方式相比更加便捷安全，尤其對于需要長期用藥的慢性病的治療具有積極意義。然而，口服遞送的藥物需要克服胃腸道的生理屏障如酸性環(huán)境，酶降解，黏液層阻礙等問題，這些因素往往導致藥物無法在病灶區(qū)達到有效劑量、穩(wěn)定性差及治療效果不佳。因此，建立此類藥物的口服遞送體系對于相關疾病的治療和藥物的臨床應用具有重要意義。
3、牛乳外泌體對胃酸具有耐受性是其作為口服藥物遞送系統的重要優(yōu)勢之一，且牛乳外泌體具有良好的bbb生物相容性、穩(wěn)定性和通透性等優(yōu)點，能夠有效地穿透體內的生物屏障，但是如何使外泌體能夠有效的攜帶藥物靶向遞送到中樞病灶區(qū)仍然是研究難點。
技術實現思路
1、為解決上述問題，本專利技術提供了nhs-p
2、為了實現上述目的，本專利技術提供如下技術方案：
3、本專利技術提供了利用nhs-peg-nhs進行外泌體表面修飾的應用。
4、本專利技術還提供了一種用于修飾含伯胺基團物質的修飾體，所述修飾體包括相連的nhs-peg-nhs與表面帶有伯胺基團的蛋白、多肽以及其他物質；其中，所述nhs-peg-nhs中的nhs-ester與所述表面帶有伯胺基團的蛋白、多肽以及其他物質中的伯胺基團通過共價鍵連接。
5、進一步的，所述含伯胺基團物質包括外泌體。
6、本專利技術也提供了一種外泌體修飾的方法，該方法包括：將nhs-peg-nhs粉末溶于磷酸鹽緩沖鹽溶液(phosphate?buffered?saline，pbs)中，充分渦旋，得到nhs-peg-nhs溶液；將外泌體與nhs-peg-nhs溶液進行第一混合孵育，得到外泌體連接體；將所述外泌體連接體與表面帶有伯胺基團的蛋白、多肽以及其他物質進行第二混合孵育，得到修飾后的外泌體。
7、進一步的，所述表面帶有伯胺基團的蛋白、多肽以及其他物質、nhs-peg-nhs和外泌體的用量配比為150-200ng：120-140μg：20-40μg；所述nhs-peg-nhs濃度為6mm，peg的分子量為2000。
8、進一步的，所述第一混合孵育、第二混合孵育的ph值均為7.2-8.0；所述第一混合孵育的溫度為37℃，時間為5h；第二混合孵育的溫度為4℃，時間為12h。
9、進一步的，該方法還包括：得到修飾后的外泌體后，采用超速離心對所述修飾后的外泌體進行純化處理；所述超速離心的離心力為100,000×g，所述超速離心的時間為60min。
10、本專利技術又提供了如上述的外泌體修飾的方法所制得的修飾后的外泌體。
11、本專利技術另外提供了如上述的修飾后的外泌體作為靶向中樞脫髓鞘病灶藥物的應用。
12、進一步的，利用nhs-peg-nhs作為鏈接物質，將目的蛋白連接于牛乳外泌體膜上，得到具有靶向治療作用的牛乳外泌體；所述具有靶向治療作用的牛乳外泌體以口服遞送方式服用。
13、與現有技術相比，本專利技術至少具有如下有益效果：
14、本專利技術提供了利用nhs-peg-nhs進行牛乳外泌體表面修飾及其在靶向藥物口服遞送中的應用。在本專利技術中選用nhs-peg-nhs作為連接外泌體和含有伯胺的蛋白、多肽以及其他物質。n-羥基琥珀酰亞胺酯(nhs-ester，nhs酯)，可與伯胺反應形成共價鍵且具有與細胞膜或游離蛋白質、多肽等結構中伯胺基團(伯胺，-nh2)相結合的能力，利用nhs-peg-nhs作為連接物質，可以將目的蛋白等連接于外泌體膜上，并由peg延長半衰期。本專利技術利用nhs-peg-nhs將表面帶有伯胺基團的蛋白或多肽修飾在牛乳外泌體表面，裝載藥物后即可實現向高表達該蛋白或多肽受體組織/細胞的藥物靶向口服遞送，不僅操作步驟簡便易于實現，而且進一步提高反應效率，普適性也得到改善。牛乳外泌體具有良好的穩(wěn)定性，對胃酸具有耐受性是其作為口服藥物遞送系統的重要優(yōu)勢之一；peg起到延長半衰期的作用。
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1.利用NHS-PEG-NHS進行外泌體表面修飾的應用。
2.一種用于修飾含伯胺基團物質的修飾體，其特征在于，所述修飾體包括相連的NHS-PEG-NHS與表面帶有伯胺基團的蛋白、多肽以及其他物質；
3.根據權利要求1所述的用于修飾含伯胺基團物質的修飾體，其特征在于，所述含伯胺基團物質包括外泌體。
4.一種外泌體修飾的方法，其特征在于，該方法包括：
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述表面帶有伯胺基團的蛋白、多肽以及其他物質、NHS-PEG-NHS和外泌體的用量配比為150-200ng：120-140μg：20-40μg；所述NHS-PEG-NHS濃度為6mM，PEG的分子量為2000。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一混合孵育、第二混合孵育的pH值均為7.2-8.0；所述第一混合孵育的溫度為37℃，時間為5h；第二混合孵育的溫度為4℃，時間為12h。
7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，該方法還包括：得到修飾后的外泌體后，采用超速離心對所述修飾后的外泌體進行純化處理；所述超速
8.如權利要求4至8中任一項所述的外泌體修飾的方法所制得的修飾后的外泌體。
9.如權利要求8所述的修飾后的外泌體作為靶向中樞脫髓鞘病灶藥物的應用。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，利用NHS-PEG-NHS作為鏈接物質，將目的蛋白連接于牛乳外泌體膜上，得到具有靶向治療作用的牛乳外泌體；所述具有靶向治療作用的牛乳外泌體以口服遞送方式服用。
...【技術特征摘要】
1.利用nhs-peg-nhs進行外泌體表面修飾的應用。
2.一種用于修飾含伯胺基團物質的修飾體，其特征在于，所述修飾體包括相連的nhs-peg-nhs與表面帶有伯胺基團的蛋白、多肽以及其他物質；
3.根據權利要求1所述的用于修飾含伯胺基團物質的修飾體，其特征在于，所述含伯胺基團物質包括外泌體。
4.一種外泌體修飾的方法，其特征在于，該方法包括：
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述表面帶有伯胺基團的蛋白、多肽以及其他物質、nhs-peg-nhs和外泌體的用量配比為150-200ng：120-140μg：20-40μg；所述nhs-peg-nhs濃度為6mm，peg的分子量為2000。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一混合孵育、...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：張媛，張琳潔，李星，劉洋，馬改鑫，李玥波，
申請(專利權)人：陜西師范大學，
類型：發(fā)明
國別省市：
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