本發明專利技術提供了一種Myc標簽抗體磁珠的制備方法，屬于生物醫學。本發明專利技術先將磁珠洗滌后加入磁珠活化緩沖液中活化20?60min，然后將活化的磁珠與超濾后的Myc標簽抗體偶聯，最后磁分離磁珠加入封閉液4℃封閉2h，清洗后加入保存液，本發明專利技術的制備方法不僅去除了疊氮化鈉，防止伯胺基團對偶聯的干擾，制得的Myc標簽抗體磁珠還具有較好的特異性和富集能力，以及穩定性。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫學領域，具體涉及一種myc標簽抗體磁珠的制備方法和應用。
技術介紹
1、myc標簽是一個序列為glu-gln-lys-leu-ile-ser-glu-glu-asp-leu的小標簽，這11個氨基酸作為抗原表位表達在不同的蛋白質框架中仍可識別相應抗體。而羧基磁珠具有超順磁性、快速磁響應、單分散性和亞微米尺度粒徑等特點，能在特殊的化學試劑（如edc）的作用下同抗體結合，憑借磁珠獨特的三維表面和較高的比表面積，可以保證磁微粒表面固定足夠的抗體并且充分保持抗體活性。
2、myc標簽抗體偶聯磁珠是一種重要的工具，能通過特異性結合myc標簽融合蛋白，實現目標蛋白的快速純化和分離，廣泛應用于免疫學檢測、細胞成像、親和純化以及蛋白質工程等領域。然而，現有的方法制備的myc標簽抗體偶聯磁珠無法去除抗體緩沖液中伯胺因子的干擾，導致偶聯后的抗體磁珠效價低，且伯胺因子本身也會同羧基磁珠偶聯，競爭抗體，進一步導致抗體磁珠效價低，以及無法快速準確的測量抗體磁珠的偶聯效率，抗體表面同樣存在羧基基團，無法區分羧基基團是來自磁珠還是來自抗體，導致結果的假陽性；并且沒有準確的偶聯時間，由于抗體保存液和偶聯緩沖液的ph不一致，因此長時間的偶聯可能會導致抗體處于非合適的ph中，影響抗體的使用壽命，導致抗體磁珠穩定性較差；過量的抗體偶聯還會導致成本的上升，過少的抗體偶聯將導致抗體磁珠的效價低。
3、因此，如何能夠簡便準確的檢測出磁珠抗體偶聯的效率，并排除其它伯胺因子的干擾，對提高myc標簽磁珠抗體的效價至關重要。
/>技術實現思路
1、針對現有技術的缺陷，本專利技術排除了伯胺因子的干擾，設計了一種myc標簽抗體磁珠的制備方法，制得的myc標簽抗體磁珠具有較好的特異性、富集能力以及穩定性。
2、為了實現上述目的，本專利技術解決技術問題采用如下技術方案：
3、本專利技術首先在抗體偶聯磁珠之前，使用超濾管過濾抗體，并使用磁珠反應液置換抗體緩沖液，去除myc標簽抗體緩沖液中的伯胺因子（如疊氮化鈉）；然后將偶聯抗體后不同時間段的上清液取出，滴加到激活后的pvdf膜上，再進行封閉，由于抗體具有輕重鏈，因此直接孵育相應的二抗，再進行顯影，觀察偶聯后上清的抗體殘余量，確定最佳的偶聯時間和合適的抗體偶聯量，以提高myc標簽抗體偶聯磁珠的檢測效率。
4、一方面，本專利技術提供了一種myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：
5、s1.將磁珠洗滌后加入磁珠活化緩沖液中活化20-60?min；
6、s2.將活化的磁珠與超濾后的myc標簽抗體偶聯；
7、s3.磁分離磁珠加入封閉液4℃封閉2h，清洗后加入保存液。
8、在其中一些實施例中，所述磁珠為羧基磁珠。
9、在其中一些實施例中，在步驟s1中，所述洗滌液為ph為5-7的mes緩沖液。
10、在其中一些實施例中，在步驟s1中，所述磁珠活化緩沖液為edc和sulf-nhs，濃度為10-100mg/ml；所述edc、sulf-nhs和磁珠的質量比為1:1:2。
11、在其中一些實施例中，在步驟s2中，先將myc標簽抗體經超濾管過濾，再用mes緩沖液重懸后與活化的磁珠于4℃偶聯1-5h；所述myc標簽抗體與磁珠的質量比為1：（100-200）。
12、在其中一些實施例中，所述超濾管的截留分子量為3-200kda。
13、在其中一些實施例中，所述封閉液包括ph為7.2-7.5且0.05-2m?tris緩沖液、100-200mm?nacl、0.2-0.8％（v/v）bsa、1-2%（v/v）peg?6000、0.1-0.3%（v/v）proclin?300。
14、在其中一些實施例中，所述保存液為含0.01-0.8%（v/v）bsa、0.02-0.07%（v/v）tween-20、0.02-0.07%（v/v）proclin300的pbs溶液，ph為7.4。
15、一方面，本專利技術還提供了所述的制備方法制得的myc標簽抗體磁珠。
16、另一方面，本專利技術提供了所述的制備方法制得的myc標簽抗體磁珠在免疫沉淀或蛋白純化中的應用。
17、與現有技術相比，本專利技術具有如下的有益效果：
18、本專利技術制備了一種myc標簽抗體磁珠，在抗體偶聯前先進行超濾，不僅去除疊氮化鈉，防止了伯胺基團對偶聯的干擾，制得的myc標簽抗體磁珠還具有較好的特異性和富集能力，以及穩定性，有利于后續獲得更準確的實驗結果，也為磁珠市場提供了新的增長機會。
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【技術保護點】
1.一種Myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的Myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，所述磁珠為羧基磁珠。
3.根據權利要求1所述的Myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，在步驟S1中，所述洗滌液為pH為5-7的MES緩沖液。
4.根據權利要求1所述的Myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，在步驟S1中，所述磁珠活化緩沖液為EDC和Sulf-NHS，濃度為10-100mg/mL；所述EDC、Sulf-NHS和磁珠的質量比為1:1:2。
5.根據權利要求1所述的Myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，在步驟S2中，先將Myc標簽抗體經超濾管過濾，再用MES緩沖液重懸后與活化的磁珠于4℃偶聯1-5h；所述Myc標簽抗體與磁珠的質量比為1：（100-200）。
6.根據權利要求5所述的Myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，所述超濾管的截留分子量為3-200kDa。
7.根據權利要求1所述的Myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，所述封閉液包括pH為7.2-7.5且0.05-2M?Tris緩沖液、100-200mM?NaCl、0.2-0.8％（v/v）BSA、1-2%（v/v）PEG6000、0.1-0.3%（v/v）ProClin?300。
8.根據權利要求1所述的Myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，所述保存液為含0.01-0.8%（v/v）BSA、0.02-0.07%（v/v）?Tween-20、0.02-0.07%（v/v）Proclin300的PBS溶液，pH為7.4。
9.一種根據權利要求1-8任一項所述的制備方法制得的Myc標簽抗體磁珠。
10.一種根據權利要求1-8任一項所述的制備方法制得的Myc標簽抗體磁珠在免疫沉淀或蛋白純化中的應用。
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【技術特征摘要】
1.一種myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，所述磁珠為羧基磁珠。
3.根據權利要求1所述的myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，在步驟s1中，所述洗滌液為ph為5-7的mes緩沖液。
4.根據權利要求1所述的myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，在步驟s1中，所述磁珠活化緩沖液為edc和sulf-nhs，濃度為10-100mg/ml；所述edc、sulf-nhs和磁珠的質量比為1:1:2。
5.根據權利要求1所述的myc標簽抗體磁珠的制備方法，其特征在于，在步驟s2中，先將myc標簽抗體經超濾管過濾，再用mes緩沖液重懸后與活化的磁珠于4℃偶聯1-5h；所述myc標簽抗體與磁珠的質量比為1：（100-200）。
6.根據權利要求5所述的myc標簽抗體...
【專利技術屬性】
技術研發人員：廖彬杰，譚杰峰，
申請(專利權)人：廣州奕昕生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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