【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)屬于生物藥物制劑，尤其涉及一種噬菌體的凍干保護(hù)劑、噬菌體凍干粉劑及制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、在畜禽養(yǎng)殖中，常見(jiàn)的致病性病原菌包括大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、葡萄球菌、巴氏桿菌以及產(chǎn)氣莢膜梭菌等。水產(chǎn)養(yǎng)殖中主要的致病性病原菌包括副溶血弧菌、哈維弧菌、溶藻弧菌、唯氏氣單胞菌和遲緩愛(ài)德華氏菌等。
2、噬菌體能感染并裂解細(xì)菌，因此利用烈性噬菌體生物控制細(xì)菌性疾病已成為一種安全有效的方法。目前，在動(dòng)物臨床上使用的噬菌體制劑有液體制劑和噬菌體粉劑。其中，噬菌體粉劑制備工藝有凍干工藝和噴霧干燥工藝。因噬菌體特殊的生物學(xué)特性，在60℃以上的環(huán)境中會(huì)很快失活，故噴霧干燥工藝會(huì)極大的破壞噬菌體的生物活性，不適合規(guī)模化生產(chǎn)，因而，一般用凍干工藝制備噬菌體凍干粉劑。但是，目前噬菌體凍干粉劑的噬菌體效價(jià)還有待進(jìn)一步提升。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專(zhuān)利技術(shù)的目的在于提供一種噬菌體的凍干保護(hù)劑、噬菌體凍干粉劑及制備方法和應(yīng)用，采用本專(zhuān)利技術(shù)的凍干保護(hù)劑制備的噬菌體凍干粉劑的噬菌體效價(jià)高。
2、本專(zhuān)利技術(shù)提供了一種噬菌體的凍干保護(hù)劑，以水為溶劑，包括以下質(zhì)量濃度的組分：冷凍保護(hù)劑5％～10％、抗氧化劑0.5％～1.5％、酸堿調(diào)節(jié)劑0.5％～1.5％和填充劑5％～10％。
3、優(yōu)選的，所述冷凍保護(hù)劑包括海藻糖、甘油和蔗糖中的至少一種；所述抗氧化劑包括硫代硫酸鈉和/或維生素e；所述酸堿調(diào)節(jié)劑包括山梨醇和/或磷酸；所述填充劑包括甘露醇、乳糖和明膠中的至少一種。
4、優(yōu)
5、本專(zhuān)利技術(shù)還提供了一種噬菌體凍干粉劑，包括噬菌體和上述方案所述的凍干保護(hù)劑。
6、優(yōu)選的，所述噬菌體凍干粉劑的噬菌體效價(jià)≥1010pfu/ml。
7、優(yōu)選的，所述噬菌體包括家禽類(lèi)病原菌噬菌體、家畜類(lèi)病原菌噬菌體或水產(chǎn)類(lèi)病原菌噬菌體。
8、優(yōu)選的，所述噬菌體包括禽大腸桿菌噬菌體、沙門(mén)氏菌噬菌體、溶藻弧菌噬菌體、副溶血弧菌噬菌體、創(chuàng)傷弧菌噬菌體、哈維氏弧菌噬菌體、歐文氏弧菌噬菌體、巴氏桿菌噬菌體、支氣管敗血波氏桿菌噬菌體、豬大腸桿菌噬菌體和鴨疫里默氏桿菌噬菌體中的至少一種。
9、本專(zhuān)利技術(shù)還提供了上述方案所述噬菌體凍干粉劑的制備方法，包括以下步驟：
10、將噬菌體溶液與上述方案所述凍干保護(hù)劑混合，得到混合溶液；對(duì)所述混合溶液進(jìn)行凍干，得到凍干混合物；對(duì)所述凍干混合物進(jìn)行粉碎，得到噬菌體凍干粉劑。
11、優(yōu)選的，所述凍干的程序包括：-30～-40℃，8～10h；5～10℃，15～18h；18～20℃，2～4h；25～30℃，8～10h；所述凍干的真空度為0.04～0.10mbar。
12、本專(zhuān)利技術(shù)還提供了上述方案所述的凍干保護(hù)劑、所述噬菌體凍干粉劑或者所述的制備方法制備得到的噬菌體凍干粉劑在制備畜禽藥物、水產(chǎn)藥物或飼料添加劑中的應(yīng)用。
13、本專(zhuān)利技術(shù)提供了一種噬菌體的凍干保護(hù)劑，以水為溶劑，包括以下質(zhì)量濃度的組分：冷凍保護(hù)劑5％～10％、抗氧化劑0.5％～1.5％、酸堿調(diào)節(jié)劑0.5％～1.5％和填充劑5％～10％。本專(zhuān)利技術(shù)的凍干保護(hù)劑經(jīng)過(guò)合理復(fù)配，其中冷凍保護(hù)劑、抗氧化劑、酸堿調(diào)節(jié)劑和填充劑通過(guò)協(xié)同作用，對(duì)噬菌體具有良好的保護(hù)效果，能夠有效的降低噬菌體在凍干過(guò)程中的失活率或死亡率，從而提高噬菌體的生物活性和效價(jià)。并且，本專(zhuān)利技術(shù)的凍干保護(hù)劑保護(hù)效果作用時(shí)間較長(zhǎng)，能夠提高噬菌體凍干粉劑的穩(wěn)定性，提高了噬菌體凍干粉劑的運(yùn)輸和儲(chǔ)存的便利性，有效解決噬菌體凍干粉劑實(shí)際應(yīng)用中運(yùn)輸和長(zhǎng)期存儲(chǔ)困難的問(wèn)題。
14、生物保藏說(shuō)明
15、沙門(mén)氏菌噬菌體sd-se-001，于2021年9月10日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，保藏編號(hào)為：cgmcc?no.23090。
16、副溶血弧菌噬菌體(vibrioparahaemolyticus?phage)sd-vp1，于2023年1月6日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為：中國(guó).武漢.武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為：cctcc?no：m?2023042。
17、歐文氏弧菌噬菌體(vibrio?owensiiphage)sd-vp2，于2023年1月6日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為：中國(guó).武漢.武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為：cctcc?no：m2023043。
18、哈維氏弧菌噬菌體(vibrio?harveyiphage)sd-vp3，于2023年1月6日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為：中國(guó).武漢.武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為：cctcc?no：m2023044。
19、創(chuàng)傷弧菌噬菌體(vibrio?vulnificus?phage)sd-vp4，于2023年1月6日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為：中國(guó).武漢.武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為：cctcc?no：m2023045。
20、巴氏桿菌噬菌體(pasteurella?suis?phage)sd-pm1，于2023年12月18日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為：中國(guó).武漢.武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為：cctcc?no：m20232589。
21、支氣管敗血波氏桿菌噬菌體(brodetella?bronchiseptica?phage)sd-bb1，于2023年12月19日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為：中國(guó).武漢.武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為：cctcc?no：m?20232599。
22、鴨疫里默氏桿菌噬菌體(riemerella?anatipestiferphage)sd-ra1，于2021年8月23日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為：中國(guó).武漢.武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為：cctcc?no：m?20211061。
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1.一種噬菌體的凍干保護(hù)劑，其特征在于，以水為溶劑，包括以下質(zhì)量濃度的組分：冷凍保護(hù)劑5％～10％、抗氧化劑0.5％～1.5％、酸堿調(diào)節(jié)劑0.5％～1.5％和填充劑5％～10％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凍干保護(hù)劑，其特征在于，所述冷凍保護(hù)劑包括海藻糖、甘油和蔗糖中的至少一種；所述抗氧化劑包括硫代硫酸鈉和/或維生素E；所述酸堿調(diào)節(jié)劑包括山梨醇和/或磷酸；所述填充劑包括甘露醇、乳糖和明膠中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的凍干保護(hù)劑，其特征在于，所述凍干保護(hù)劑包括以下質(zhì)量濃度的組分：冷凍保護(hù)劑10％、抗氧化劑1％、酸堿調(diào)節(jié)劑1.5％和填充劑10％。
4.一種噬菌體凍干粉劑，其特征在于，包括噬菌體和權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述的凍干保護(hù)劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的噬菌體凍干粉劑，其特征在于，所述噬菌體凍干粉劑的噬菌體效價(jià)≥1010PFU/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的噬菌體凍干粉劑，其特征在于，所述噬菌體包括家禽類(lèi)病原菌噬菌體、家畜類(lèi)病原菌噬菌體或水產(chǎn)類(lèi)病原菌噬菌體。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的噬菌體凍干
8.權(quán)利要求4～7任意一項(xiàng)所述噬菌體凍干粉劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述凍干的程序包括：-30～-40℃，8～10h；5～10℃，15～18h；18～20℃，2～4h；25～30℃，8～10h；所述凍干的真空度為0.04～0.10mbar。
10.權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述的凍干保護(hù)劑、權(quán)利要求4～7任意一項(xiàng)所述噬菌體凍干粉劑或者權(quán)利要求8或9所述的制備方法制備得到的噬菌體凍干粉劑在制備畜禽藥物、水產(chǎn)藥物或飼料添加劑中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種噬菌體的凍干保護(hù)劑，其特征在于，以水為溶劑，包括以下質(zhì)量濃度的組分：冷凍保護(hù)劑5％～10％、抗氧化劑0.5％～1.5％、酸堿調(diào)節(jié)劑0.5％～1.5％和填充劑5％～10％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凍干保護(hù)劑，其特征在于，所述冷凍保護(hù)劑包括海藻糖、甘油和蔗糖中的至少一種；所述抗氧化劑包括硫代硫酸鈉和/或維生素e；所述酸堿調(diào)節(jié)劑包括山梨醇和/或磷酸；所述填充劑包括甘露醇、乳糖和明膠中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的凍干保護(hù)劑，其特征在于，所述凍干保護(hù)劑包括以下質(zhì)量濃度的組分：冷凍保護(hù)劑10％、抗氧化劑1％、酸堿調(diào)節(jié)劑1.5％和填充劑10％。
4.一種噬菌體凍干粉劑，其特征在于，包括噬菌體和權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述的凍干保護(hù)劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的噬菌體凍干粉劑，其特征在于，所述噬菌體凍干粉劑的噬菌體效價(jià)≥1010pfu/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的噬菌體凍干粉劑，其特征在于，所述噬菌體包括...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：薛希娟，張恒，劉美含，孫曉林，宋慶慶，李朝陽(yáng)，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：山東信得科技股份有限公司，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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