【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于植物基因工程，涉及白菜根腫病感病相關基因brsweet14a、構建方法、應用，應用涉及白菜brsweet14a及其編碼蛋白在植物抗病過程中的應用。
技術介紹
1、白菜(brassica?rapa?l.syn.b.campestrisl.)是十字花科(cruciferae)蕓薹屬(brassica)植物，占全球蔬菜產量的15％。目前，由蕓薹根腫菌(plasmodiophorabrassicae?woronin)侵染造成的根腫病對世界十字花科作物的生產構成嚴重威脅。根腫病傳播速度快范圍廣，傳播方式多樣，包括種子、土壤、農具、灌溉水、動物糞便以及飼料等方式。全球已有多個國家報道了根腫病的發生，導致產量損失高達10％-15％，該病在20世紀10年代首次報道，隨后在中國各地傳播。土壤中的根腫菌孢子通過侵染植物根毛到達植物內部，然后次生游動孢子對植物皮層進行二次侵染導致腫根的形成，受根腫菌侵染的植株由于其根組織的膨大，影響了根系對礦質元素和水分的吸收和運輸，因此，植株地上部會表現出矮化和枯萎癥狀，葉片發紅、褪綠、壞死和脫落，植物提早開花，嚴重影響蕓薹屬作物的產量和質量；由于根腫菌頑強的生命力和易傳播性，目前通過物理、化學、生物方法來控制根腫病的效果有限且不能長期有效，因此通過尋找根腫病的抗感基因來開發具有廣泛和持久抗性的品種對根腫病的防治至關重要。
2、糖是植物生長的主要能量來源，并參與到多種代謝途中。研究表明，糖轉運蛋白(sweet)基因家族在植物生長、發育、繁殖和抗病性方面發揮著關鍵作用，例如，在擬南芥中，at
3、病原體誘導的侵染通過激活特定的糖轉運蛋白或sweet基因來利用寄主植物中的糖資源。
技術實現思路
1、由前述可知，sweets蛋白在植物抗病、抗逆研究中具有巨大的潛在利用價值，可以通過分子生物學手段進行研究培育出抗病抗逆的新品種。
2、有鑒于此，本專利技術的目的在于克服現有技術的缺陷以及前述提及的價值，提供白菜根腫病感病相關基因brsweet14a及其應用。
3、(一)相關基因
4、白菜根腫病感病相關基因brsweet14a，所述相關基因為候選基因，所述相關基因brsweet14a的核苷酸序列包括：
5、(1)所述核苷酸序列如seq?id?no.1所示；或
6、(2)seq?id?no.1所示的核苷酸序列經取代、缺失和/或增加一個或幾個核苷酸；或
7、(3)在嚴格條件下與(1)限定的dna序列雜交的核苷酸序列。
8、(二)構建方法
9、第一種白菜brsweet14a基因沉默載體的構建方法，包括如下步驟：
10、預測所述白菜brsweet14a基因的沉默序列，沉默序列如seq?id?no.2所示；
11、雙酶切ptrv2載體，得到線性化的ptrv2載體；
12、將沉默序列擴增，將擴增后的沉默序列和線性化的ptrv2載體同源重組連接，將連接產物轉化，得到白菜brsweet14a基因沉默載體。
13、優選的，沉默序列擴增的特異引物如seq?id?no.3、seq?id?no.4所示。
14、第二種白菜brsweet14a基因過表達載體的構建方法，包括如下步驟：
15、雙酶切pfgc1008-egfp載體，得到線性化的pfgc1008-egfp載體；
16、設計特異引物將所述白菜brsweet14a基因的核苷酸序列擴增，將擴增后的序列和線性化的pfgc1008-egfp載體同源重組連接，將連接產物轉化，得
17、到白菜brsweet14a基因過表達載體；
18、其中，特異引物如seq?id?no.12、seq?id?no.13所示。
19、第三種白菜brsweet14a基因亞細胞定位載體的構建方法，包括如下步驟：
20、雙酶切pfgc5941-egfp載體，得到線性化的pfgc5941-egfp載體；
21、設計特異引物將所述白菜brsweet14a基因的核苷酸序列擴增，將擴增后的序列和線性化的pfgc5941-egfp載體同源重組連接，將連接產物轉化，得到白菜brsweet14a基因亞細胞定位載體；
22、其中，特異引物如seq?id?no.14、seq?id?no.15所示。
23、第四種適用于白菜brsweet14a基因的突變體材料構建方法，包括如下步驟：
24、dna快速提取法提取擬南芥dna，利用該dna和三引物法pcr獲得適用于白菜brsweet14a基因的突變體材料，其中，三引物法的特異引物如seqid?no.9、seq?id?no.10、seq?id?no.11所示；白菜brsweet14a基因為所述的白菜brsweet14a基因。
25、(三)相關應用
26、包含所述的白菜根腫病感病相關基因brsweet14a的生物材料，所述生物材料包括表達載體、表達盒，宿主細胞、工程菌中的至少一種。
27、一種所述的白菜根腫病感病相關基因brsweet14a或所述的生物材料在篩選抗病植物和/或調控植物抗病功能中的應用。
28、一種所述的白菜根腫病感病相關基因brsweet14a或所述的生物材料在制備轉基因植物中的應用。
29、一種所述的白菜根腫病感病相關基因brsweet14a或所述的生物材料在植物種質資源改良中的應用。
30、(四)優點
31、與現有技術相比，本專利技術的有益效果或優點包括如下：
32、本專利技術提供的白菜brsweet14a序列如seq?id?no.1所示。
33、本申請還提供了白菜brsweet14a基因沉默載體、過表達載體、亞細胞定位載體的構建方法，以及適用于白菜brsweet14a基因的突變體材料構建方法，構建的方法特異性高，更適合本申請提供的白菜brsweet14a序列所應用的生物材料。
34、本專利技術通過農桿菌介導法將該基因導入擬南芥中，獲得白菜brsweet14a異源表達的轉基因擬南芥株系，結果發現，在抗病性分析實驗中，brsweet14a擬南芥同源基因atsweet14的t-dna插入突變體材料比野生哥倫比亞型擬南芥更加抗病，brsweet14a的過量表達可以促進根腫菌侵染擬南芥根部引起的根部腫大。這表明了白菜brsweet14a與十字花科根腫病關系密切，將該基因應用于白菜或其他十字花科蔬菜育種，具有良本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.白菜根腫病感病相關基因BrSWEET14a，所述相關基因為候選基因，其特征在于，所述相關基因BrSWEET14a的核苷酸序列包括：
2.白菜BrSWEET14a基因沉默載體的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
3.根據權利要求2所述的白菜BrSWEET14a基因沉默載體的構建方法，其特征在于，沉默序列擴增的特異引物如SEQ?ID?No.3、SEQ?ID?No.4所示。
4.白菜BrSWEET14a基因過表達載體的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
5.白菜BrSWEET14a基因亞細胞定位載體的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
6.適用于白菜BrSWEET14a基因的突變體材料構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
7.包含權利要求1所述的白菜根腫病感病相關基因BrSWEET14a的生物材料，所述生物材料包括表達載體、表達盒，宿主細胞、工程菌中的至少一種。
8.一種根據權利要求1所述的白菜根腫病感病相關基因BrSWEET14a或權利要求7所述的生物材料在篩選抗病植物和/或調控植物抗病功能
9.一種根據權利要求1所述的白菜根腫病感病相關基因BrSWEET14a或權利要求7所述的生物材料在制備轉基因植物中的應用。
10.一種根據權利要求1所述的白菜根腫病感病相關基因BrSWEET14a或根據權利要求7所述的生物材料在植物種質資源改良中的應用。
...【技術特征摘要】
1.白菜根腫病感病相關基因brsweet14a，所述相關基因為候選基因，其特征在于，所述相關基因brsweet14a的核苷酸序列包括：
2.白菜brsweet14a基因沉默載體的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
3.根據權利要求2所述的白菜brsweet14a基因沉默載體的構建方法，其特征在于，沉默序列擴增的特異引物如seq?id?no.3、seq?id?no.4所示。
4.白菜brsweet14a基因過表達載體的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
5.白菜brsweet14a基因亞細胞定位載體的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
6.適用于白菜brsweet14a基...
【專利技術屬性】
技術研發人員：余小林，余紅瑞，胡森，宋建偉，盧鋼，
申請(專利權)人：浙江大學，
類型：發明
國別省市：
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