【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及中藥成分檢測，具體涉及一種牡蠣配方顆粒指紋圖譜建立及多成分含量測定方法。
技術介紹
1、中藥牡蠣始載于《神農本草經》，來源于牡蠣科動物長牡蠣(ostrea?gigasthunberg)、大連灣牡蠣(ostrea?talienwhanensis?crosse)或近江牡蠣(ostrearivularis?gould)的貝殼，為兼具動、礦物藥屬性的特殊品種，具有重鎮安神，潛陽補陰，軟堅散結的功效，臨床上主要用于治療驚悸失眠，眩暈耳鳴，瘰疬痰核，癥瘕痞塊等癥狀。現代研究表明牡蠣主要成分為caco3，此外還包含鐵(fe)、鎂(mg)等多種無機元素以及賴氨酸、甘氨酸在內的多種氨基酸等成分。其中氨基酸是組成蛋白質的基本單位，為生物代謝過程中的一類重要物質，具有抗氧化、抗衰老、提高免疫力、增強機體代謝、提供營養等作用，且多為中藥發揮藥效的物質基礎。
2、中藥配方顆粒以水為提取溶劑，以中藥飲片為原材料，采用現代化工藝及技術對飲片中的有效成分進行提取、分離、濃縮、干燥、制粒及包裝等操作制備而成，既保留了湯劑中的主要藥效成分，同時彌補了傳統湯劑煎煮不易攜帶、煎煮困難等問題。因此，為進一步完善牡蠣配方顆粒質量控制研究，本專利技術從有機成分氨基酸的角度建立牡蠣配方顆粒hplc指紋圖譜以及多成分氨基酸測定方法，以期推動該配方顆粒的整體質量控制水平的提升，并為其他貝殼礦物藥配方顆粒的研究開展提供科學參考。
技術實現思路
1、為了克服上述技術問題，本專利技術公開了一種牡蠣配方顆粒指紋圖譜
2、本專利技術為實現上述目的所采用的技術方案是：
3、一種牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，所述建立方法包括以下步驟：
4、步驟1，定性對照品母液的配制；
5、步驟2，牡蠣配方顆粒供試品溶液的制備；
6、步驟3，采用柱前衍生化-高效液相色譜法進樣測定，以相同色譜條件，建立定性對照品母液的指紋圖譜和供試品溶液的指紋圖譜；
7、步驟4，通過比對和分析所述定性對照品母液的指紋圖譜和供試品溶液的指紋圖譜，獲得牡蠣配方顆粒指紋圖譜。
8、上述的牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其中在所述步驟3中，所述色譜條件為：
9、色譜柱：采用shim-pack?scepter?c18-120色譜柱，4.6×150mm，3μm；
10、流動相：以體積比為4：1的乙腈水溶液為流動相a，以體積比為7：93的乙腈-0.1mol/l醋酸鈉溶液為流動相b，其中醋酸鈉溶液用醋酸調節ph值至6.5；
11、梯度洗脫程序：0～15min，100％～98％?b；15～22min，98％～90％?b；22～28min，90％～82％?b；28～40min，82％～75％?b；40～45min，75％～62％b；45～50min，62％～0％b；50～55min，0％～100％?b；
12、流速：0.8ml/min；
13、柱溫：25℃；
14、檢測波長：254nm；
15、進樣量為5μl。
16、上述的牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其中所述步驟1中，定性對照品母液的配制方法為：精密稱定谷氨酸3.90mg、絲氨酸5.17mg、甘氨酸5.60mg、組氨酸3.59mg、蘇氨酸3.69mg、精氨酸4.16mg、丙氨酸5.07mg、脯氨酸4.79mg、酪氨酸5.10mg、纈氨酸6.04mg、亮氨酸4.53mg、異亮氨酸6.22mg、苯丙氨酸4.57mg、賴氨酸4.77mg置25ml量瓶，各加0.1mol/l鹽酸溶液溶解并定容至刻度，搖勻，制成每1ml含谷氨酸152.88μg、絲氨酸202.664μg、甘氨酸219.520μg、組氨酸140.728μg、丙氨酸198.744μg、脯氨酸187.768μg、蘇氨酸144.648μg、精氨酸164.248μg、酪氨酸199.920μg、纈氨酸236.768μg、亮氨酸177.576μg、異亮氨酸243.824μg、苯丙氨酸190.904μg、賴氨酸186.984μg的所述定性對照品母液。
17、上述的牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其中在所述步驟2中，牡蠣配方顆粒供試品溶液的制備方法為：取牡蠣配方顆粒樣品適量，研細，稱取約1.0g，精密稱定，置50ml離心管中，加稀鹽酸溶液10ml充分溶解，以每分鐘12000轉的轉速離心15min，棄去上清層，取沉淀層置于25ml具塞水解管中，精密加入9mol/l鹽酸10ml，密塞，于150℃水解3h，取出，放冷，過濾，并用少量水多次清洗水解管及濾紙，合并濾液，蒸干，殘渣加0.1mol/l鹽酸溶解，轉移至10ml量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，即得溶液a；
18、精密量取所述溶液a?5ml，置于10ml量瓶中，加0.1mol/l異硫氰酸苯酯的乙腈溶液1.5ml、1mol/l三乙胺的乙腈溶液1ml，搖勻，室溫放置3h后，加50％乙腈至刻度，取5ml，加正己烷10ml，振搖，放置10分鐘，取下層溶液，過0.45μm微孔濾膜，取續濾液，即得牡蠣配方顆粒供試品溶液。
19、上述的牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其中在所述步驟4中，通過中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統2012版，采用多點校正法和mark峰匹配法生成疊加圖譜及對照圖譜，指認待測成分的特征峰；
20、其中，所述牡蠣配方顆粒指紋圖譜共有14個共有峰，從左到右依次編號，1號峰l-谷氨酸、2號峰l-絲氨酸、3號峰甘氨酸、4號峰l-組氨酸、5號峰l-蘇氨酸、6號峰l-精氨酸、7號峰丙氨酸、8號峰脯氨酸、9號峰l-酪氨酸、10號峰l-纈氨酸、11號峰l-異亮氨酸、12號峰l-亮氨酸、13號峰l-苯丙氨酸以及14號峰l-賴氨酸。
21、一種牡蠣配方顆粒多成分含量測定方法，所述測定方法包括以下步驟：
22、步驟a，定量對照品母液的配制；
23、步驟b，混合標準溶液的配制：利用所述定量對照品母液配制一系列濃度梯度混合標準溶液；
24、步驟c，采用柱前衍生化-高效液相色譜法進樣測定，以相同色譜條件，記錄色譜峰面積，以峰面積為縱坐標，對照品濃度為橫坐標進行線性分析，建立標準曲線方程，繪制牡蠣配方顆粒標準曲線；
25、步驟d，牡蠣配方顆粒供試品溶液的制備；
26、步驟e，采用柱前衍生化-高效液相色譜法進樣測定，以相同色譜條件，記錄待測成分的峰面積，計算待測成分的含量。
27、上述的牡蠣配方顆粒多成分含量測定方法，其中在所述步驟c和所述步驟e中，所述色譜條件為：
28、色譜柱：采用shim-pack?scepter?c18-120色譜柱，4.6×150mm，3μm；
29、流動相：以體積比為4：1的乙腈水溶液為流動相a，以體積比為7：93的乙腈-0.1mol/l醋酸鈉溶液為流動相b，其中醋酸鈉溶液用醋酸調節ph值至6.5；
30、梯度洗本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述建立方法包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其特征在于，在所述步驟3中，所述色譜條件為：
3.根據權利要求2所述的牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其特征在于，在所述步驟1中，定性對照品母液的配制方法為：精密稱定谷氨酸3.90mg、絲氨酸5.17mg、甘氨酸5.60mg、組氨酸3.59mg、蘇氨酸3.69mg、精氨酸4.16mg、丙氨酸5.07mg、脯氨酸4.79mg、酪氨酸5.10mg、纈氨酸6.04mg、亮氨酸4.53mg、異亮氨酸6.22mg、苯丙氨酸4.57mg、賴氨酸4.77mg置25mL量瓶，各加0.1mol/L鹽酸溶液溶解并定容至刻度，搖勻，制成每1mL含谷氨酸152.88μg、絲氨酸202.664μg、甘氨酸219.520μg、組氨酸140.728μg、丙氨酸198.744μg、脯氨酸187.768μg、蘇氨酸144.648μg、精氨酸164.248μg、酪氨酸199.920μg、纈氨酸236.768μg、亮氨酸177.576μg、異亮氨酸243.82
4.根據權利要求3所述的牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其特征在于，在所述步驟2中，牡蠣配方顆粒供試品溶液的制備方法為：取牡蠣配方顆粒樣品適量，研細，稱取約1.0g，精密稱定，置50mL離心管中，加稀鹽酸溶液10mL充分溶解，以每分鐘12000轉的轉速離心15min，棄去上清層，取沉淀層置于25mL具塞水解管中，精密加入9mol/L鹽酸10mL，密塞，于150℃水解3h，取出，放冷，過濾，并用少量水多次清洗水解管及濾紙，合并濾液，蒸干，殘渣加0.1mol/L鹽酸溶解，轉移至10mL量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，即得溶液A；
5.根據權利要求4所述的牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其特征在于，在所述步驟4中，通過中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統2012版，采用多點校正法和Mark峰匹配法生成疊加圖譜及對照圖譜，指認待測成分的特征峰；
6.一種牡蠣配方顆粒多成分含量測定方法，其特征在于，所述測定方法包括以下步驟：
7.根據權利要求6所述的牡蠣配方顆粒多成分含量測定方法，其特征在于，在所述步驟C和所述步驟E中，所述色譜條件為：
8.根據權利要求7所述的牡蠣配方顆粒多成分含量測定方法，其特征在于，在所述步驟A中，定量對照品母液的配制方法為：
9.根據權利要求8所述的牡蠣配方顆粒多成分含量測定方法，其特征在于，在所述步驟C中，各對照品的線性考察結果如下：
10.根據權利要求9所述的牡蠣配方顆粒多成分含量測定方法，其特征在于，在所述步驟D中，牡蠣配方顆粒供試品溶液的制備方法為：取牡蠣配方顆粒樣品適量，研細，稱取約1.0g，精密稱定，置50mL離心管中，加稀鹽酸溶液10mL充分溶解，以每分鐘12000轉的轉速離心15min，棄去上清層，取沉淀層置于25mL具塞水解管中，精密加入9mol/L鹽酸10mL，密塞，于150℃水解3h，取出，放冷，過濾，并用少量水多次清洗水解管及濾紙，合并濾液，蒸干，殘渣加0.1mol/L鹽酸溶解，轉移至10mL量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，即得溶液A；
...【技術特征摘要】
1.一種牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述建立方法包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其特征在于，在所述步驟3中，所述色譜條件為：
3.根據權利要求2所述的牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其特征在于，在所述步驟1中，定性對照品母液的配制方法為：精密稱定谷氨酸3.90mg、絲氨酸5.17mg、甘氨酸5.60mg、組氨酸3.59mg、蘇氨酸3.69mg、精氨酸4.16mg、丙氨酸5.07mg、脯氨酸4.79mg、酪氨酸5.10mg、纈氨酸6.04mg、亮氨酸4.53mg、異亮氨酸6.22mg、苯丙氨酸4.57mg、賴氨酸4.77mg置25ml量瓶，各加0.1mol/l鹽酸溶液溶解并定容至刻度，搖勻，制成每1ml含谷氨酸152.88μg、絲氨酸202.664μg、甘氨酸219.520μg、組氨酸140.728μg、丙氨酸198.744μg、脯氨酸187.768μg、蘇氨酸144.648μg、精氨酸164.248μg、酪氨酸199.920μg、纈氨酸236.768μg、亮氨酸177.576μg、異亮氨酸243.824μg、苯丙氨酸190.904μg、賴氨酸186.984μg的所述定性對照品母液。
4.根據權利要求3所述的牡蠣配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其特征在于，在所述步驟2中，牡蠣配方顆粒供試品溶液的制備方法為：取牡蠣配方顆粒樣品適量，研細，稱取約1.0g，精密稱定，置50ml離心管中，加稀鹽酸溶液10ml充分溶解，以每分鐘12000轉的轉速離心15min，棄去上清層，取沉淀層置于25ml具塞水解管中，精密加入9mol/l...
【專利技術屬性】
技術研發人員：江潔怡，張靖年，陳偉韜，畢曉黎，胥愛麗，李養學，李素梅，肖觀林，陳昭，
申請(專利權)人：廣東省第二中醫院廣東省中醫藥工程技術研究院，
類型：發明
國別省市：
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