【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于植物病害生物防治，具體涉及一種枯草芽孢桿菌及其在防治玉米病害中的應用。
技術介紹
1、公開該
技術介紹
的信息旨在增加對本專利技術總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。
2、玉米生產對于我國的糧食安全具有舉足輕重的作用。玉米病害的發生嚴重影響玉米的產量和質量。玉米小斑病是一種全球范圍內廣泛發生的真菌性病害，可嚴重影響玉米產量和品質，我國主要玉米產區均有發生，黃淮海、東華北玉米產區發生普遍且危害較重，有效防控玉米小斑病的發生是玉米生產中繼續解決的重要問題。近年來，隨著種植業結構調整、耕作栽培方式轉變、玉米品種更新換代等因素影響，玉米小斑病的發生呈持續加重的趨勢。玉米莖基腐病隨著種植結構調整、耕作栽培方式轉變，近年來發生逐漸加重。玉米莖基腐病又名玉米莖腐病、玉米青枯病，是危害玉米根和莖基部的一類典型土傳病害，該病在世界玉米產區普遍發生，玉米植株發病后，發病植株的莖基與髓部腐爛、發褐變軟，葉片枯萎、果穗下垂，嚴重時可全株萎蔫枯死。多種病原菌單獨或復合侵染均可造成玉米根系和莖基腐爛，其中真菌型莖基腐病是危害最重要的一類，較為常見的為鐮刀菌（ fusarium? moniliforme）和腐霉菌（ pythium?aphanidermatum），其中禾谷鐮孢菌（ fusarium? graminearum）是山東、
3、目前防控玉米病害主要采用抗病品種、化學防治等措施，例如可以播前使用化學藥劑種子處理或出苗后噴霧、灌根處理等，但化學防治存在污染環境、易引發抗藥性、農藥殘留、成本高等問題。通過有益微生物防控作物病害，越來越受到各方的重視，根際拮抗細菌對土壤環境適應力強，利用其作為生物拮抗制劑防控植物病害，具有靶標轉化性強、防效好、藥效持久、對環境友好等優點，是植物病害綠色防控的主要途徑之一。由于生物多樣性和生物的共同進化特性，針對病原微生物的不同種類和不斷進化，需要篩選更多不同種類的微生物進行應對。目前市場上仍缺少針對性強、防效好的生物制劑產品較少，無法滿足生產上的生物防治需求，仍需研發適于玉米病害防治的微生物防控產品。
技術實現思路
1、針對現有技術中缺乏玉米病害防治微生物藥劑的問題，本專利技術提供一株枯草芽孢桿菌（ bacillus?subtilis），能夠有效拮抗平臍蠕孢菌（ bipolaris?maydis(nisikado?etmiyake)?shoemaker）和禾谷鐮孢菌（ fusarium?graminearum），用于防治玉米小斑病及玉米莖基腐病。
2、本專利技術的另一目的在于，提供上述枯草芽孢桿菌制備的生物制劑，能夠有效防治玉米小斑病和禾谷鐮孢菌引起的玉米莖基腐病。
3、為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案。
4、一株枯草芽孢桿菌（ bacillus?subtilis）seb-34，保藏編號為cgmcc?no.?26419。
5、本專利技術還提供了利用上述枯草芽孢桿菌seb-34生產的發酵產物，所述發酵產物為seb-34無細胞發酵液、seb-34無細胞發酵液的干燥物或濃縮液。
6、本專利技術還提供了一種微生物菌劑，所述微生物菌劑的活性成分為seb-34的菌體、孢子和發酵產物中的至少一種。
7、上述微生物菌劑為液體制劑或固體制劑。
8、優選地，所述液體制劑中枯草芽孢桿菌seb-34的數量不小于1×108cfu/ml；所述固體制劑中枯草芽孢桿菌seb-34的數量不小于1×109cfu/g，優選為（5-10）×109cfu/g。
9、所述微生物制劑為了制劑化，還可以包括其他惰性成分，如吸收劑、穩定劑、表面活性劑等。
10、一種上述微生物菌劑的制備方法，包括以下步驟：將枯草芽孢桿菌seb-34的種子液在發酵培養基中培養，獲得發酵液；發酵液固液分離后獲得發酵產物；選擇seb-34的菌體、孢子和發酵產物中的至少一種獲得微生物菌劑。
11、所述發酵培養基包含以下重量百分比的組分：麩皮1%，玉米粉1%，氯化鈉0.5%，磷酸二氫鉀0.1%，硫酸錳0.05%，其余為水。
12、具體地，上述制備方法包括以下步驟：
13、（1）枯草芽孢桿菌seb-34菌株在lb平板培養基上活化，挑取單菌落在lb斜面培養基上，在25℃-30℃培養，獲得活化的菌株；
14、（2）將活化的菌株接種到lb液體培養基中，在35℃下攪拌培養24小時，獲得種子液；
15、（3）按照體積比為1:（25-50）的比例將種子液，接入到發酵培養基中，在35℃搖床轉速為150?rpm的條件下發酵培養，獲得發酵液；
16、（4）發酵液固液分離后可獲得菌體、孢子和無細胞發酵液；
17、（5）無細胞發酵液濃縮或干燥后獲得seb-34無細胞發酵液的干燥物或濃縮液；
18、（6）選擇seb-34的菌體、孢子和發酵產物中的至少一種混合后獲得微生物菌劑。
19、上述步驟（1）中，lb平板培養基和lb斜面培養基的組成成分及含量為：胰蛋白胨10g/l，酵母提取物5?g/l，氯化鈉10?g/l，瓊脂粉15?g/l。
20、上述步驟（2）中，lb液體培養基的組成成分及含量為：胰蛋白胨10g/l，酵母提取物5g/l，氯化鈉10g/l。
21、所述的lb平板培養基、lb斜面培養基和lb液體培養基配置過程中，溶質溶解后使用naoh調節ph值至7.0，其他操作及滅菌均按照常規方法制備。
22、上述步驟（3）中，發酵培養的終點為：發酵液中成熟芽孢占到芽孢和菌體總數的90%時。
23、本專利技術同時提供了一種上述枯草芽孢桿菌、發酵產物和微生物菌劑在防治植物病害和促進植物生長中的應用。
24、所述植物病害由禾谷鐮孢菌（ fusarium?graminearum）或玉蜀黍平臍蠕孢（ bipolaris?maydis(nisikado?et?miyake)?shoemaker）引起。優選地，所述植物為玉米。
25、本專利技術具有以下優點：
26、本專利技術提供的枯草芽孢桿菌cgmcc?no.26419，通過玉米播種前種子處理或玉米出苗后根部滴灌施用，該菌能夠定殖并保持較高豐度，具有防病、促生和增產效果，可有效降低玉米小斑病和玉米莖基腐病的發生，對玉米小斑病和玉米莖基腐病有良好的防效，同時可有效降低了化學殺菌劑的使用。該菌本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一株枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）SEB-34，保藏編號為CGMCC?No.?26419。
2.一種如權利要求1所述的枯草芽孢桿菌SEB-34的發酵產物，其特征在于，所述發酵產物為枯草芽孢桿菌SEB-34的無細胞發酵液、無細胞發酵液的干燥物或濃縮液。
3.一種微生物菌劑，其特征在于，所述微生物菌劑的活性成分為如權利要求1所述的枯草芽孢桿菌SEB-34的菌體、孢子和發酵產物中的至少一種。
4.根據權利要求3所述的微生物菌劑其特征在于，微生物菌劑的劑型為液體制劑或固體制劑；
5.根據權利要求4所述的微生物菌劑其特征在于，所述固體制劑中枯草芽孢桿菌SEB-34的數量為（5-10）×109?cfu/g；
6.一種如權利要求3-5任一所述的微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：將枯草芽孢桿菌SEB-34的種子液在發酵培養基中培養，獲得發酵液；發酵液固液分離后獲得發酵產物；選擇枯草芽孢桿菌SEB-34的菌體、孢子和發酵產物中的至少一種獲得微生物菌劑；
7.根據權利要求6所述的制備方法，其
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，LB平板培養基和LB斜面培養基的組成成分及含量為：胰蛋白胨10?g/L，酵母提取物5?g/L，氯化鈉10?g/L，瓊脂粉15g/L；
9.一種如權利要求1所述的枯草芽孢桿菌、如權利要求2所述的發酵產物或如權利要求3-5任一所述的微生物菌劑在防治植物病害和促進植物生長中的應用，其特征在于，所述植物病害由禾谷鐮孢菌（Fusarium?graminearum）或玉蜀黍平臍蠕孢（Bipolaris?maydis?(Nisikado?et?Miyake)?Shoemaker）引起。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述植物為玉米。
...【技術特征摘要】
1.一株枯草芽孢桿菌（bacillus?subtilis）seb-34，保藏編號為cgmcc?no.?26419。
2.一種如權利要求1所述的枯草芽孢桿菌seb-34的發酵產物，其特征在于，所述發酵產物為枯草芽孢桿菌seb-34的無細胞發酵液、無細胞發酵液的干燥物或濃縮液。
3.一種微生物菌劑，其特征在于，所述微生物菌劑的活性成分為如權利要求1所述的枯草芽孢桿菌seb-34的菌體、孢子和發酵產物中的至少一種。
4.根據權利要求3所述的微生物菌劑其特征在于，微生物菌劑的劑型為液體制劑或固體制劑；
5.根據權利要求4所述的微生物菌劑其特征在于，所述固體制劑中枯草芽孢桿菌seb-34的數量為（5-10）×109?cfu/g；
6.一種如權利要求3-5任一所述的微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：將枯草芽孢桿菌seb-34的種子液在發酵培養基中培養，獲得...
【專利技術屬性】
技術研發人員：趙鳴，李向東，張蕓，薛超，
申請(專利權)人：山東省農業科學院，
類型：發明
國別省市：
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