【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本申請涉及檢測，尤其涉及檢測肺癌自身抗體的試紙條、試劑盒及應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、低劑量螺旋ct被廣泛用于檢測肺部早期結(jié)節(jié)。但低劑量螺旋ct的問題在于其檢測結(jié)果的高假陽性。其他的早期肺癌檢查方法包括pet、核磁共振、支氣管內(nèi)鏡等檢查存在無法早期篩查、價格昂貴等問題。而傳統(tǒng)常規(guī)腫瘤標(biāo)志物，在腫瘤早期血液中含量非常低甚至沒有。
2、目前測定七種肺癌自身抗體的方法是酶聯(lián)免疫法，酶聯(lián)免疫法測定樣本的時間長，操作費時費力，雖然可以做到定量測定，但無法做到poct試劑的現(xiàn)場檢測，互不干擾。
3、隨著經(jīng)濟(jì)技術(shù)的快速發(fā)展，亟需找到一種能夠即時檢測、檢測時間短且無需大型設(shè)備的檢測肺癌自身抗體的方法。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本申請實施例的目的在于提出一種檢測肺癌自身抗體的試紙條、試劑盒及應(yīng)用，在保證檢測靈敏度的同時，實現(xiàn)即時檢測。
2、為了解決上述技術(shù)問題，本申請實施例提供一種檢測肺癌自身抗體的試紙條，采用了如下所述的技術(shù)方案：
3、所述試紙條包括第一膠體金試紙、第二膠體金試紙、第三膠體金試紙、第四膠體金試紙、第五膠體金試紙、第六膠體金試紙以及第七膠體金試紙；
4、其中，所述第一膠體金試紙、所述第二膠體金試紙、所述第三膠體金試紙、所述第四膠體金試紙、所述第五膠體金試紙、所述第六膠體金試紙以及所述第七膠體金試紙均包括pvc底板上以及依次搭接設(shè)置在所述pvc底板上的樣品墊、膠體金結(jié)合墊、nc膜和吸收墊，所述nc膜上設(shè)置有質(zhì)控線；
5、所述第
6、所述第二膠體金試紙的膠體金結(jié)合墊上設(shè)置有pgp9.5蛋白金標(biāo)物，所述第一膠體金試紙的nc膜上設(shè)置有第一檢測線，所述第一檢測線包被有pgp9.5重組抗原；
7、所述第三膠體金試紙的膠體金結(jié)合墊上設(shè)置有sox2蛋白金標(biāo)物，所述第三膠體金試紙的nc膜上設(shè)置有第三檢測線，所述第三檢測線包被有sox2重組抗原；
8、所述第四膠體金試紙的膠體金結(jié)合墊上設(shè)置有g(shù)age7蛋白金標(biāo)物，所述第四膠體金試紙的nc膜上設(shè)置有第四檢測線，所述第四檢測線包被有g(shù)age7重組抗原；
9、所述第五膠體金試紙的膠體金結(jié)合墊上設(shè)置有g(shù)bu4-5蛋白金標(biāo)物，所述第五膠體金試紙的nc膜上設(shè)置有第五檢測線，所述第五檢測線包被有g(shù)bu4-5重組抗原；
10、所述第六膠體金試紙的膠體金結(jié)合墊上設(shè)置有magea1蛋白金標(biāo)物，所述第六膠體金試紙的nc膜上設(shè)置有第六檢測線，所述第六檢測線包被有magea1重組抗原；
11、所述第七膠體金試紙的膠體金結(jié)合墊上設(shè)置有cage蛋白金標(biāo)物，所述第七膠體金試紙的nc膜上設(shè)置有第七檢測線，所述第七檢測線包被有cage重組抗原。
12、進(jìn)一步的，所述膠體金結(jié)合墊上設(shè)置有鼠igg金標(biāo)物，所述質(zhì)控線包被有羊抗鼠igg多克隆抗體。
13、進(jìn)一步的，所述羊抗鼠igg多克隆抗體的包被濃度為1.0mg/ml，包被量為1.0μl/cm。
14、進(jìn)一步的，所述p53重組抗原、所述pgp9.5重組抗原、所述sox2重組抗原、所述gage7重組抗原、所述gbu4-5重組抗原、所述magea1重組抗原以及所述cage重組抗原的包被濃度均為1.0-1.5mg/ml，包被量均為1.0μl/cm。
15、進(jìn)一步的，所述p53重組抗原、所述pgp9.5重組抗原、所述sox2重組抗原、所述gage7重組抗原、所述gbu4-5重組抗原、所述magea1重組抗原以及所述cage重組抗原由包被緩沖液稀釋；
16、其中，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)計，所述包被緩沖液包括ph為7.4的0.01-0.02m磷酸鹽緩沖液和2％的海藻糖。
17、進(jìn)一步的，所述結(jié)合墊通過下述步驟制得：
18、根據(jù)預(yù)先制備的納米膠體金溶液制備目標(biāo)蛋白金標(biāo)物，其中，所述目標(biāo)蛋白金標(biāo)物包括p53蛋白金標(biāo)物、pgp9.5蛋白金標(biāo)物、sox2蛋白金標(biāo)物、gage7蛋白金標(biāo)物、gbu4-5蛋白金標(biāo)物、magea1蛋白金標(biāo)物或者cage蛋白金標(biāo)物；
19、根據(jù)預(yù)先制備的納米膠體金溶液制備鼠igg金標(biāo)物；
20、將所述目標(biāo)蛋白金標(biāo)物和所述鼠igg金標(biāo)物均勻混合于膠體金稀釋液中，噴涂于玻璃纖維素膜上，干燥后得到所述結(jié)合墊；
21、其中，按質(zhì)量分?jǐn)?shù)計，所述膠體金稀釋液包括ph為8.5的0.01m?tris-hcl緩沖液、1％的牛血清白蛋白、10％的蔗糖、0.1％的吐溫-20和0.1％的疊氮鈉。
22、進(jìn)一步的，所述納米膠體金溶液通過下述步驟制得：
23、將雙蒸水加熱至沸騰，加入質(zhì)量濃度為1％的氯化金水溶液，繼續(xù)沸騰加熱；
24、加入質(zhì)量濃度為2％的檸檬酸三鈉溶液，繼續(xù)沸騰加熱；
25、當(dāng)溶液顏色變?yōu)榫萍t色時，停止加熱，得到所述納米膠體金溶液。
26、進(jìn)一步的，所述根據(jù)預(yù)先制備的納米膠體金溶液制備鼠igg金標(biāo)物的步驟包括：
27、向所述納米膠體金溶液中加入質(zhì)量濃度為0.2m的k2co3；
28、加入鼠igg抗體，混合均勻，加入質(zhì)量濃度為10％的bsa溶液；
29、10000-12000r/pm的轉(zhuǎn)速離心10-15min，棄上清，保留沉淀，得到所述鼠igg金標(biāo)物。
30、為了解決上述技術(shù)問題，本申請實施例還提供一種檢測肺癌自身抗體的試劑盒，采用了如下所述的技術(shù)方案：
31、一種檢測肺癌自身抗體的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括檢測卡，所述檢測卡包括卡殼和如權(quán)利要求1至8任意一項所述的檢測肺癌自身抗體的試紙條；
32、所述試紙條置于所述卡殼內(nèi)。
33、為了解決上述技術(shù)問題，本申請實施例還提供非診斷目的檢測肺癌自身抗體中的應(yīng)用，采用了如下所述的技術(shù)方案：
34、上述的試劑盒在非診斷目的檢測肺癌自身抗體中的應(yīng)用。
35、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本申請實施例主要有以下有益效果：
36、免疫膠體金快速診斷技術(shù)具有快速、操作簡單、高特異性、高靈敏性、檢測成本低、無需復(fù)雜技巧和特殊設(shè)備，并且特別適用于現(xiàn)場大量樣本的實時、快速抽樣檢測的特點，因此可以簡單、快速實現(xiàn)人血清、血漿或全血樣本的定性檢測。此檢測方法克服了如免疫熒光法技術(shù)定性檢測易出現(xiàn)假陰現(xiàn)象的缺陷、簡化了樣本處理過程、極大縮短了檢測時間、降低了研究成本和技術(shù)復(fù)雜性；本申請通過膠體金方法檢測可以做到現(xiàn)場檢測，無需大型儀器及耗材，抗干擾能力強，方便快捷，可以對患者的健康狀況作出判斷及監(jiān)測；本申請操作簡單、檢測時間短：只需要加樣1次，即可得到7種檢測結(jié)果，加樣完成后，10-15min即可出結(jié)果。
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1.一種檢測肺癌自身抗體的試紙條，其特征在于，所述試紙條包括第一膠體金試紙、第二膠體金試紙、第三膠體金試紙、第四膠體金試紙、第五膠體金試紙、第六膠體金試紙以及第七膠體金試紙；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測肺癌自身抗體的試紙條，其特征在于，所述膠體金結(jié)合墊上設(shè)置有鼠IgG金標(biāo)物，所述質(zhì)控線包被有羊抗鼠IgG多克隆抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測肺癌自身抗體的試紙條，其特征在于，所述羊抗鼠IgG多克隆抗體的包被濃度為1.0mg/ml，包被量為1.0μL/cm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測肺癌自身抗體的試紙條，其特征在于，所述p53重組抗原、所述PGP9.5重組抗原、所述SOX2重組抗原、所述GAGE7重組抗原、所述GBU4-5重組抗原、所述MAGEA1重組抗原以及所述CAGE重組抗原的包被濃度均為1.0-1.5mg/ml，包被量均為1.0μL/cm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測肺癌自身抗體的試紙條，其特征在于，所述p53重組抗原、所述PGP9.5重組抗原、所述SOX2重組抗原、所述GAGE7重組抗原、所述GBU4-5重組抗原、所
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測肺癌自身抗體的試紙條，其特征在于，所述結(jié)合墊通過下述步驟制得：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測肺癌自身抗體的試紙條，其特征在于，所述納米膠體金溶液通過下述步驟制得：
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測肺癌自身抗體的試紙條，其特征在于，所述根據(jù)預(yù)先制備的納米膠體金溶液制備鼠IgG金標(biāo)物的步驟包括：
9.一種檢測肺癌自身抗體的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括檢測卡，所述檢測卡包括卡殼和如權(quán)利要求1至8任意一項所述的檢測肺癌自身抗體的試紙條；
10.如權(quán)利要求9所述的試劑盒在非診斷目的檢測肺癌自身抗體中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種檢測肺癌自身抗體的試紙條，其特征在于，所述試紙條包括第一膠體金試紙、第二膠體金試紙、第三膠體金試紙、第四膠體金試紙、第五膠體金試紙、第六膠體金試紙以及第七膠體金試紙；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測肺癌自身抗體的試紙條，其特征在于，所述膠體金結(jié)合墊上設(shè)置有鼠igg金標(biāo)物，所述質(zhì)控線包被有羊抗鼠igg多克隆抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測肺癌自身抗體的試紙條，其特征在于，所述羊抗鼠igg多克隆抗體的包被濃度為1.0mg/ml，包被量為1.0μl/cm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測肺癌自身抗體的試紙條，其特征在于，所述p53重組抗原、所述pgp9.5重組抗原、所述sox2重組抗原、所述gage7重組抗原、所述gbu4-5重組抗原、所述magea1重組抗原以及所述cage重組抗原的包被濃度均為1.0-1.5mg/ml，包被量均為1.0μl/cm。
5.根據(jù)權(quán)利要...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：蔣析文，齊文闖，潘秀華，劉雙，文金強，鐘漢高，
申請(專利權(quán))人：廣州達(dá)安基因股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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