【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及植物育種，特別涉及一種過路黃變異誘導方法。
技術介紹
1、過路黃(lysimachia?xiangxiensis)是一種多年生草本植物，屬于報春花科，在中國及其他亞洲地區廣泛分布。由于其豐富的藥用價值和獨特的觀賞特性，過路黃在園藝和生態修復方面具有較高的應用潛力。盡管其在美學上具有吸引力，但過路黃在形態上的單一性限制了其在不同環境中的適應性和抗逆性，尤其在面對氣候變化、病蟲害等外部壓力時，表現出一定的脆弱性。因此，開發具備更強環境適應性和更好抗性的新型過路黃品種成為當前育種工作的重點。
2、傳統的過路黃育種方法，如雜交和選擇育種，通常依賴自然環境和季節變化，育種周期長且效率低。隨著生物技術的進步，植物的多倍體誘導成為一種較為高效的育種手段。多倍體植物通常表現出更強的遺傳可塑性、更大的器官、更強的抗逆性等特征，能夠適應更多樣化的生長環境，并在抗旱、抗鹽堿等方面表現出較好的耐性。因此，多倍體誘導已成為植物育種中改良性狀的重要方法之一。通過體外誘導多倍體，不僅可以加速育種進程，還能突破季節性和氣候條件的限制。
3、目前，常用的抗有絲分裂劑如秋水仙素，已被廣泛應用于植物的變異誘導。盡管秋水仙素具有較強的倍性誘導效果，但其毒性較大，限制了在植物育種中的應用。并且秋水仙素作為誘變劑，通常會讓二倍體植物的致染色體數目加倍產生四倍體，但四倍體通常伴有緩慢生長的特性，相較于三倍體，其育種效率和商品化價值較低。因此使用秋水仙素誘導過路黃也同樣不具有育種優勢。
4、因此，目前亟需一種三倍體過路黃的誘導
技術實現思路
1、本專利技術的目的是克服現有技術的缺點與不足，提供一種過路黃變異誘導方法。本專利技術首次針對過路黃物種進行誘導育種，創造性使用氨磺樂靈誘導過路黃變異，并意外發現過路黃變異產生了三倍體植株，其育種效率遠高于四倍體過路黃；且觀賞價值與抗逆性/適應性等優于二倍體，因此具有明顯的育種優勢。此外，本專利技術進一步通過優化氨磺樂靈的濃度、處理時間以及誘導的外植體選擇，從而顯著提高三倍體的變異率和三倍體率，達到近100％。
2、本專利技術氨磺樂靈處理過路黃的外植體，尤其是莖段，不僅能夠提高其繁殖效率，還可以通過誘導多倍體改變其遺傳背景，改良其形態、提高抗逆性和適應性，為過路黃的育種提供新的材料基礎和技術支持。通過優化氨磺樂靈的濃度、處理時間，可以有效提升過路黃的變異誘導效果，從而為過路黃品種改良和抗性研究提供新的突破點。
3、本專利技術的目的可以通過以下方案來實現：
4、第一方面，本專利技術提供一種三倍體過路黃的誘導方法，所述誘導方法包括以下步驟：
5、s1、將過路黃莖段浸泡在氨磺樂靈溶液中，進行誘變處理；
6、s2、將誘變處理后的過路黃莖段接種到培養基中培養后，在光照條件下進行再生培養，馴化移栽，即得所述三倍體過路黃。
7、本專利技術中的氨磺樂靈作為一種低毒性的抗有絲分裂劑，能夠通過干擾細胞分裂過程中的微管形成，阻止染色體分配，從而促進染色體的加倍，進而提高植物的變異發生率。
8、在一些實施例中，所述氨磺樂靈溶液在超凈工作臺上配制，并進行過濾滅菌。
9、作為本專利技術的一個實施方案，步驟s1中，所述過路黃的品種為lysimachiaxiangxiensis。
10、作為本專利技術的一個實施方案，步驟s1中，所述過路黃莖段為切割后的過路黃莖段，切割長度為3-5cm。本專利技術選擇選取生長均勻的過路黃莖段作為誘變外植體。
11、作為本專利技術的一個實施方案，步驟s1中，所述氨磺樂靈溶液的質量濃度為0.001-0.003％。
12、優選地，所述氨磺樂靈溶液的質量濃度為0.001％。
13、作為本專利技術的一個實施方案，步驟s1中，所述誘變處理的時間為2-6天。
14、優選地，所述誘變處理的時間為4天。
15、作為本專利技術的一個實施方案，步驟s1中，所述誘變處理的方式為振蕩處理，所述振蕩處理的速率為100-200r/min。
16、作為本專利技術的一個實施方案，步驟s2中，接種前，用無菌濾紙將過路黃莖段表面的水分吸干。
17、作為本專利技術的一個實施方案，步驟s2中，所述培養基為含有3-4％蔗糖和0.65-0.7％瓊脂的ms培養基，ph為5.6-5.8。培養至在培養基上再生出植株。
18、作為本專利技術的一個實施方案，步驟s2中，所述光照強度1200-1400lx，光照時間14-15h/d；再生培養的時間為3-5個月，再生培養的溫度為22-27℃。在一些實施例中，所述再生培養使用穴盤中進行。
19、作為本專利技術的一個實施方案，步驟s2中，馴化移栽的時間為7-10個月。
20、本專利技術取步驟s2中得到的三倍體過路黃利用流式細胞儀進行倍性鑒定。
21、與現有技術相比，本專利技術具有如下有益效果：
22、1、本專利技術首次針對過路黃物種進行誘導育種，創造性利用氨磺樂靈處理過路黃，通過染色體分析和流式細胞術鑒定再生植株的倍性，成功誘導了過路黃的變異，并意外發現其誘導產生了三倍體過路黃，為過路黃品種改良和多倍體誘導提供了有效的種質材料。
23、2、本專利技術通過優化氨磺樂靈的質量濃度(0.001％)，處理時間(4天)對過路黃外植體(莖段)進行誘導，顯著提升三倍體過路黃植株的變異率和三倍體率，使其接近100％，具有極高的實用性。
24、3、本專利技術成功誘導出具有三倍體過路黃變異體，該三倍體植株在形態上與野生型明顯不同，表現為莖增粗、葉片增大且厚度增加，整體生長勢更強，抗逆性更好，適應性更廣泛；相較于四倍體具有較高的育種效率。本專利技術通過該方法獲得的變異體可為過路黃的觀賞性、生態適應性和育種效率提供顯著改良，為未來過路黃育種提供了重要的種質材料和技術支持。
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1.一種三倍體過路黃的誘導方法，其特征在于，所述誘導方法包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的誘導方法，其特征在于，步驟S1中，所述氨磺樂靈溶液的質量濃度為0.001-0.003％。
3.根據權利要求2所述的誘導方法，其特征在于，所述氨磺樂靈溶液的質量濃度為0.001％。
4.根據權利要求1所述的誘導方法，其特征在于，步驟S1中，所述誘變處理的時間為2-6天。
5.根據權利要求4所述的誘導方法，其特征在于，所述誘變處理的時間為4天。
6.根據權利要求1所述的誘導方法，其特征在于，步驟S1中，所述誘變處理的方式為振蕩處理，所述振蕩處理的速率為100-200r/min。
7.根據權利要求1所述的誘導方法，其特征在于，步驟S2中，所述培養基為含有3-4％蔗糖和0.65-0.7％瓊脂的MS培養基，pH為5.6-5.8。
8.根據權利要求1所述的誘導方法，其特征在于，步驟S2中，所述光照強度1200-1400lx，光照時間14-15h/d。
9.根據權利要求1所述的誘導方法，其特征在于，步驟S
10.一種如權利要求1-9中任一項所述誘導方法得到的三倍體過路黃。
...【技術特征摘要】
1.一種三倍體過路黃的誘導方法，其特征在于，所述誘導方法包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的誘導方法，其特征在于，步驟s1中，所述氨磺樂靈溶液的質量濃度為0.001-0.003％。
3.根據權利要求2所述的誘導方法，其特征在于，所述氨磺樂靈溶液的質量濃度為0.001％。
4.根據權利要求1所述的誘導方法，其特征在于，步驟s1中，所述誘變處理的時間為2-6天。
5.根據權利要求4所述的誘導方法，其特征在于，所述誘變處理的時間為4天。
6.根據權利要求1所述的誘導方法，其特征在于，步驟s1中，所述誘變處理的方式為振蕩處...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張源珊，申曉輝，陳冠群，申瑞雪，李秋靜，
申請(專利權)人：上海交通大學，
類型：發明
國別省市：
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