【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種生物樣品中鄰苯二甲酸酯及其代謝物同時(shí)快速前處理的方法。
技術(shù)介紹
1、鄰苯二甲酸酯(paes)是一類典型的內(nèi)分泌干擾物，它可在生物體內(nèi)發(fā)生代謝轉(zhuǎn)化形成單脂苯甲酸類代謝物(mpaes)。paes及mpaes已在我國的動(dòng)物、植物等生物樣品中被廣泛檢出。
2、檢測生物樣品中paes和mpaes的前處理步驟，通常包括目標(biāo)物的提取與凈化步驟。目前，常見用于生物樣品中paes的前處理方法就有quechers技術(shù)，該quechers技術(shù)具有操作簡單、溶劑用量少、回收率較高等優(yōu)點(diǎn)。
3、如，中國公布專利文獻(xiàn)cn105203661a公開了利用quechers前處理方式對蔬菜、水果和食用菌中多種paes進(jìn)行提取凈化，包括以下步驟：1)向樣品加入樣品重量1～2倍體積的乙腈，快速渦旋，2)再加入樣品重量0.5～1.5倍重量的無水硫酸鈉和0.1～0.5倍重量的氯化鈉，混勻后離心，3)然后取上清液至含有凈化填料的具塞玻璃離心管中，進(jìn)行渦旋，離心取上清液。上述方法可同時(shí)對樣品中23種paes進(jìn)行前處理，然而并不適用于mpaes，不能實(shí)現(xiàn)paes及mpaes同時(shí)前處理。
4、又如，míriam?hidalgo-serrano,et?al."simple?method?for?determiningphthalate?diesters?and?their?metabolites?in?seafood?species?using?quechersextraction?and?liquid?chromatogra
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一種生物樣品中鄰苯二甲酸酯及其代謝物同時(shí)快速前處理的方法。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用以下技術(shù)方案。
3、一種生物樣品中鄰苯二甲酸酯及其代謝物同時(shí)快速前處理的方法，包括以下步驟：
4、(1)按0.5g:3ml比例向樣品加入稀鹽酸，渦旋1～3min；
5、(2)按照樣品與乙腈0.5g:3ml的比例，向步驟(1)得到的混合液加入乙腈，渦旋1～3min，然后超聲8～15min；
6、(3)按照樣品與提取鹽包1:4的質(zhì)量比，向步驟(2)得到的混合液加入提取鹽包，劇烈搖晃使鹽包充分混勻，然后渦旋5～8min；最后，以3000rpm離心5～6min，取上清液，得到檢測鄰苯二甲酸酯及其代謝物用的溶液。
7、本專利技術(shù)在實(shí)驗(yàn)時(shí)確定，采取0.5g:3ml比例向樣品加入稀鹽酸和乙腈，就能夠僅通過提取步驟完成鄰苯二甲酸酯及其代謝物前處理，無需再利用凈化填料對其進(jìn)行凈化。
8、其中，采取0.5g:3ml比例向樣品加入稀鹽酸和乙腈后，步驟(2)的混合液呈懸濁液狀態(tài)，加入提取鹽包混勻后的混合液呈現(xiàn)粘稠的乳濁狀，這與現(xiàn)有quechers技術(shù)中提取的現(xiàn)象存在很大差異。在常規(guī)操作下，本領(lǐng)域技術(shù)人員遇到上述現(xiàn)象會(huì)通過增加溶劑的體積使混合液分層以達(dá)到提取目的，但本專利技術(shù)未繼續(xù)增加溶劑體積，并意外發(fā)現(xiàn)，對該混合液進(jìn)行離心后，混合液分為三層，從下至上依次是澄清的無色水相、有色的固體乳化層、澄清的無色有機(jī)相，色素幾乎完全在固體乳化層，所以，本專利技術(shù)的方法能分離出澄清的無色有機(jī)相；該澄清無色有機(jī)相無需凈化即可用于檢測，實(shí)驗(yàn)證明其效果與凈化后相同，并且其滿足檢測的體積需求，還可以得到較為理想的回收率。
9、具體地，本專利技術(shù)發(fā)現(xiàn)選用稀鹽酸的體積量太小會(huì)無法浸透固體樣品，體積量太大則導(dǎo)致樣品中更多的水溶性雜質(zhì)溶出，從而需要增加凈化步驟，并提高凈化的難度；而選用乙腈的體積量太小會(huì)使有機(jī)相與水相無法分層，體積量太大則導(dǎo)致乙腈層中目標(biāo)化合物的濃度低而需要濃縮步驟，增加前處理時(shí)長，而且在濃縮過程中由于基質(zhì)濃度也被濃縮，因此為避免高濃度基質(zhì)污染色譜柱或影響目標(biāo)物的準(zhǔn)確定量，需進(jìn)一步進(jìn)行凈化以降低進(jìn)樣液中基質(zhì)的濃度。
10、再者，本專利技術(shù)增加超聲處理，能夠提高鄰苯二甲酸酯及其代謝物的提取效率和回收率。
11、優(yōu)選地，在步驟(1)中的樣品經(jīng)過均質(zhì)和冷凍干燥，且過60目篩。
12、優(yōu)選地，所述稀鹽酸的ph值為2。
13、優(yōu)選地，在進(jìn)行超聲的過程中手動(dòng)上下?lián)u晃1～2次，以增加固體樣品與溶液的接觸時(shí)間，從而提高目標(biāo)物的提取效率。
14、優(yōu)選地，所述提取鹽包包含無水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸二鈉倍半水合物、檸檬酸三鈉二水合物；所述無水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸二鈉倍半水合物、檸檬酸三鈉二水合物的質(zhì)量比為8:2:1:2。在加入提取鹽包前，混合物中的提取液體系為酸性的乙腈-水溶液，此時(shí)，水相與有機(jī)相互溶；加入提取鹽包后，無水mgso4吸收水分、脂肪酸等雜質(zhì)；nacl具有鹽析作用，有助于水相與有機(jī)相的分層，并促使弱極性目標(biāo)物(paes)和中極性目標(biāo)物(mpaes)進(jìn)入有機(jī)相；檸檬酸二鈉倍半水合物和檸檬酸三鈉二水合物可調(diào)節(jié)溶液的ph值，促進(jìn)酸性的中極性目標(biāo)物(mpaes)從水相向有機(jī)相轉(zhuǎn)移。
15、優(yōu)選地，本專利技術(shù)利用玻璃樣品瓶代替常用的玻璃離心管進(jìn)行樣品的前處理。玻璃樣品瓶價(jià)格遠(yuǎn)低于玻璃離心管的價(jià)格，前者僅是后者價(jià)格的2％，能降低檢測成本；此外，因?yàn)槠降撞Ａ康膬r(jià)格較低，可以作為一次性使用，從而避免重復(fù)使用過程而帶入的本底值污染。
16、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)的有益效果是：
17、本專利技術(shù)對現(xiàn)有quechers方法進(jìn)行改進(jìn)，具體通過控制稀鹽酸與乙腈的體積，有效降低雜質(zhì)的溶出，再利用提取鹽包對雜質(zhì)的吸附功能實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物paes及mpaes與雜質(zhì)的分離；所以，本專利技術(shù)不僅能實(shí)現(xiàn)paes及mpaes的同時(shí)前處理，而且樣品經(jīng)過提取后無需復(fù)雜的柱凈化步驟，從而大幅縮短前處理時(shí)間，使得1個(gè)樣品的前處理時(shí)間由6h縮短為0.5h以內(nèi)，極大程度地提高了前處理的效率。同時(shí)，本專利技術(shù)方法對生物樣品基質(zhì)的普適性強(qiáng)，可同時(shí)適用于動(dòng)物樣品(魚、肉、蛋、奶等)和植物樣品(谷物、豆類等)。
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1.一種生物樣品中鄰苯二甲酸酯及其代謝物同時(shí)快速前處理的方法，其特征是，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物樣品中鄰苯二甲酸酯及其代謝物同時(shí)快速前處理的方法，其特征是，在步驟(1)中的樣品經(jīng)過均質(zhì)和冷凍干燥，且過60目篩。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的生物樣品中鄰苯二甲酸酯及其代謝物同時(shí)快速前處理的方法，其特征是，所述稀鹽酸的pH值為2。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生物樣品中鄰苯二甲酸酯及其代謝物同時(shí)快速前處理的方法，其特征是，在進(jìn)行超聲的過程中手動(dòng)上下?lián)u晃1～2次。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的生物樣品中鄰苯二甲酸酯及其代謝物同時(shí)快速前處理的方法，其特征是，所述提取鹽包包含無水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸二鈉倍半水合物、檸檬酸三鈉二水合物；所述無水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸二鈉倍半水合物、檸檬酸三鈉二水合物的質(zhì)量比為8:2:1:2。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生物樣品中鄰苯二甲酸酯及其代謝物同時(shí)快速前處理的方法，其特征是，利用玻璃樣品瓶進(jìn)行樣品的前處理。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種生物樣品中鄰苯二甲酸酯及其代謝物同時(shí)快速前處理的方法，其特征是，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物樣品中鄰苯二甲酸酯及其代謝物同時(shí)快速前處理的方法，其特征是，在步驟(1)中的樣品經(jīng)過均質(zhì)和冷凍干燥，且過60目篩。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的生物樣品中鄰苯二甲酸酯及其代謝物同時(shí)快速前處理的方法，其特征是，所述稀鹽酸的ph值為2。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生物樣品中鄰苯二甲酸酯及其代謝物同時(shí)快速前處理的方法...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：黃育坊，林偉健，黃曉梅，王俊，呂輝雄，王姣姣，
申請(專利權(quán))人：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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