本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種靶向降解酪氨酸酶的化合物及其制法和應(yīng)用，本發(fā)明專利技術(shù)的靶向降解酪氨酸酶的化合物結(jié)構(gòu)如式I所示，作為酪氨酸酶降解劑能夠在低劑量下顯著降解酪氨酸酶，高效延緩雙孢菇褐變，其制法簡(jiǎn)便高效、反應(yīng)溫和，適合大規(guī)模生產(chǎn)；應(yīng)用在菌類保鮮技術(shù)領(lǐng)域，安全性高，綠色環(huán)保，極具應(yīng)用前景。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種靶向降解酪氨酸酶的化合物，還涉及上述化合物的制法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、在保鮮
中，雙孢菇由于其含水量高達(dá)85％-95％，在儲(chǔ)運(yùn)的過程中很容易褐變，特別是新鮮采摘的含水豐富的雙孢菇，其組織柔軟，顏色白凈，表面無保護(hù)組織，在儲(chǔ)運(yùn)過程中極易由失水、磕碰等原因褐變，在室溫(20-30℃)下儲(chǔ)存保鮮期僅為1-2天，目前雙孢菇的儲(chǔ)運(yùn)條件一般為冷藏(0-4℃)，即便在冷藏的條件下，其儲(chǔ)運(yùn)時(shí)間超過一周也會(huì)出現(xiàn)不同程度的失水褐變。而且，不可避免的會(huì)存在磕碰導(dǎo)致的雙孢菇褐變。因此，目前還沒有有效的方法來防止雙孢菇儲(chǔ)運(yùn)過程中的褐變問題，尋找一種簡(jiǎn)單有效的方法來防止褐變依然迫在眉睫。
2、酶促褐變是食物內(nèi)的酚類物質(zhì)在酪氨酸酶的催化作用下形成醌，生成的醌類化合物會(huì)進(jìn)一步發(fā)生氧化反應(yīng)，最終聚合形成黑色素(melanin)，從而導(dǎo)致了食品褐變的發(fā)生。酪氨酸酶是生物體內(nèi)黑色素生成過程中的初始酶及關(guān)鍵酶。疏水標(biāo)簽技術(shù)作為一種蛋白質(zhì)靶向降解的新興技術(shù)，正在生物醫(yī)藥領(lǐng)域不斷發(fā)展，將其運(yùn)用到果蔬上具有廣闊前景。疏水標(biāo)簽含有靶蛋白配體和用于誘導(dǎo)降解的疏水部分，疏水標(biāo)簽通過接頭連接到靶蛋白的配體，模擬內(nèi)源性蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊并通過蛋白酶體途徑觸發(fā)降解。因此，亟待設(shè)計(jì)一類用于靶向降解酪氨酸酶，以延緩雙孢蘑菇褐變的疏水標(biāo)簽。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、專利技術(shù)目的：本專利技術(shù)的目的是提供一種高效的靶向降解酪氨酸酶的化合物，還涉及上述化合物的制法及其在菌類保鮮
作為酪氨酸酶降解劑的應(yīng)用。
>2、技術(shù)方案：本專利技術(shù)公開了一種靶向降解酪氨酸酶的化合物，結(jié)構(gòu)如式(i)所示：3、
4、其中，linker為碳數(shù)為0-6的烷氧基；
5、r為
6、其中，所述linker為
7、
8、其中，所述化合物為以下任一：
9、
10、上述化合物的制備，當(dāng)linker為碳數(shù)為0的烷氧基時(shí)，制法為：將曲酸、反應(yīng)物料a、4-二甲氨基吡啶(dmap)、溶于dmf中，冰浴至0℃；加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺(edc)、1-羥基苯并三唑(hobt)冰浴反應(yīng)1h，轉(zhuǎn)室溫反應(yīng)過夜即得本專利技術(shù)的靶向降解酪氨酸酶的化合物。
11、其中，反應(yīng)物料a為9-芴乙酸或1-金剛烷乙酸，曲酸：反應(yīng)物料a：edc:hobt的摩爾比為1.2：1：1：1，dmap定量為0.05g；加入edc、hobt冰浴反應(yīng)1～2h隨后室溫反應(yīng)過夜。
12、上述化合物的制備，當(dāng)linker為碳數(shù)為2-6的烷氧基時(shí)，制法包括以下步驟：
13、(1)將反應(yīng)物料b加入dcm中，室溫?cái)嚢柚寥芙猓来渭尤?-甲基苯-1-磺酰氯、dmap和三乙胺，室溫下反應(yīng)12h得產(chǎn)物1；
14、(2)曲酸、產(chǎn)物1、cs2co3溶于dmf中，油浴加熱至60℃，tlc碘熏檢測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)，加水，ea萃取，飽和食鹽水洗，真空濃縮得產(chǎn)物2；
15、(3)將產(chǎn)物2溶于4m?hcl的二惡烷中，室溫下反應(yīng)30min，tlc檢測(cè)反應(yīng)完全，停止反應(yīng)，真空濃縮，加入ea，攪拌至完全溶解，水洗，無水硫酸鈉干燥，真空濃縮得產(chǎn)物3；
16、(4)將產(chǎn)物3、反應(yīng)物料a及n,n-二異丙基乙胺(dipea)溶于dmf中，冰浴降溫至0℃，加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)，室溫反應(yīng)，加水，ea萃取，飽和食鹽水洗，真空濃縮，硅膠柱層析即得即得本專利技術(shù)的靶向降解酪氨酸酶的化合物。
17、其中，步驟(1)中，反應(yīng)物料b為n-boc-乙醇胺或2-(2-boc-氨基乙氧基)乙醇或(2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯，反應(yīng)物料b：4-甲基苯-1-磺酰氯：dmap：三乙胺的摩爾比為1：2：0.4：2.5；步驟(2)中，曲酸：(1)產(chǎn)物：cs2co3的摩爾比為1：1.2：2，反應(yīng)溫度為50～70℃；步驟(3)中，4m?hcl的二惡烷的摩爾量為(2)產(chǎn)物的4倍及以上；步驟(4)中，(3)產(chǎn)物：反應(yīng)物料a：dipea：hatu的摩爾比為1：1.2：4：1.2。
18、上述靶向降解酪氨酸酶的化合物還可以應(yīng)用在酪氨酸酶降解劑中。
19、其中，所述化合物作為酪氨酸酶降解劑在菌類保鮮
應(yīng)用。
20、其中，所述菌類為雙孢菇。
21、專利技術(shù)原理：本專利技術(shù)的靶向降解酪氨酸酶的化合物，一端連接酪氨酸酶抑制劑曲酸，另一端連接圖中所示的疏水標(biāo)簽r。酪氨酸酶疏水多肽的脂肪側(cè)鏈埋在球狀蛋白的內(nèi)部，而親水性氨基酸殘基位于表面。即使是少量增加表面疏水性，可以使蛋白質(zhì)不穩(wěn)定。因此，利用模仿蛋白錯(cuò)誤折疊狀態(tài)是降解蛋白的第一步，本專利技術(shù)是將疏水標(biāo)簽與目標(biāo)蛋白酪氨酸酶結(jié)合，并在蛋白表面上以疏水補(bǔ)丁的形式出現(xiàn)，模仿部分未折疊的蛋白狀態(tài)，然后靶蛋白泛素化后降解目標(biāo)蛋白，化合物不被降解，目標(biāo)蛋白降解后化合物被釋放，繼續(xù)與目標(biāo)蛋白結(jié)合，循環(huán)使用。其中曲酸基團(tuán)為酪氨酸酶的天然抑制劑，可特定的與酪氨酸酶的活性位點(diǎn)結(jié)合，將化合物固定于酶表面，疏水標(biāo)簽r為強(qiáng)疏水基，起到模仿蛋白錯(cuò)誤折疊的作用。
22、有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具有以下顯著優(yōu)點(diǎn)：(1)本專利技術(shù)的靶向降解酪氨酸酶的化合物應(yīng)用在酪氨酸酶降解劑中，能夠在低劑量下顯著降解酪氨酸酶，與抑制劑相比，用量減少70％，高效延緩雙孢菇褐變，有效延長(zhǎng)5-8天貨架期；(2)本專利技術(shù)化合物的制法簡(jiǎn)便高效、反應(yīng)溫和，適合大規(guī)模生產(chǎn)，其反應(yīng)無限速步驟，收率較高，無高溫高壓反應(yīng)，不涉及易制毒易制爆試劑，綠色環(huán)保；(3)本專利技術(shù)化合物應(yīng)用在菌類保鮮
，化合物僅靶標(biāo)于雙孢菇酪氨酸酶，安全可靠。
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【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種靶向降解酪氨酸酶的化合物，其特征在于，所述化合物結(jié)構(gòu)，如式(I)所示：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述Linker為
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物為以下任一：
4.一種權(quán)利要求1所述化合物的制法，其特征在于，當(dāng)Linker為碳數(shù)為0的烷氧基時(shí)，制法為：將曲酸、反應(yīng)物料A、4-二甲氨基吡啶DMAP、溶于N,N-二甲基甲酰胺DMF中，冰浴至0℃；加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺EDC、1-羥基苯并三唑HOBT冰浴反應(yīng)，轉(zhuǎn)室溫反應(yīng)過夜，即得靶向降解酪氨酸酶的化合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制法，其特征在于，反應(yīng)物料A為9-芴乙酸或1-金剛烷乙酸，曲酸：反應(yīng)物料A：EDC:HOBT的摩爾比為1.1-1.3：1：1：1，冰浴反應(yīng)時(shí)間為1～2h。
6.一種權(quán)利要求1所述化合物的制法，其特征在于，當(dāng)Linker為碳數(shù)為2-6的烷氧基時(shí)，制法包括以下步驟：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制法，其特征在于，步驟(1)中，反應(yīng)物料B為N-Boc-乙醇胺或2-(2-Boc-氨基乙氧基)乙醇或(2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯，反應(yīng)物料B：4-甲基苯-1-磺酰氯：DMAP：三乙胺的摩爾比為1：2：0.4：2.5-3；步驟(2)中，曲酸：產(chǎn)物1：Cs2CO3的摩爾比為1：1.2：2，反應(yīng)溫度為50～70℃。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制法，其特征在于，步驟(3)中，HCl的二惡烷的摩爾量為產(chǎn)物2的4倍及以上；步驟(4)中，反應(yīng)物料A為9-芴乙酸或1-金剛烷乙酸，產(chǎn)物3：反應(yīng)物料A：DIPEA：HATU的摩爾比為1：1.1-1.3：4：1.2。
9.一種權(quán)利要求1所述靶向降解酪氨酸酶的化合物在酪氨酸酶降解劑中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述化合物作為酪氨酸酶降解劑在菌類保鮮技術(shù)領(lǐng)域應(yīng)用。
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【技術(shù)特征摘要】
1.一種靶向降解酪氨酸酶的化合物，其特征在于，所述化合物結(jié)構(gòu)，如式(i)所示：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述linker為
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物為以下任一：
4.一種權(quán)利要求1所述化合物的制法，其特征在于，當(dāng)linker為碳數(shù)為0的烷氧基時(shí)，制法為：將曲酸、反應(yīng)物料a、4-二甲氨基吡啶dmap、溶于n,n-二甲基甲酰胺dmf中，冰浴至0℃；加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺edc、1-羥基苯并三唑hobt冰浴反應(yīng)，轉(zhuǎn)室溫反應(yīng)過夜，即得靶向降解酪氨酸酶的化合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制法，其特征在于，反應(yīng)物料a為9-芴乙酸或1-金剛烷乙酸，曲酸：反應(yīng)物料a：edc:hobt的摩爾比為1.1-1.3：1：1：1，冰浴反應(yīng)時(shí)間為1～2h。
6.一種權(quán)利要求1所述化合物的制法，其特征在于，當(dāng)linker為碳數(shù)為2-6的烷...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：曹崇江，楊文添，朱龍，年琳玉，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)藥科大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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