【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及腸道干細胞的培養和應用，具體涉及一種腸道類器官培養系統及其在組合干細胞再生療法的應用。
技術介紹
1、近年來，腸道類器官技術的發展為研究腸道干細胞的功能和命運、評估治療手段對腸道上皮細胞的修復效果以及探索腸道疾病新的治療策略提供了新的工具。腸道類器官是一種由腸道干細胞或隱窩在特定的三維環境中(如培養基質膠)構建形成的微器官，其外觀類似于腸道組織，包含腸道所有成熟的細胞類型，如腸細胞、杯狀細胞、潘氏細胞和腸內分泌細胞等。它們在結構和功能上與體內腸道組織高度相似。相較于傳統的二維細胞培養，腸道類器官能夠更好地模擬腸道組織的結構和功能，包括細胞的空間分布、細胞間的相互作用以及與周圍環境的相互作用等。此外，腸道類器官可以長期體外培養和傳代，遺傳穩定性高，可塑性強，可用于研究遺傳性疾病和細胞分化的機制以及藥物篩選和評價。因此，腸道類器官在腸道疾病研究、藥物研發和精準醫療等方面具有巨大的潛力，并有望在未來基礎醫學和臨床醫學得到更廣泛的應用。
2、腸道干細胞療法是一種新型腸道疾病治療手段，具有調節免疫反應和促進組織再生的潛力。之前研究表明，腸道干細胞可以選擇性地遷移到受損組織和炎癥部位，促進腸道受損上皮的再生和血管生成、改善和調節腸道炎癥、重建腸道屏障和免疫耐受。組合干細胞療法是指將不同類型的干細胞聯合使用，以實現更好的治療效果。例如，將腸道干細胞與間充質干細胞聯合使用，可以促進腸道上皮細胞的修復和再生。不同的干細胞具有不同的干性分化潛能和組織修復能力，組合干細胞療法可以整合不同的干細胞治療優勢，因此在治療腸道疾病方
3、組合干細胞療法作為腸道疾病治療的未來方向，展現出巨大潛力，但仍面臨著諸多挑戰，需要進一步的改進和創新。在干細胞培養和分化方面，干細胞分化成特定細胞類型(如腸道上皮細胞)的效率需要提高，以確保足夠的細胞數量用于治療。現有的培養方法依賴于復雜的培養基和生長因子組合，且需要長時間的培養，導致成本高、操作繁瑣，難以大規模生產用于臨床治療。這限制了組合干細胞療法的應用范圍和可及性。并且干細胞群體之間存在異質性，不同的干細胞可能在分化過程中表現出不同的命運，這可能會影響治療的效果。異質性可能導致移植的細胞無法有效修復受損的腸道組織，或者導致組織功能障礙。
4、傳統干細胞療法通常將干細胞注入患者體內，但由于缺乏精準的靶向手段，細胞難以精準定位受損區域，無法到達目標組織或器官，使得其移植效率低，治療效果不佳，限制了其在修復特定組織損傷修復方面的應用。例如，在克羅恩病或潰瘍性結腸炎等疾病中，受損區域可能分布在腸道不同腸段的不同部位，需要細胞精準移植到這些區域才能有效修復受損組織。
5、在現有的干細胞療法中，免疫抑制劑是常用的輔助藥物，但其副作用大，會導致免疫力下降，增加感染風險，并可能影響其他器官功能。同時，長期使用免疫抑制劑可能會導致機會性感染、腫瘤發生等副作用，這限制了其安全性。此外，生長因子在促進干細胞增殖和分化方面發揮重要作用，但其療效受到細胞類型和微環境的影響，難以保證對所有患者有效，很難得到廣泛普及。
技術實現思路
1、專利技術目的：本專利技術的目的在于構建一種腸道類器官。本專利技術的另一個目的在于提供一種包含腸道類器官和隱窩的組合干細胞。本專利技術還有一個目的在于提供腸道類器官和組合干細胞在制備潰瘍性結腸炎藥物中的應用。
2、技術方案：小腸隱窩和/或腸道類器官在制備治療潰瘍性結腸炎藥物中的應用。
3、所述的應用，所述藥物為腸給藥藥物。
4、小腸隱窩和腸道類器官混懸液的制備方法，包括以下步驟：
5、(1)將嚙齒動物靠近胃的一端10-20cm的小腸去除腸道外部的膜、血管和脂肪、沖洗糞便和腸道內容物；
6、(2)將處理后的腸道置于2-8℃的緩沖液中，反復吹打沖洗，去除雜質；
7、(3)將清洗后的腸道縱向剖開并切割成1-5毫米的小段；
8、(4)向腸道小段中加入溫和細胞解離試劑，搖勻，分離出小腸隱窩；
9、(5)將組織片段重懸于含有bsa的2-8℃的緩沖液中，并用移液管上下吹打；靜置直到大部分腸組織片段沉降到底部，倒掉上清，繼續重復步驟直到上清液澄清；
10、(6)加入含有bsa的2-8℃的緩沖液重懸腸段，使用60-80μm濾網過濾細胞懸液，收集濾液；
11、(7)丟棄濾網，將濾液標記為“餾分1”，置于冰上保存；
12、(8)重復步驟(6)-(7)三次，分別獲得餾分2-4；收集餾分3和4；
13、(9)將餾分3和/或餾分4離心后加入含有bsa的2-8℃的緩沖液中重懸即得隱窩混懸液；或將餾分3和/或餾分4與基質膠混合制成混合液；
14、(10)將混合液滴加到孔板，形成3d立體培養體系基質膠小球，待小球凝固后，加入類器官生長培養基；
15、(11)將孔板置于培養箱中，進行類器官培養即得腸道類器官混懸液。
16、所述的方法，所述嚙齒動物選自鼠類。優選地，所述鼠類為小鼠。
17、所述的方法，所述2-8℃的緩沖液為2-8℃的pbs緩沖液。
18、所述的方法，所述含有bsa的2-8℃的緩沖液中bsa含量為體積比0.05-0.15％。
19、一種腸道類器官再生系統藥物，是將腸道類器官和/或小腸隱窩添加藥學上可接受的輔料制成的腸給藥制劑。
20、一種組合干細胞，是將小腸隱窩和腸道類器官組合。
21、所述的組合干細胞在制備治療潰瘍性結腸炎藥物中的應用。
22、小腸隱窩和腸道類器官聯用在制備治療潰瘍性結腸炎藥物中的應用。
23、一種腸道類器官再生系統的建立方法，包括以下步驟：
24、(1)將嚙齒動物靠近胃的一端10-20cm的小腸去除腸道外部的膜、血管和脂肪、沖洗糞便和腸道內容物；
25、(2)將處理后的腸道置于2-8℃的緩沖液中，反復吹打沖洗，去除雜質；
26、(3)將清洗后的腸道縱向剖開并切割成1-5毫米的小段；
27、(4)向腸道小段中加入溫和細胞解離試劑，搖勻，分離出腸隱窩；
28、(5)將組織片段重懸于含有bsa的2-8℃的緩沖液中，并用移液管上下吹打；靜置直到大部分腸組織片段沉降到底部，倒掉上清，繼續重復步驟直到上清液澄清；
29、(6)加入含有bsa的2-8℃的緩沖液重懸腸段，使用60-80μm濾網過濾細胞懸液，收集濾液；
30、(7)丟棄濾網，將濾液標記為“餾分1”，置于冰上保存；
31、(8)重復步驟(6)-(7)三次，分別獲得餾分2-4；收集餾分3和4本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.小腸隱窩和/或腸道類器官在制備治療潰瘍性結腸炎藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述藥物為腸給藥藥物。
3.一種小腸隱窩和腸道類器官混懸液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述嚙齒動物選自鼠類。
5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述2-8℃的緩沖液為2-8℃的PBS緩沖液。
6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述含有BSA的2-8℃的緩沖液中BSA含量為體積比0.05-0.15％。
7.一種腸道類器官再生系統藥物，其特征在于，是將小腸隱窩和/或腸道類器官添加藥學上可接受的輔料制成的腸給藥制劑。
8.一種組合干細胞，其特征在于，是將小腸隱窩和腸道類器官組合。
9.權利要求8所述的組合干細胞在制備治療潰瘍性結腸炎藥物中的應用。
10.小腸隱窩和腸道類器官聯用在制備治療潰瘍性結腸炎藥物中的應用。
【技術特征摘要】
1.小腸隱窩和/或腸道類器官在制備治療潰瘍性結腸炎藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述藥物為腸給藥藥物。
3.一種小腸隱窩和腸道類器官混懸液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述嚙齒動物選自鼠類。
5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述2-8℃的緩沖液為2-8℃的pbs緩沖液。
6.根據權利要求3所述的方法...
【專利技術屬性】
技術研發人員：郝海平，王東，馮思凱，王意涵，徐學森，李潤，郝珂菡，李雨鐘，王姿棋，
申請(專利權)人：中國藥科大學，
類型：發明
國別省市：
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