【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物工程，具體涉及具有美白功效的重組vii型膠原蛋白及其制備方法和應用。
技術介紹
1、膠原蛋白是人體主要組成物質，具有多種功效，如多種生物學功能、生物相容性、可降解性。分子量在30萬以上，3條肽鏈之間牢固鍵合在一起，人體很難直接消化吸收，必須經消化道的蛋白酶分解成單純的小分子氨基酸后才能被腸道吸收作用。膠原蛋白多肽與膠原相比分子量小，具有很好的生物功能性和較高的透皮性，吸收率可達95％～100％，在化妝品、醫藥和食品等方面有廣泛應用。
2、膠原蛋白小分子多肽易于吸收，透皮性好，可以幫助保持皮膚的彈性和水分，促進皮膚細胞的更新和修復，從而有助于改善膚質，減少皺紋和細紋，在皮膚抗氧化、抗衰、舒緩和美白方面功效顯著。皮膚是人體最大的器官，覆蓋人體整個表面，除接受感覺刺激外，還具有隔離和保護的功能。隨著年齡增長，細胞更新工作變得緩慢，激素變化直接反映在皮膚上。自由基的形成影響正常皮膚老化的速度，通過攻擊皮膚結構，破壞膠原蛋白和彈性纖維，損害水合作用，表現為臉色不佳，皮膚松弛和皺紋的變化。皮膚顏色主要與黑色素含量相關，黑色素在細胞內沉著與黑色素體結構、運輸、酶和轉錄相關因素。針對黑色素的形成原理美白產品作用機理：1)減少外源刺激信號、2)抑制酪氨酸酶活性、3)抑制黑色素合成信號通路、4)抑制黑素小體成熟、5)抑制黑素小體轉運等。傳統藥物包括糖皮質激素、對苯二酚等和氨基汞氯，通過提亮膚色抑制黑素細胞成熟或干擾隨著黑素生成的過程，但其不良反應明顯，包括刺痛感、接觸性皮炎、刺激、高毒性和敏感性。新型美白護膚品原料通過
3、在護膚領域，辣椒素受體(trpv1)和皮膚的灼熱、刺激、敏感、疼痛都有著密切關系。作為一種刺激性靶點，它在敏感性皮膚和炎癥反應中扮演著重要角色。trpv1可激活感覺神經末梢，導致灼燒感和瘙癢感，同時延緩皮膚屏障修復，是引起皮膚不適的一個重要通路。存在于感覺神經末梢和皮膚細胞中，如角質形成細胞、成纖維細胞、肥大細胞和真皮毛細血管的內皮細胞中，并對多種物理和化學刺激原敏感。trpv1受體的拮抗劑，用來緩解因為trpv1被激發引起的皮膚不適感，也是目前化妝品原料和產品的開發熱點。目前對于抑制trpv1受體的成分研究廣泛，針對敏感肌的產品棕櫚酰三肽-8、棕櫚酰四肽-7，都具有抗敏舒緩作用，但體外合成多肽免疫原性低、生產成本高和效果顯現慢。因此，需要開發具有安全性和有效性的膠原多肽。
4、錨定纖維是介導著人體皮膚真表皮黏附的附著結構，其中vii型膠原蛋白(col7)是錨定纖維(afs)的主要成分。vii型膠原蛋白通過與其他類型的膠原蛋白和部分細胞外基質相互作用，將基底層與下面的組織連接起來。在col7缺失的情況下，ecm相關蛋白分泌減少，同時與col1相關的內質網應激增加，tgfβ信號通路升高。col7結構以及表達量的改變都可能會影響與ecm成分相互作用的功能破壞，導致表皮與真皮分離，導致營養不良大皰性表皮松解癥(deb)，與傷口持續不愈合相關。col7是在真皮-表皮交界處組織層粘連蛋白332重新上皮化所必需的，如果缺失將擾亂創面愈合過程中層粘連蛋白332的組織，進而破壞基底角質形成細胞中整合素α6β4的表達，并對層粘連蛋白332/整合素產生負面影響。單一結構col7的缺失會出現細胞炎癥，并促進角質形成細胞驅動的進行性纖維化。成熟牙釉質內層有機基質(dej)中含有大分子col7，牙釉質內嵌的col7纖維不僅有助于牙釉質的結構彈性，而且可能在牙釉質與牙本質的粘接中發揮作用。目前現有的表達vii型膠原蛋白的表達系統不多，原因是哺乳動物細胞培養成本較高，生長周期緩慢，表達量在15-20mg/l，表達量低，雖分泌到上清中，但純化步驟多，產品損失多，無法產業化生產。在大腸表達系統中產量有所提高，但未達到商業化生產的規模，以上兩種表達產量都較低，蛋白穩定性較差易降解，僅限于實驗室研究規模。專利cn?118324898?a以畢赤酵母為重組表達菌株表達vii型膠原蛋白，表達vii型膠原為大分子，具有促細胞增殖、促細胞遷移、促細胞分化效果，在護膚品功效和生物活性分子結合功效上沒有顯示。
5、因此，需要開發具有美白、抗衰、抗皺和舒緩功效的重組小分子膠原蛋白。
技術實現思路
1、針對現有技術中存在的一些不足，本專利技術提供了具有美白功效的重組vii型膠原蛋白及其制備方法和應用；本專利技術通過研究發現了具有美白功效的重組vii型膠原蛋白，并以基因工程技術為手段提高重組vii型膠原蛋白的表達量，以真核畢赤酵母表達系統來進行重組vii型膠原蛋白的表達生產；本專利技術所述重組vii型膠原蛋白在畢赤酵母中均有表達，能夠高效分泌表達于胞外，純化階段不易產生降解，降低了純化的難度；所述重組vii型膠原蛋白具有優良的美白、抗衰、抗皺或舒緩功效，其適用于敏感肌，不會導致皮膚刺激、瘙癢、灼熱，具有很好的實用性。
2、為了達到上述技術目的，本專利技術采用以下技術手段：
3、本專利技術首先提供了具有美白功效的重組vii型膠原蛋白，所述重組vii型膠原蛋白包含美白作用位點的結合位點；所述美白作用位點包括mc1-r、mc4-r、grm6、trpm1或met中的一種或多種。
4、優選地，所述重組vii型膠原蛋白還包含抗衰、抗皺或舒緩功效的一種或多種作用位點的結合位點；
5、抗衰、抗皺或舒緩功效的作用位點包括trpv1、il1r1、mt-co2中的一種或多種。
6、優選地，所述重組vii型膠原蛋白的序列如i或ii所示：
7、i、氨基酸序列如seq?id?no.1、seq?id?no.2、seq?id?no.3或seq?id?no.4所示；
8、ii、在i中的氨基酸序列經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有人膠原蛋白活性的由i衍生的蛋白質。
9、本專利技術還提供了編碼上述具有美白功效的重組vii型膠原蛋白的核酸，所述核酸序列如seq?id?no.5-seq?id?no.8所示。
10、本專利技術還提供了一種重組表達載體，所述重組表達載體包含上述核酸。
11、本專利技術還提供了一種重組工程菌，包括如上所述的核酸分子或如上所述的重組表達載體。
12、優選地，所述重組工程菌的宿主菌包括畢赤酵母、釀酒酵母、漢遜酵母中的其中一種。
13、優選地，所述宿主細胞為畢赤酵母，更優選為gs115-hcpb?ppkex2，保藏編號為cgmccno.25815。
14、優選地，所述重組工程菌保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為cgmcc?no.31991，cgmcc?no.31992。
15、本專利技術還提供了上述具有美白功效的重組vii型膠原蛋白的制備方法，所述制備方法包括：本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.具有美白功效的重組VII型膠原蛋白，其特征在于，所述重組VII型膠原蛋白包含美白作用位點的結合位點；所述美白作用位點包括MC1-R、MC4-R、GRM6、TRPM1或MET中的一種或多種。
2.根據權利要求1所述的具有美白功效的重組VII型膠原蛋白，其特征在于，所述重組VII型膠原蛋白還包含抗衰、抗皺或舒緩功效的一種或多種作用位點的結合位點；
3.根據權利要求1或2所述的具有美白功效的重組VII型膠原蛋白，其特征在于，所述重組VII型膠原蛋白的序列如i或ii所示：
4.編碼權利要求1～3任一項所述具有美白功效的重組VII型膠原蛋白的核酸，其特征在于，所述核酸序列如SEQ?ID?No.5-SEQ?ID?No.8所示。
5.一種重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體包含權利要求4所述的核酸。
6.一種重組工程菌，其特征在于，包括權利要求4所述的核酸或權利要求4所述的重組表達載體。
7.根據權利要求6所述的重組工程菌，其特征在于，所述重組工程菌的宿主菌包括畢赤酵母、釀酒酵母、漢遜酵母中的其中一種。
<...【技術特征摘要】
1.具有美白功效的重組vii型膠原蛋白，其特征在于，所述重組vii型膠原蛋白包含美白作用位點的結合位點；所述美白作用位點包括mc1-r、mc4-r、grm6、trpm1或met中的一種或多種。
2.根據權利要求1所述的具有美白功效的重組vii型膠原蛋白，其特征在于，所述重組vii型膠原蛋白還包含抗衰、抗皺或舒緩功效的一種或多種作用位點的結合位點；
3.根據權利要求1或2所述的具有美白功效的重組vii型膠原蛋白，其特征在于，所述重組vii型膠原蛋白的序列如i或ii所示：
4.編碼權利要求1～3任一項所述具有美白功效的重組vii型膠原蛋白的核酸，其特征在于，所述核酸序列如seq?id?no.5-seq?id?no.8所示。
5.一種重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體包含權利要求4所述的核酸。
6.一種重組工程菌，其特征在于，包括權利要求4所述的核酸或權利要求4所述的重組表達載體。
7.根據權利要求6所述的重組工程菌，其特征在于，所述重組工程菌的宿主菌包括畢赤酵母、釀酒酵母、漢遜酵母中的其中一種。
8.根據權利要求7所述的重組工程菌，其特征在于，所述宿主細胞為畢赤酵母。
9.根據權利要求8所述的重組工程菌，其特征在于，所述宿主細胞為gs115-hcpbppkex2，保藏編號為cgmcc?no.25815。
10.根據權利要求6所述的重組工程菌，其特征在于，所述重組工程菌保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為cgmcc?no.31991，cgmcc?no.31992。
11.權利要求1～3任一項所述具有美白功效的重組vii型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：
12.根據權利要求11所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述重組vii型膠原蛋白包含美白作用位點的結合位點；所述美白作用位點包括mc1-r、mc4-r、grm6、trpm1或met中的一種或多種。
13.根據權利要求12所述的制備方法，其特征在于，所述重組vii型膠原蛋白還包含抗衰、抗皺或...
【專利技術屬性】
技術研發人員：余培麗，王麗萍，李佳佳，陳凱歌，殷同，錢晨明，程鵬飛，錢松，
申請(專利權)人：江蘇創健醫療科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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