【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及生物，尤其涉及一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基及其制備方法。
技術介紹
1、稻曲病(false?smut?of?rice,fsr)是無性階段半知菌亞門綠核菌屬(ustilaginoidea?virens(cooke)tak)引起的水稻穗部真菌性病害，廣泛分布于亞洲、非洲、南美洲、歐洲等水稻主產(chǎn)區(qū)的40多個國家，在中國、菲律賓、日本發(fā)生較重。隨著高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)水稻的大面積推廣，施肥量不斷提高，稻曲病在我國呈逐年加重趨勢，在遼寧、黑龍江、湖南、云南、江蘇、浙江、廣東等省普遍發(fā)生。稻曲病會導致空癟率增加，千粒質(zhì)量下降，降低了水稻產(chǎn)量，給水稻生產(chǎn)帶來了巨大損失。稻曲病菌基因組序列大小約39.4mbp，包含約8426個蛋白編碼基因，平均基因長為1672bp，每個基因平均含有2.6個外顯子和1.6個內(nèi)含子以及25％重復序列。
2、研究表明，在病殘體或田間土壤中越冬的菌核或厚垣孢子是主要的初侵染源。在水稻的灌漿初期或者揚花期，稻曲病菌從谷粒的外稃和內(nèi)稃間隙侵入，在黃熟期的稻穗上形成大于谷粒的稻曲球，其中心為菌絲組織密集構成的白色肉質(zhì)塊，表面覆蓋大量的黃色或墨綠色厚垣孢子，外圍因產(chǎn)生厚垣孢子的菌絲成熟度不同而分為3層。這3層的外層最早成熟，呈墨綠色或橄欖綠色；第2層呈橙黃色；第3層呈黃色。稻曲球的形成，不僅導致了水稻減產(chǎn)，同時可產(chǎn)生嚴重影響稻米品質(zhì)的兩類真菌毒素，一類是屬環(huán)狀多肽類化合物的ustiloxins，另一類是屬雙萘并吡喃酮類化合物的ustilaginoidins。據(jù)報道，u.virens產(chǎn)生的兩類毒素能夠阻止細胞微管蛋白的聚
3、稻曲病菌培養(yǎng)體系目前多采用市場上的商品化培養(yǎng)基，如pda培養(yǎng)基、馬鈴薯蔗糖瓊脂(psa)培養(yǎng)基、脅本哲氏培養(yǎng)基，但稻曲病在這些培養(yǎng)基中生長十分緩慢。由于目前稻曲病菌人工分離培養(yǎng)周期長，分離效率低且容易污染，嚴重制約了稻曲病病原學、致病機理、生物防治等相關研究工作開展。因此，開發(fā)稻曲病菌分離培養(yǎng)基成為解決稻曲病科研工作的首要環(huán)節(jié)，具有及其重要的現(xiàn)實意義。
技術實現(xiàn)思路
1、解決的技術問題：針對現(xiàn)有的稻曲病菌人工分離培養(yǎng)存在的培養(yǎng)周期長、分離效率低且容易污染的缺點，本專利技術提供一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基及其制備方法，該培養(yǎng)基對稻曲病菌的培養(yǎng)效果良好，菌絲生長速率快，對于稻曲病病原學研究及病害防治具有十分重要的意義。
2、技術方案：一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基，每100ml培養(yǎng)基包含蛋白胨1.5-2.5g、蔗糖1.0-2.0g、大米粉1.0-1.5g、稻殼水30-50ml和瓊脂1.5-2.0g；所述培養(yǎng)基的ph值為6-7。
3、上述所述的蛋白胨為大豆蛋白胨。
4、上述所述的大米粉為粳米粉。
5、上述所述的稻殼水由稻殼與水混合后，煮沸30min，雙層紗布過濾，取上清液而得；其中每1g稻殼加水20ml。
6、上述所述的一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基的制備方法，制備步驟如下：將蛋白胨、蔗糖和大米粉加入250ml三角瓶中，添加稻殼水，補足水至100ml刻度線，再添加瓊脂混合均勻，接著用濃度為1％的氫氧化鈉水溶液和濃度為1％的鹽酸水溶液調(diào)節(jié)ph值至6-7，用封口膜包扎瓶口，在121℃的高壓滅菌鍋中滅菌30min，即得稻曲病菌分離培養(yǎng)基。
7、本專利技術培養(yǎng)基中的蛋白胨為大豆蛋白胨，為稻曲病菌絲生長提供所需的氮元素。
8、本專利技術培養(yǎng)基中的大米粉為粳米經(jīng)磨粉機研磨制備得到，大米粉為稻曲病菌菌絲生長提供了碳源，鈣、鉀、鎂、磷等無機鹽，以及維生素a、維生素b1、維生素b2、維生素b6、維生素b12、維生素c、維生素e和維生素k。上述無機鹽和維生素是調(diào)節(jié)微生物正常代謝所必需的。
9、本專利技術培養(yǎng)基中的稻殼水為稻曲病菌絲生長提供鈣、鎂、鐵、銅、鋅等微量元素，起到調(diào)節(jié)微生物細胞生長的作用。
10、有益效果：本專利技術提供的一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基及其制備方法，具有以下有益效果：
11、1.本專利技術的培養(yǎng)基材料易得、成本低、操作簡單。
12、2.本專利技術的培養(yǎng)基對稻曲病菌的培養(yǎng)效果良好，菌絲生長速率快，對于稻曲病病原學研究及病害防治具有十分重要的意義。
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1.一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基，其特征在于：每100mL培養(yǎng)基包含蛋白胨1.5-2.5g、蔗糖1.0-2.0g、大米粉1.0-1.5g、稻殼水30-50mL和瓊脂1.5-2.0g；所述培養(yǎng)基的pH值為6-7。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基，其特征在于：所述蛋白胨為大豆蛋白胨。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基，其特征在于：所述大米粉為粳米粉。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基，其特征在于：所述稻殼水由稻殼與水混合后，煮沸30min，雙層紗布過濾，取上清液而得；其中每1g稻殼加水20mL。
5.如權利要求1所述的一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于制備步驟如下：將蛋白胨、蔗糖和大米粉加入250mL三角瓶中，添加稻殼水，補足水至100mL刻度線，再添加瓊脂混合均勻，接著用濃度為1%的氫氧化鈉水溶液和濃度為1%的鹽酸水溶液調(diào)節(jié)pH值至6-7，用封口膜包扎瓶口，在121℃的高壓滅菌鍋中滅菌30min，即得稻曲病菌分離培養(yǎng)基。
【技術特征摘要】
1.一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基，其特征在于：每100ml培養(yǎng)基包含蛋白胨1.5-2.5g、蔗糖1.0-2.0g、大米粉1.0-1.5g、稻殼水30-50ml和瓊脂1.5-2.0g；所述培養(yǎng)基的ph值為6-7。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基，其特征在于：所述蛋白胨為大豆蛋白胨。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基，其特征在于：所述大米粉為粳米粉。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種稻曲病菌分離培養(yǎng)基，其特征...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：于艷敏，劉海英，徐振華，武洪濤，張書利，高大偉，吳立成，閆平，
申請(專利權)人：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學院生物技術研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
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