【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于細胞培養，涉及一種將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細胞的培養基及培養方法。
技術介紹
1、嗅鞘細胞(oecs)是在功能上介于施旺細胞和少突膠質細胞之間的一種特殊的膠質細胞。oecs不僅可以分泌bdnf、ngf神經營養因子-3(nt3)和ngf神經營養因子-4(nt-4)，還能表達纖粘連蛋白、層粘連蛋白、l1、s100、膠質源性連接素和神經細胞粘附分子，所有這些因子均能支持軸突的延伸。
2、由于oecs分泌神經營養因子、軸突生長刺激物質，能促進軸突的再生和髓鞘的形成，成為促進中樞神經再生的理想候選細胞之一，目前已被大量應用的神經系統疾病，如脊髓損傷，腦損傷，神經退行性疾病等。由于嗅鞘細胞的需求量大，目前的科學研究主要利用動物的嗅球組織提取嗅鞘細胞，該方式效率不高并且不能應用于臨床。另一方面基于人鼻黏膜組織的直接獲取培養嗅鞘細胞的方法復雜且組織來源不便于長期提供。因此急需一種來源方便穩定且未來可應用于臨床的獲取方法。
3、本申請專利技術人前期專利cn109735493b授權了一種誘導嗅黏膜間充質干細胞定向分化為多巴胺能神經元的方法，該專利提示嗅黏膜間充質干細胞可轉化為神經細胞。嗅黏膜間充質干細胞具有多向分化潛能，與嗅鞘細胞同屬外胚層細胞，嗅黏膜間充質干細胞向嗅鞘細胞分化無需跨胚層。
4、嗅黏膜間充質干細胞來源無需反復獲取，取一次鼻黏膜組織可獲得大量嗅黏膜間充質干細胞。因此嗅黏膜間充質干細胞可稱為嗅鞘細胞的穩定來源。
5、因此，目前急需提供一種將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術的目的在于提供一種將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細胞的培養基及培養方法。
2、為了實現上述目的，本專利技術采用以下技術方案：
3、一方面，本專利技術提供一種將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細胞的細胞培養基，所述細胞培養基以dmem/f12為基礎培養基，還包括轉鐵蛋白、胰島素、氫化可的松、硒酸鈉、n-2supplement、nt3。
4、基礎培養基dmem/f12是一種廣泛使用的基礎培養基，提供豐富的營養成分和微量元素，支持細胞的生長和分化，可用于支持很多種類的哺乳動物細胞生長。轉鐵蛋白是一種可以結合和運輸鐵離子的蛋白。嗅黏膜間充質干細胞在誘導分化過程中，需要足夠的能量來進行細胞形態和功能的轉變。轉鐵蛋白所運輸的鐵離子可以維持細胞內外鐵平衡，促進細胞生長與增殖，還能避免細胞外基質中氧自由基的形成。同時，轉鐵蛋白也可能參與細胞的信號轉導過程，對細胞的分化起到間接的調節作用。胰島素在細胞代謝中起重要作用，能夠促進細胞對葡萄糖和氨基酸的吸收、脂肪生成、一價陽離子和磷酸鹽的轉運、蛋白和核酸的合成，并促進細胞增殖。對于嗅黏膜間充質干細胞向嗅鞘細胞的誘導，胰島素能夠促進細胞攝取葡萄糖等營養物質，為細胞的分化提供足夠的能量和物質基礎。此外，胰島素還可以調節細胞的蛋白質合成，幫助細胞構建新的蛋白質結構，這對于細胞形態和功能的轉變是必不可少的。氫化可的松是一種腎上腺皮質激素，具有抗炎和免疫調節作用，能夠幫助維持細胞的穩定狀態和延長細胞壽命。在嗅黏膜間充質干細胞向嗅鞘細胞的誘導過程中，氫化可的松可能調節基因表達。它還可以調節細胞的炎癥反應，減少細胞培養過程中的炎癥干擾，有利于細胞的穩定分化。硒酸鈉中的硒是谷胱甘肽過氧化物酶及其他一些重要酶的輔助因子，具有抗氧化作用，能夠保護細胞免受氧化應激損傷。n-2supplement是一種細胞培養添加劑，主要用于神經細胞的培養。它含有多種成分如飽和轉鐵蛋白、重組胰島素、孕酮等，這些成分可以提供細胞生長所需要的營養物質和信號分子，促進細胞的存活、增殖和分化，有利于嗅黏膜間充質干細胞向嗅鞘細胞的轉化。nt3即神經營養因子3(neurotrophin-3)，是神經營養因子家族成員之一，是促進神經細胞生長發育的重要成分之一。在嗅黏膜間充質干細胞向嗅鞘細胞的誘導過程中，nt3可以刺激細胞的分化，促進細胞向嗅鞘細胞方向轉變。它能夠激活細胞內的一系列信號通路，這些信號通路參與調節細胞的增殖、存活、分化等多種細胞過程，有助于嗅黏膜間充質干細胞更好地分化為嗅鞘細胞。這些成分共同作用，為嗅黏膜間充質干細胞提供了一個適宜的生長和分化環境，從而誘導其向嗅鞘細胞方向分化。
5、優選的，所述細胞培養基以dmem/f12為基礎培養基，還包括轉鐵蛋白0.1～0.5mg/l、胰島素0.5～1.0μl/l、氫化可的松0.5～1.0μl/l、硒酸鈉0.1～0.5μg/ml、n-2supplement0.1～0.5ml/l、nt30.01～0.05μg/l。
6、優選的，所述細胞培養基以dmem/f12為基礎培養基，還包括轉鐵蛋白0.2mg/l、胰島素0.5μl/l、氫化可的松0.8μl/l、硒酸鈉0.4μg/ml、n-2supplement?0.3ml/l、nt30.03μg/l。
7、進一步的，本專利技術還提供一種將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細胞的方法，包括以下步驟：使用所述的細胞培養基培養嗅黏膜間充質干細胞。
8、優選的，所述的方法包括以下步驟：
9、①將嗅黏膜間充質干細胞培養至p2代；
10、②采用胰酶消化細胞，并離心；
11、③去除離心管上清，收集沉淀；
12、④將細胞沉淀與所述的細胞培養基混合均勻，得混合溶液；
13、⑤將混合溶液均勻接種在細胞板內，置于培養箱中培養；
14、⑥培養1天后，去除上清及漂浮的細胞，重新添加所述的細胞培養基，以后定期換液；連續培養14天后獲得嗅鞘細胞。
15、優選的，所述細胞板為六孔板，細胞板中的接種體積為2ml/孔。
16、優選的，步驟②中，所述胰酶的濃度為0.25w/v％，消化時間為30秒，離心轉速為1000rpm，離心時間為5分鐘。
17、優選的，步驟④中，細胞在細胞培養基中的接種密度為105個/ml。
18、優選的，步驟①中，嗅黏膜間充質干細胞采用嗅黏膜間充質干細胞培養基培養至70-80％細胞融合度，得p2代，所述嗅黏膜間充質干細胞培養基由dmem/f12和10v/v％胎牛血清組成。
19、本專利技術涉及一種嗅鞘細胞液，采用上述方法制得，所述嗅鞘細胞表達嗅鞘細胞標志物gfap和s100β，并且其純度達到65％以上。
20、與現有技術相比，本專利技術具有以下有益效果：
21、本專利技術提供一種將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細胞的培養基及培養方法。與現有的技術相比，該培養基原料來源廣泛，培養基成分清晰，通過該方法獲得的細胞表達嗅鞘細胞標志物gfap和s100β，并且其純度達到65％以上。
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1.一種將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細胞的細胞培養基，其特征在于，所述細胞培養基以DMEM/F12為基礎培養基，還包括轉鐵蛋白、胰島素、氫化可的松、硒酸鈉、N-2Supplement、NT3。
2.根據權利要求1所述將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細胞的培養基，其特征在于，所述細胞培養基以DMEM/F12為基礎培養基，還包括轉鐵蛋白0.1～0.5mg/L、胰島素0.5～1.0μL/L、氫化可的松0.5～1.0μL/L、硒酸鈉0.1～0.5μg/ml、N-2Supplement?0.1～0.5mL/L、NT30.01～0.05μg/L。
3.根據權利要求1所述將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細胞的細胞培養基，其特征在于，所述細胞培養基以DMEM/F12為基礎培養基，還包括轉鐵蛋白0.2mg/L、胰島素0.5μL/L、氫化可的松0.8μL/L、硒酸鈉0.4μg/mL、N-2Supplement?0.3mL/L、NT30.03μg/L。
4.一種將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：使用權利要求1～3任一項所述的細胞培養基
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述細胞板為六孔板，細胞板中的接種體積為2mL/孔。
7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟②中，所述胰酶的濃度為0.25w/v％，消化時間為30秒，離心轉速為1000rpm，離心時間為5分鐘。
8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟④中，細胞在細胞培養基中的接種密度為105個/mL。
9.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟①中，嗅黏膜間充質干細胞采用嗅黏膜間充質干細胞培養基培養至70-80％細胞融合度，得P2代，所述嗅黏膜間充質干細胞培養基由DMEM/F12和10v/v％胎牛血清組成。
10.一種嗅鞘細胞液，其特征在于，采用權利要求4～9任一項所述的方法制得，所述嗅鞘細胞表達嗅鞘細胞標志物GFAP和S100β。
...【技術特征摘要】
1.一種將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細胞的細胞培養基，其特征在于，所述細胞培養基以dmem/f12為基礎培養基，還包括轉鐵蛋白、胰島素、氫化可的松、硒酸鈉、n-2supplement、nt3。
2.根據權利要求1所述將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細胞的培養基，其特征在于，所述細胞培養基以dmem/f12為基礎培養基，還包括轉鐵蛋白0.1～0.5mg/l、胰島素0.5～1.0μl/l、氫化可的松0.5～1.0μl/l、硒酸鈉0.1～0.5μg/ml、n-2supplement?0.1～0.5ml/l、nt30.01～0.05μg/l。
3.根據權利要求1所述將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細胞的細胞培養基，其特征在于，所述細胞培養基以dmem/f12為基礎培養基，還包括轉鐵蛋白0.2mg/l、胰島素0.5μl/l、氫化可的松0.8μl/l、硒酸鈉0.4μg/ml、n-2supplement?0.3ml/l、nt30.03μg/l。
4.一種將嗅黏膜間充質干細胞誘導成嗅鞘細...
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